MIKROSKOPICKÉ HOUBY – CVIČENÍ II. 1. Izolace mikroskopických hub stěrem z prostředí Materiál: stěr z prostředí (např. okenní rám, žaluzie, odpadkový koš, klávesnice počítače, aj.) Pomůcky: 2x sterilní vatový tampon, 2x Petriho miska s MEA (agar se sladovým extraktem) + chloramfenikol, termostat na 25 °C Pracovní postup: 1. Sterilní vatový tampón zvlhčíme přetřením povrchu agaru. 2. Sterilním vatovým tampónem přetřeme odběrové místo. 3. Sterilním vatovým tampónem přetřeme celou plochu Petriho misky s MEA. 4. Kultivujeme 7 dnů při teplotě 25 °C. 2. Příprava čisté kultury Materiál: Petriho misky z izolací Pomůcky: preparační jehla, Petriho miska s MEA, termostat na 25 °C Pracovní postup: 1. Preparační jehlou přeneseme část mycelia do středu nové Petriho misky s MEA. 2. Kultivujeme 7 dnů při teplotě 25 °C. 3. Mikroskopie Říše: FUNGI Oddělení: ASCOMYCOTA - vegetativní stélku tvoří přehrádkované mycelium nebo pučivé buňky či pseudomycelium - tvorba sept je centripetální, začíná u stěny hyf a pokračuje ke středu kde ponechá volný pór přepážka - Ascomycota přepážka - Sccharomycetes Diagram illustrating septa of Ascomycota and some mitosporic fungi. Diagram illustrating septa of some mitosporic fungi. Rozmnožování: pohlavní i nepohlavní nebo jen nepohlavní - stádium, kdy houba vytváří nepohlavní mitospory, se nazývá stádium imperfektní (anamorfa) - stádium, kdy houba vytváří pohlavní meiospory, se nazývá stádium perfektní (teleomorfa) Nepohlavní rozmnožování - nejjednodušším způsobem je fragmentace hyf - buňky vznikající exogenně na specializovaných hyfách - konidioforech nazýváme konidie - buňky, které dávají vznik konidiím nazýváme konidiogenní buňky Základní typy konidiogeneze (vzniku konidií): 1. Thalická: již předem vytvořené buňky hyf se rozdělí přehrádkami a rozpadnou se na jednotlivé části. K formování definitivního tvaru dochází po oddělení. a) Thalicko - arthrická: arthrokonidie b) Holothalická: thalokonidie (thalokonidiemi jsou v jistém smyslu i chlamydospory - tlustostěnné přetrvávající buňky vznikající na myceliu) Preparát č.1: Geotrichum candidum CCM 8228 – arthrokonidie v rozpadajících se řetízcích Fungi, Ascomycota, Saccharomycotina, Saccharomycetes, Saccharomycetidae, Saccharomycetales, Dipodascaceae, Geotrichum Preparát č.2: Microsporum gypseum CCM 8342 – thalokonidie (makrokonidie a mikrokonidie) Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Eurotiomycetes, Eurotiomycetidae, Onygenales, Arthrodermataceae, Microsporum Record #7863 2. Blastická: konidie se formuje dříve než je oddělena přepážkou od konidiogenní buňky a) Holoblastická - účast všech vrstev buněčné stěny a) synchronní - produkce více konidií na měchýřku b) sympodiální - proliferace konidiogenní buňky b) Enteroblastická - vnější stěna se protrhne, konidii utváří vnitřní vrstva a) tretická - vznik porokonidií, často s výraznou jizvou na konidiogenní buňce b) phialidická - konidiogenní buňky fialidy c) annelidická - konidiogenní buňky anelidy (límeček) Preparát č.3.: Candida albicans CCM 8215 Fungi, Ascomycota, Saccharomycotina, Saccharomycetes, Saccharomycetidae, Saccharomycetales, Candida - stélka tvořena jednotlivými kulovitými až elipsoidními buňkami (blastokonidiemi) se schopností tvorby pučivého pseudomycelia http://www.usask.ca/biology/kaminskyj/images/BachewichCandida.jpg Preparát č.4: Beauveria bassiana CCM F-295 - sympodiální proliferace konidiogenní buňky Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Sordariomycetes, Hypocreomycetidae, Hypocreales, Cordycipitaceae, Beauveria Preparát č.5: Alternaria citri CCM F-178 – vícebuněčné konidie (porokonidie) Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Dothideomycetes, Pleosporomycetidae, Pleosporales, Pleosporaceae, Alternaria http://www.fomesa.net/Calidad/Variedades/img/P_Alternaria03.jpg Rod Penicillium Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Eurotiomycetes, Eurotiomycetidae, Eurotiales, Trichocomaceae Penicillium vulpinum CCM F-639 – terverticilátní, synemata Preparát č.6: Penicillium chrysogenum CCM 8034 – terverticilátní Preparát č.7: Paecilomyces lilacinus CCM F-589 - konidiofory méně pravidelně větvené, fialidy protáhlé v dlouhý krček, konidie Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Eurotiomycetes, Eurotiomycetidae, Eurotiales, Trichocomaceae, Paecilomyces Rod Aspergillus Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Eurotiomycetes, Eurotiomycetidae, Eurotiales, Trichocomaceae Preparát č.8: Aspergillus flavus CCM 8363 Preparát č.9: Fusarium solani CCM 8014 - konidiofory s monofialidami, makro- a mikrokonidie, chlamydospory, sporodochia (palisáda konidioforů v ložisku na povrchu substrátu) Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Sordariomycetes, Hypocreomycetidae, Hypocreales, Nectriaceae, Fusarium Preparát č.10: Scopulariopsis brevicaulis CCM F-388 - konidiogenní buňky - anelidy, konidie Fungi, Ascomycota, Pezizomycotina, Sordariomycetes, Hypocreomycetidae, Microascales, Microascaceae, Scopulariopsis