MIKROSKOPICKÉ HOUBY – CVIČENÍ 28.11.

1.         Izolace kvasinek – stanovení počtu živých buněk v 1 g vzorku - metodou roztěrem


Materiál: pekařské droždí

Pomůcky: sterilní fyziologický roztok, špičky, automatické pipety, kultivační médium (GYPA –
Glukose-Pepton Yeast Extract)

Pracovní postup:


1.      Připravíme výchozí suspenzi pekařského droždí ve fyziologického roztoku (desetinásobné
ředění). Homogenizujeme na magnetickém míchadle 3 minuty.  Poté se nechá roztok 30 minut stát a
opět promícháme 2 minuty na míchadle.

2.      Pomocí pipety z výchozí suspenze (10^-1) přeneseme 1 ml do 9 ml fyziologického roztoku.
Dobře promícháme! Tento postup opakujeme až k dosažení ředění 10^-8 (obr. 1).

3.      Z ředění  10^-6,^ 10^-7 a 10^-8 vykápneme pomocí pipety 100 µl na povrch pevného média
(obr. 1) a L-kličkou rozetřeme rovnoměrně po celém povrchu pevného média.

4.      Kultivujeme při teplotě 30 ºC po dobu 2 dnů.

5.      Spočítáme kolonie na Petriho misce.

6.      Výpočítáme hodnotu CFU (Colony Forming Unit)  v 1 g vzorku.





Obr. 2           Stanovení počtu živých buněk v 1 g vzorku -  METODA ROZTĚREM



   1 g                       1 ml                      1 ml                      1
ml                     1 ml                      1 ml                   1 ml                     1
ml







                        1 0^-1                     1 0^-2                      1
0^-3                         1 0^-4                     1 0^-5                      1
0^-6                     1 0^-7                       1 0^-8



                                                    9 ml                        9
ml                           9 ml                        9 ml                        9
ml                        9 ml                        9 ml



                                                                               100 µl
                100 µl                            100 µl