Mikroskopické houby - cvičení

1.  Izolace kvasinek stěrem z dutiny ústní - hodnocení


Hodnocení makromorfologie:



































Hodnocení mikromorfologie:


Materiál: kultura kvasinky

I.                  Preparát barvený podle Grama:

Umožňuje podrobné pozorování mykotických organizmů při velkých zvětšeních a odlišení bakteriální
kontaminace.


Pomůcky: podložní skla, kahan, barvící roztoky, očkovací klička


Pracovní postup:

1.      Na podložní sklo naneseme kapku sterilní destilované vody.

2.      Sterilní kličkou nabereme kulturu a rozmícháme v kapce vody.

3.      Preparát usušíme na vzduchu a fixujeme teplem, opakovaným protažením plamenem kahanu.

4.      Fixovaný preparát přelijeme krystalovou violetí a necháme působit 30 sec.

5.      Opláchneme vodou (zbytek vody důkladně setřepat).

6.      Převrstvíme Lugolovým roztokem na 30 sec.

7.      Opláchneme vodou (zbytek vody důkladně setřepat).

8.      Odbarvujeme 95% etanolem, dokud odchází modrá barva (cca 20 – 30 sec.).

9.      Opláchneme vodou (zbytek vody důkladně setřepat).

10.  Dobarvíme zředěným roztokem safraninu 1 – 2 sec.

11.  Opláchneme vodou (zbytek vody důkladně setřepat) a necháme oschnout na vzduchu.

12.  Preparát prohlížíme imerzním objektivem při zvětšení 1000x a více.



II.               Mikromorfologie na agaru s rýžovým extraktem:


Pomůcky: kultura kvasinky, Petriho miska s rýžovým agarem, sterilní krycí skla, preparační jehla,
pinzeta sterilizovaná vypálením, termostat, světelný mikroskop


Pracovní postup:
 1. Kulturu kvasinky naočkujeme krátkým řezem do středu tenké vrstvy agaru.
 2. Přikryjeme sterilním krycím sklem.
 3. Kultivujeme 24 – 48 hodin v termostatu při teplotě 30°C.
 4. Poté kulturu prohlížíme pod mikroskopem.


Kvasinky mají makroskopicky většinou uniformní vzhled. V kultivaci na agaru s rýžovým extraktem lze
identifikovat druh Candida albicans podle kulovitých chlamydospor na koncích vláken (obr. 1).


Obr. 1             Candida
albicans