Požadavky na protokoly:

1.      Název skupiny, členové

2.      Princip testu  - Jednoduše popsat vlastními slovy princip testu – stačí pár vět

3.      Výsledky -  zpracovány v přehledné tabulce

4.      Statistika – vyhodnocení dat, graf křivka dávka odpově’d

5.      Závěr – slovní zhodnocení, pokud něco nevyšlo, úvaha proč, kde se stal chyby, kde mohly
nastat problémy, atd.


Počítání chvostoskoků:

-          Stáhněte si tento program , je zdarma: Image tool.

-          http://cme.msu.edu/cmeias/gatewayyes.shtml#yes

-          Našíst obrázek – new picture (F2)

-          Poté počítadlo kliků v horní liště Count a tag – pokaždé když kliknete, zaznačí se vám
červený bod a počítatdo započítá klik. Pozor ! Dvojklik vše zruší!


Statistické vyhodnocení


1)      Vytvořte tabulku: Příklad pro test s roupicí Enchytraeus crypticus

koncetrace mg/kg

                                    Dospělci - počet přeživších

                                   Juvenilové - počet narozených

                                              opak. 1

                                              opak. 2

                                              opak. 1

                                              opak. 2

                                           0 (kontrola)

                                                10

                                                10

                                                321

                                                357

                                                31

                                                10

                                                10

                                                334

                                                329

                                                63

                                                10

                                                 9

                                                327

                                                304

                                                125

                                                 9

                                                 8

                                                241

                                                239

                                                250

                                                 7

                                                 7

                                                179

                                                154

                                                500

                                                 5

                                                 6

                                                58

                                                67

                                               1000

                                                 2

                                                 2

                                                47

                                                40

                                               2000

                                                 1

                                                 0

                                                26

                                                 0

                                               4000

                                                 0

                                                 0

                                                 0

                                                 0


U mortality zapište tzv. survival (= přežívání) počet živých organismů na konci testu.

-          Důvodem je, že v této podobě parametr s narůstající koncentrací klesá, stejně jako u

-          reprodukce.

-          U reprodukce zapište počet juvenilů na konci testu.

-          V programu MS Excel vypočítejte průměrnou hodnotu, směrodatnou odchylku (SD) a

-          relativní směrodatnou odchylku (RSD, tj. koeficient variance, CV, SD dělená

-          průměrem v procentech) pro každou koncentraci pro oba parametry.





GraphPad – výpočet LC50 a EC50


Před exportem do graphpadu, zlogaritmujte sloupec s hodnotami koncentrace – pro vytvoření
sigmoidalní odpovědi

Vytvořte si v excelu jednoduchou tabulku pro export dat:

 (Vytvořte pro dospělce i pro juvenily)


koncentrace

počet juvenilů opak.1

počet juvenilů opak. 2

                                                                                                  0

                                                                                                321

                                                                                                357

                                                                                                 31

                                                                                                334

                                                                                                329

                                                                                                 63

                                                                                                327

                                                                                                304

                                                                                                125

                                                                                                241

                                                                                                239

                                                                                                250

                                                                                                179

                                                                                                154

                                                                                                500

                                                                                                 58

                                                                                                 67

                                                                                               1000

                                                                                                 47

                                                                                                 40

                                                                                               2000

                                                                                                 26

                                                                                                  0

                                                                                               4000

                                                                                                  0

                                                                                                  0


V případě salátu, vypočtete pouze EC50

Tabulka bude vypadat takto: (hodnoty jsou fiktivní), nezapomeňte před analýzou zlogaritmovat osu x
-tzn. Koncentrace!


koncentrace

průměrná délka kořínků v misce č.1

průměrná délka kořínků v misce č.2

                                                                                                  0

                                                                                              31,33

                                                                                               25,6

                                                                                                 63

                                                                                              24,67

                                                                                              25,27

                                                                                                250

                                                                                               10,6

                                                                                               11,6

                                                                                               2000

                                                                                                  5

                                                                                                  6

                                                                                               4000

                                                                                                  0

                                                                                                  0



Další analýzy jsou společné a stejné pro všechny případy – salát, roupice, chvostoskoci (mortalita
dospělců i počet juvenilů)




















Nakopírujte data do Graphpadu aby jste vytvořili takovouto tabulku:





Takto bude vypadat graf pro počet juvenilů











V liště nad grafem je ikonka Analyze – přejděte k výpočtu IC 50

Analyze Data -> XY analyzes -> Non linear regression









Vyberte analýzu:

Dose-response –Inhibition

  -log(inhibitor) vs. Response

= vašimi daty bude proložena křivka a v results bude v tabulce vypsána hodnota IC 50

-          proveďte to samé i pro data na dospělcích (roupice i chvostoskoci) a pro salát