Sara Eliáš



}Využívá sensitivní kamery
}Rozptyl fotonů
}Pozitiva:
◦Práce na makroskopické úrovni → celé tělo malých zvířat
◦Pozorování tkání v neporušeném stavu, za přirozených fyziologických podmínek
◦Nízké fluorescenční pozadí
}Negativa:
◦Vlastní autofluorescence
◦Náročnost na kontrastní látky/zobrazovací sondy
}

Podobně fluorescenční mikroskopii – vhodné filtry, ale jiné úrovně
Umožňuje pozorování tkání v neporušeném stavu a za přorozených fyziologických podmínek X
1.neprůhledná tkáň absorbuje a rozptyluje fotony a vytváří silnou autofluorescenci, což způsobuje
shromažďování temných signálů a jejich kvantifikaci, 2. komplikované in vivo prostředí klade vysoké
nároky na kontrastní látky/zobrazovací sondy – biologicky stabilní, v organismu se musí přednostně
hromadit na cílovém místě

44-135205_IVIS_Spectrum_1000x644.jpg
http://www.perkinelmer.com/catalog/product/id/ivisspe
https://www.youtube.com/watch?v=vKMva9XauBA
http://www.perkinelmer.com/
http://www.perkinelmer.com/corporate/images/137-162813Logo%20382x204.png

}Povrchová, podpovrchová fluorescence
}Světlo neprochází skrz
}Lineární závislost na koncentraci fluorochromu
}Nelineární závislost na hloubce a optických vlastností okolní tkáně
Ntziachristos V., Annu. Rev. Biomed. Eng., 8:1–33

}Světlo svítí skrz tkáň
}Podobné nelineární závislost jako u epi – illumination
}Výsledný obraz je normalizován
}
http://d13geadg2uyg93.cloudfront.net/content/jap/104/3/795/F1.large.jpg?width=800&height=600&carous
el=1
Haller J., et all., 2008, Journal of Applied Physiology

http://jap.physiology.org/content/104/3/795

}Molekuly absorbující v blízké infračervené oblasti (700 – 1000 nm)
}Polymethiny ( aj. polymethines) – pentamethine, heptamethine cyanines
}
Rao J. et al., 2007, Current Opinion in Biotechnology, 18:17–25

Většina tkání generuje malou infračervenou fluorescenci

}
CdMnTeHg/BSA
Morgan N. Y., et all., 2005, Acad Radiol, 2:313–323.

}Váže se na konkrétní cíl
}Složeny ze dvou částí – fluorochromu a ligandu
}Ligand - malé molekuly, proteiny, peptidy, protilátky
Rao J. et al., 2007, Current Opinion in Biotechnology, 18:17–25

Zobrazování tumorů – hodně receptorů

endostatin-Cy5.5
Citrin D., et all., 2004, Molecular Cancer Therapeutics, 3(4):481-8.


}Transparentnost savčích tkání je dána hemoglobinem a melaninem (absorpce v 650 nm) a vodou
(absorpce 900 nm)
}Vyšší poměr signálu k pozadí → vyšší rozlišení
Shcherbakova D. M., et all., 2013, Nature Methods 10, 751–754.
.
iRFP670 (dole v levo)
iRFP713 (noho v pravo)

}Rao J. et al., 2007, Fluorescence imaging in vivo: recent advances, Current Opinion in
Biotechnology, 18:17–25
}Haller J., et all., 2008, Visualization of pulmonary inflammation using noninvasive fluorescence
molecular imagine,  Journal of Applied Physiology, 795-802.
}Morgan N. Y., et all., 2005, Real Time In Vivo Non-invasive Optical Imaging Using Near-infrared
Fluorescent Quantum Dots, Acad Radiol, 2:313–323.
}Citrin D., et all., 2004, In vivo tumor imaging in mice with near-infrared labeled endostatin,
Molecular Cancer Therapeutics, 3(4):481-8.
}Ntziachristos V.,  2006, Fluorescence Molecular Imaging, Annu. Rev. Biomed. Eng., 8:1–33
}Shcherbakova D. M., et all., 2013, Near-infrared fluorescent proteins for multicolor in vivo
imaging, Nature Methods 10, 751–754.
}http://blog.addgene.org/in-living-color-the-skinny-on-in-vivo-imaging-tools
}http://www.perkinelmer.com/catalog/product/id/ivisspe
}https://www.youtube.com/watch?v=vKMva9XauBA
}
}

http://organonet.med.muni.cz/media/62515/vy_09.pdf

}Haller J., et all., 2008, Visualization of pulmonary inflammation using noninvasive fluorescence
molecular imagine,  Journal of Applied Physiology, 795-802.
}Morgan N. Y., et all., 2005, Real Time In Vivo Non-invasive Optical Imaging Using Near-infrared
Fluorescent Quantum Dots, Acad Radiol, 2:313–323.
}Citrin D., et all., 2004, In vivo tumor imaging in mice with near-infrared labeled endostatin,
Molecular Cancer Therapeutics, 3(4):481-8.
}Shcherbakova D. M., et all., 2013, Near-infrared fluorescent proteins for multicolor in vivo
imaging, Nature Methods 10, 751–754.
}Ntziachristos V.,  2006, Fluorescence Molecular Imaging, Annu. Rev. Biomed. Eng., 8:1–33
}http://www.perkinelmer.com/catalog/product/id/ivisspe
}https://www.youtube.com/watch?v=vKMva9XauBA
}http://www.perkinelmer.com/
}
}
}

Sara Eliáš
409310@mail.muni.cz