MIKROSKOPICKÉ HOUBY – Identifikace vláknitých hub rodu Aspergillus


Materiál: Petriho misky s kulturou

Pomůcky: preparační jehla, Petriho miska s CYA (Czapkův agar s kvasničným extraktem), MEA (Agar se
sladovým extraktem), CY20S (Czapkův agar s kvasničným extraktem a 20% sacharosy), termostat

Pracovní postup:

1.     Povrch příslušných médií inokulujeme konidiemi vláknité houby formou vpichu na třech místech
tvořících vrcholy rovnoramenného trojúhelníka (body mají být vzdáleny asi 3 cm od kraje misky). Aby
se spory při očkování nerozptýlily po celé půdě, očkujeme misky zespodu, otočené dnem vzhůru.

2.      Kultivujeme 7 dnů při teplotě 25 a 37 °C.

Schéma inokulace:


     CYA 37°C                                   MEA 25°C                                      CYA
25°C                                        CY20S 25°C







Hodnocení:

po 7 dnech kultivace provedeme vyhodnocení růstu vláknitých hub.

Sledujeme:

Znaky makroskopické
  * rychlost růstu

·        charakter povrchu kolonií

·        barvu kolonie

·        barvu spodní strany kolonie

·        přítomnost pigmentu difundujícího do agaru

·        přítomnost a barvu výpotku (exudát)

·        přítomnost zvláštních útvarů viditelných okem (plodničky, sklerocia, aj.)

·        charakteristický zápach.


V hodnocení vždy uvedeme stáří kultury a použitou kultivační půdu, neboť různé půdy mnohdy
modifikují a značně mění charakteristické znaky (jak makroskopické, tak mikroskopické).


Znaky mikroskopické


Ke zjištění mikroskopických znaků nutných pro identifikaci vláknitých hub potřebujeme kromě
mikroskopu i binokulární lupu. Pod lupou prohlédneme větší struktury (charakter mycelia, sklerocií,
plodniček, tvar konidiální hlavice apod.), pro studium dalších struktur, na nichž je založena
identifikace, připravíme mikroskopický preparát. Jeho příprava a správné posouzení a zhodnocení je
mimořádně důležité, neboť morfologické znaky u vláknitých hub jsou základním diagnostickým
kritériem při určování rodů a druhů. Identifikace do rodu či druhu na základě makroskopických a
mikroskopických morfologických znaků se provádí podle klíčů vypracovaných pro určité taxonomické
skupiny.


Nativní preparát:

Materiál: kultura rodu Aspergillus z izolací

Pomůcky: podložní a krycí skla, preparační jehly, kyselina mléčná, identifikační protokol

Výsledky :  popíšeme makroskopické a mikroskopické morfologické znaky mikromycety. Zápis provedeme
do přiloženého identifikačního protokolu.

Závěr: podle příslušného klíče provedeme identifikaci.


Charakteristické znaky rodu Aspergillus

            Charakteristické pro rod Aspergillus je hlavicovité zakončení konidioforu (obr. 1).
Konidiofor vyrůstá přímo ze substrátu nebo ze vzdušných hyf, na vrcholu se pozvolna nebo náhle
rozšiřuje v měchýřek (kolumelu). Po celém obvodu nebo části měchýřku vyrůstají fialidy
(konidiogenní buňky) a to v jedné nebo ve dvou řadách nad sebou. Měchýřek s fialkami a řetězci
konidií tvoří konidiální hlavici. U některých druhů se vytvářejí na konci vláken nebo interkalárně
zvláštní tlustostěnné buňky zvané „Hülle cells“. Některé druhy vytvářejí mimo konidiálního stádia i
stádium pohlavní s plodničkami.


Obr. 1


Eurotium chevalieri CCM F-6

Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Eurotiomycetes, Eurotiomycetidae, Eurotiales, Trichocomaceae,
Eurotium

a. kleistothecium

b. vřecka

c. askospory s ekvatoriálními prstenci

d. uniseriátní konidiofory

e. konidie