1 Správná laboratorní praxe Branislav Vrana vrana@recetox.muni.cz Inovace tohoto předmětu je spolufinancována Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky 2 Osnova • porozumět principům GLP a nutnosti jejich dodržování pro zajištění kvality výsledků. • pracovat s příslušnými normami • diskutovat organizace laboratoře a podmínky práce • akreditace zkušebních laboratoří a zkoušení jejich způsobilosti • objasnit validaci zařízení, analytického systému a analytických metod • vysvětlit provozní charakteristiky metod a hodnocením výsledků analýz • realizovat správně odběry vzorků včetně základních technik odběru z homogenních a nehomogenních objektů • navrhovat a vyhodnocovat vzorkovací plán s důrazem na vzorkování složek životního prostředí. • chápat a vysvětlit potřebu GLP v praxi (testování bezpečnosti látek pro člověka a prostředí, mikrobiologie, laboratorní zvířata, léčiva, GMO atd.). 3 ÚVOD GLP = Give me a Lot of Papers! SLP = Spousta Listů Papíru! Zásady správné laboratorní praxe (Zásady) jsou soubor pravidel tvořících systém práce testovacích zařízení při provádění neklinických studií bezpečnosti chemických látek a chemických přípravků. Jedná se tedy o systém kvality, nikoli o „Kodex dobrých mravů chemikových“ D E F I N I C E Smysl SLP • Smyslem Zásad Správné laboratorní praxe OECD (GLP) je zajištění tvorby vysoce kvalitních a spolehlivých testovacích dat týkajících se bezpečnosti chemických látek ve vztahu k lidskému zdraví a životnímu porostředí 6 http://www.labcompliance.com/tutorial/glp/ 7 KVALITA 8 Účel analýzy - příklady • Vytvoření číselné databanky za účelem zjišťování trendů • Přijetí/odmítnutí chemikálie/výrobku před použitím ve výrobním postupu. • Posouzení hodnoty dodávky zboží před zaplacením. • Soudní žaloba na podnik, který prodal výrobek neodpovídající udané specifikaci • Trestní obvinění osoby, u níž byly nalezeny drogy Závažnostdůsledkůchybnéanalýzy 9 ÚVOD DO PROKAZOVÁNÍ KVALITY vymezení důležitých pojmů Kvalita – Dříve používaný pojem „jakost“ byl v roce 2005 nahrazen pojmem „kvalita“ a v roce 2008 implementován do norem ČSN ISO Kvalita je vhodnost pro daný účel Kvalita splňuje nebo dokonce přeplňuje zákazníkovo očekávání. Kvalita je nepřímo úměrná variabilitě výrobku nebo služby. Kvalita je žádoucí/charakteristická vlastnost nebo rysy výrobku/služby, které výrobek nebo služba má mít Cesta ke kvalitě 10 Mezinárodní standardy pro kvalitu zkušebních laboratoří 11 12 Kvalita měření • reprodukovatelnost měření – porovnatelnost měření provedených různými laboratořemi • návaznost měření k primárnímu etalonu Použití referenčních materiálů návazných na základní SI jednotku (kg, mol...) “Návaznost = vlastnost výsledku měření nebo hodnoty etalonu, kterou může být určen vztah k uvedeným referencím, zpravidla národním nebo mezinárodním etalonům, nepřerušeným řetězcem porovnávání, jejichž nejistoty jsou uvedeny” 13 SYSTÉMY KVALITY, ŘÍZENÍ KVALITY A PROKAZOVÁNÍ KVALITY (ČSN EN ISO 9000:2001 Systémy managementu kvality) Řízení kvality – Quality control – plánované činnosti s cílem ověřovat kvalitu měření (operativní) – část managementu kvality zaměřená na plnění požadavků na kvalitu Prokazování kvality – Quality assurance – Soubor opatření, které laboratoř musí podniknout, aby zajistila, že je vždy schopna poskytnout data s vysokou kvalitou. – část managementu kvality zaměřená na poskytování důvěry,že požadavky na kvalitu budou splněny – Interní zabezpečení kvality poskytuje důvěru vedení – externí prokazování jakosti poskytuje důvěru zákazníkovi že se jedná o plánované činnosti navržené tak, aby bylo zjevné, že se řádně používají nástroje řízení kvality 14 Systém kvality Organizační struktura, postupy, procesy a zdroje potřebné k zavedení managementu kvality 15 SYSTÉM KVALITY • Činnosti prokazování a řízení kvality (QA/QC) jsou v organizaci uskutečňovány prostřednictvím souboru postupů prováděných personálem laboratoře při stálém monitorování její činnosti, které by ve svém důsledku měly vést k produkci důvěryhodných dat a k eliminaci příčin nedostatečné spolehlivosti (prevence chyb). Vhodně nastavený vnitřní systém řízení kvality obsahuje – indikativní složku (= včasné odhalení neshody) – kurativní složku (= analýza a odstranění příčin) – zpětnou vazbu (úprava systému tak, aby se zamezil výskyt podobné neshody) 16 5Q – pět pravidel pro celkové zajištění a zlepšování kvality • plánování kvality (QP) – volba analyzátorů, kalibračních a kontrolních materiálů, způsob odběru a přepravy vzorku do laboratoře; • kvalita laboratorního procesu (QLP) – kvalifikace personálu, přístroje a údržba, měřící postupy – úkolem je standardizovat laboratorní činnost; • řízení kvality (QC) – sledování a hodnocení procesů v laboratoři; • zabezpečení kvality (QA) – monitorování činností, označování vzorků, snižování času od dodání vzorku do laboratoře po expedici výsledků (TAT – anglicky turn around time); • zlepšování kvality (QI) – řešení problémů týkajících se kvality, stálé zlepšování procesů Klíčové prvky kvality laboratoře – 5P 17 Eliminace lidských chyb – nesmí „projít ementálem“ 18 19 PŘÍRUČKA KVALITY • laboratorní prostředí; • zařízení; • personál; • požadavky na činidla, kalibrační a kontrolní standardy, referenční materiály; • metody, postupy; • kontrola a vydávání zpráv; • návaznost výsledků; • interní audity a přezkoumání systému; • plány vzdělávání a záznamy. Dokumentem nejvyšší úrovně je příručka jakosti. 20 Úrovně prokazování kvality (QA) • validace a standadisace metod • IQC (vnitřní řízení kvality) – použití referenčních materiálů, regulačních diagramů • ůčast na medzilaboratorních porovnávacích zkouškách • akreditace ISO/IEC 17025 21 Příručky a standardy pro prokazování kvality (QA) Trends in Analytical Chemistry, Vol. 23, No. 8, 2004, 535-552 22 SPRÁVNÁ LABORATORNÍ PRAXE SLP: Správná laboratorní praxe  SLP je systém kvality  Definice: Soubor pravidel tvořících systém práce, za kterých se studie bezpečnosti chemických látek plánují, kontrolují, zaznamenávají, předkládají a archivují.  SLP je někdy zaměňována s normami laboratorní bezpečnosti, jako je nošení ochranných brýlí. Oblasti, v nichž se SLP uplatňuje • Vývoj a testování léčiv • Vývoj a testování pesticidů • Vývoj a testování toxických chemikálií (průmyslových) • Kontrola potravinářských aditiv • Testování látek s ohledem na nebezpečí exploze 24 Conterganová aféra • Thalidomid (obchodní název Contergan) je chemická látka, která má léčivé účinky. Zároveň se jedná o teratogen a karcinogen • Od 50. let 20. st. do začátku 60. let. 20. st. byl ve 46 státech používán jako uklidňující (sedativum) a uspávací látka (hypnotikum) pro těhotné ženy • Medikament užilo asi 5 milionů osob, ve 300 miliónech denních dávek po 100 mg • Předchozími testy nebylo zjištěno, že by látka v pokusech na zvířatech i v rámci klinických studií na dobrovolnících měla negativní vedlejší účinky • Celosvětově se vinou Conterganu narodilo asi 12 000 postižených dětí 25 působí proti ranním nevolnostem silně teratogenní PROČ BYLA VYTVOŘENA SLP ? • Na počátku 70. let se FDA dozvěděla o případech špatné laboratorní praxe po celých Spojených Státech. • FDA se rozhodli udělat hloubkové šetření v 40 toxikologických laboratořích • Zjistili podvodné aktivity a mnoho nevhodných laboratorních postupů • Příklady některých z těchto špatných laboratorních praktik: – Zařízení nebylo kalibrováno pomocí standardů, proto poskytovalo nesprávné výsledky – nesprávné/nepřesné dokumenty o postupech laboratórních studií – Nevhodné testovací systémy Neslavný příklad  Jedna z laboratoří, které byly vyšetřovány, se dostala do hlavních zpráv  Jméno laboratoře bylo Industrial Bio Test. Byla to velká laboratoř, která testovala pro velké firmy jako Procter & Gamble.  Bylo zjištěno, že myši, které používali k testování kosmetiky, jako pleťové mléko a deodoranty dostali rakovinu a uhynuly  Industrial Bio Test zahodili mrtvé myši a skryli výsledky, posoudili produkty za vhodné pro lidskou spotřebu  Zaměstnanci zapojeni do výroby, distribuce a prodeje pro laboratoř nakonec skončili ve vězení Zásady správné laboratorní praxe (Zásady) nesprávné používání z neznalosti zásady správné laboratorní praxe Zásady správné laboratorní praxe (OECD) URČENÍ Zásady jsou určeny pro ta zařízení, která poskytují údaje o nebezpečných vlastnostech chemických látek a chemických přípravků pro účely klasifikace (rozhodování správních orgánů) URČENÍ Správná laboratorní praxe není určena pro testovací zařízení – laboratoře, provádějící rutinní kontrolní analýzy, např. provozní kontroly, analýzy pitných vod nebo ovzduší. 30 Určení SLP 31 SLP je potřebná pro: SLP není nutná pro: Neklinické studie bezpečnosti a vývoj léčiv Základní výzkum Vývoj pesticidních produktů Vývoj nových analytických metod Vývoj toxických chemických láteok Chemické testy používané na odvození specifikací potravinových produktů na trhu Kontrolu potravin (aditiva do potravin) Testování látek s nebezpečím výbušnosti Cíle SLP • SLP zajišťuje, že předložené údaje jsou skutečným odrazem výsledků, které jsou získány během studie. • SLP také zajišťuje, že data jsou sledovatelná. • Podporuje mezinárodní uznání testů 32 Organizace pro hospodářskou spolupráci a rozvoj 33 (Organisation for Economic Co-operation and Development - OECD) - 1948 Organizace pro Evropskou hospodářskou spolupráci (OEEC) - 1961 OECD Nejvyšší orgány - Rada - Výkonný výbor Základní úkoly - Dosáhnout nejvyššího udržitelného hospodářského růstu a zaměstnanosti a zvyšovat životní standard členských zemí při udržení finanční stability - Přispívat k rozumnému zvyšování hospodářství v členských i nečlenských zemích - Přispívat k rozšiřování světového obchodu Zásady SLP Základní dokumenty: No. 1 OECD Principles of Good Laboratory Practice No. 2 Revised Guides for Compliance Monitoring Procedures for GLP No. 3 Revised Guides for the Conduct of Laboratory Inspections and Study Audit Dalších 11 směrnic, které blíže specifikují jednotlivé články dokumentu č. 1 35 HISTORIE Historie Životní prostředí, vliv chemikálií na životní podmínky Kontrolní inspekce a audity studií, nedostatky 70. léta USA, 1976 (návrh), 1978 definitivní zásady FDA (Food and Drug Adnimistration) Historie SLP 37 1973 GLP v legislativě Nového Zélandu a Dánska 1978 předpisy o GLP v USA 1979 EPA GLP standardy 1977 při OECD vytvořena skupina, která má vytvořit mezinárodní pravidla GLP 1981 oficiální schválení OECD principů GLP 1989 schválení dokumentu o vzájemném akceptování dat v souladu s GLP tyto zásady se musí promítnout do legislativy členských států v každé zemi bude ustanoven inspektorát GLP 1998 nové zmodernizované OECD Zásady GLP Historie 1999 převzetí Zásad státy Evropské Unie – 1999/11/EC zásady (2004/10/EC), 1999/12/EC monitorování zásad (2004/9/EC) 1981 rozhodnutí OECD o vzájemném uznávání dat (MAD), zásady tvoří přílohu Evropská unie a SLP 39 - 1992 Maastrichtská dohoda - 1992 EU - 2004 Vstup ČR do EU Nejdůležitější instituce - Komise (výkonný orgán) - Evropský parlament - Rada ministrů -Evropský soudní dvůr Dokumenty pěti kategorií - Nařízení (Regulation), závazné pro členy, nadřazené národním zákonům - Směrnice (Directive), hranice, které se musí přizpůsobit národní legislativa - Rozhodnutí (Decision), závazné jen pro určitého adresáta - Doporučení (Recommendation), návrh nebo rada - Stanovisko (Opinion), nezávazné hledisko EU a Správná laboratorní praxe • EU převzala systém Správné laboratorní praxe OECD a podle tohoto rozhodnutí platí pro členské státy, že: – vypracují národní postupy pro sledování shody se zásadami SLP, – založené na inspekcích testovacích zařízení a auditech studií, – jmenují národní orgán, který bude vykonávat funkce a činnosti – vyžadované postupy pro sledování shody, – budou vyžadovat, aby testovací zařízení vystavovala prohlášení, že studie proběhla podle zásad SLP. 40 Zavádění zásad v ČR Prosinec 1995 vstup ČR do OECD – nutnost zavedení Zásad 1998 – pilotní projekt MJV OECD (leden), MJV Praha listopad 1999 zákon 157/1998 Sb. a vyhláška 305/1998 Sb. 80. léta SPOFA, inspektorát SÚKL (od roku 1991) Zavádění zásad v ČR Legislativa Správnou laboratorní praxi stanovuje hlava III § 18 - 20 zákona č. 350/2011 Sb. a vyhláška č. 163/2012 Sb. ve znění pozdějších předpisů Povinnost testovacích zařízení zavést zásady SLP stanovuje §21 zákon č. 350/2011 Sb. ve znění pozdějších předpisů. 2000 oficiální ustavení Národního inspekčního orgánu ministrem regulačním úřadem je Ministerstvo životního prostředí 43 REACH a Chemický zákon Nařízení č. 1907/2006 (REACH) Nový systém kontroly chemikálií zajistí, aby se nejpozději od roku 2020 používaly pouze chemické látky se známými vlastnostmi a to způsobem, který nepoškozuje životní prostředí a zdraví člověka. Správnou laboratorní praxi stanovuje zákon č. 350/2011 Sb. o chemických látkách a chemických směsích a o změně některých zákonů (chemický zákon) Zavádění zásad v ČR Národní program SLP, prvky postupů monitorování Správné laboratorní praxe http://www.aslab.cz/index.php?id=943 Metody stanovené OECD Vliv na biotický systém Akutní toxicita pro ryby, dafnie, inhibice růstu řas Degradace a akumulace BSK, ChSK Fyzikálně chemické Teplota tání, varu, rozpustnost, hustota Metody stanovené OECD Toxicity – akutní, subakutní, chronické Mutagenita Karcinogenita Reprodukční toxicita, toxikokinetika Vlivy na zdraví ZÁSADY SLP Definice používaných pojmů 48 Pojmy vztahující se k organizaci zkušebního pracoviště: - zkušební pracoviště (osoby, prostory, vybavení) - vedoucí studie (osoba odpovědná za celkovou studii) - plán zajišťování kvality (vnitřní kontrolní systém k zajištění GLP) - standardní operační postupy (podrobné písemné popisy zkoušek) - zadavatel (osoba nebo organizace, která studii zadává a financuje) Pojmy vztahující se ke studii - studie (pokus nebo soustava pokusů k získání požadovaných údajů) - plán studie (dokument stanovující celý rozsah studie) - zkušební systém (použitý ve studii - chemický, biologický, buněčný) - primární údaje (všechny laboratorní záznamy původních pozorování) - testovaný vzorek (materiál odebraný ze studovaného systému ke zkoušce) Pojmy vztahující se ke zkoušené látce: - zkoušená látka (látka nebo směs, která je předmětem zkoumání) - referenční látka (dostatečně definovaná látka sloužící ke srovnání) - šarže (specifické množství látky získané v jediném výrobním cyklu) - vehikulum (nosič, prostředek pro rozpouštění zkoumané látky pro aplikaci) Zákon č. 350/2011 Sb. Chemický zákon Administrativní část Definice Podání žádosti Kontroly Příloha č. 1 – Zásady Příloha č. 2 – Vzor žádosti Příloha č. 3 – Vzor osvědčení Příloha č. 4 – Postupy pro provádění kontrol … Zásady SLP Personál a organizace testovacího zařízení Programy zabezpečování kvality Přístroje, materiál a činidla, zařízení Testovací systémy Standardní operační postupy (SOP) Provedení studie Zpráva o výsledcích studie Archivace záznamů a materiálů 50 Organizace a zaměstnanci Laboranti Ved. anal. Laboranti Chef ryb Laboranti Chef deg. Ved. biol. Laboranti Zást. tox. Ved. tox. Vedoucí laboratoří Vedoucí AA Vedoucí AB Zástupce A Archiv Zástupce B Zabezpečení jakosti Zástupce C Ředitel Vedoucí laboratoří = vedoucí testovacího zařízení Testovací zařízení Organizace a zaměstnanci Archiv Technický personál Vedoucí dílčího zkoušení Vedoucí studie Program zabezpečení jakosti Vedení (vedoucí) testovacího zařízení Organizace a zaměstnanci Určení odpovědnosti za testovací zařízení Kvalifikace zaměstnanců, vhodnost prostor Jmenování vedoucího studie, osoby odpovědné za archiv a program zabezpečení jakosti Vhodnost počítačových systémů, postupy zaručující jejich vhodnost a validaci Evidence studií, uchovávání seznamu (Master Schedule) Vedoucí testovacího zařízení Organizace a zaměstnanci JEDINÁ ŘÍDÍCÍ OSOBA STUDIE Schválení plánu studie Dodržení plánu studie Dokumentace změn Podpis závěrečné zprávy, převzetí odpovědnosti Ostatní zaměstnanci Seznámení se zásadami Vedoucí studie Program zabezpečování kvality Pracovníci zabezpečující jakost Nezávislost na prováděné studii Soulad průběhu studie s plánem – inspekce Kontrola závěrečné zprávy Program zaručující soulad se zásadami, písemný (SOP, příručka jakosti, SMF) Prostory Oddělení prostor pro Skladování Testovací systémy Příjem testovaných položek Prostory pro archivaci Ochrana skladovacích prostor před škůdci, kontaminací a znehodnocením Vhodná velikost, konstrukce, umístění Přístroje, materiály, činidla Neovlivňují testovací systémy Chemikálie, činidla, roztoky - značení Název Koncentrace Exspirace Původ Stabilita Přístroje validované 58 Přístroje, materiály a činidla Přístroje - musí být vhodného typu a přiměřené výkonnosti - vhodné umístění - dobrý technický stav - pravidelné prohlížení, čištění, údržba - pravidelná kalibrace podle SOP - uchovávání záznamů o všech činnostech Materiály - použité ve studii nesmějí mít rušivý vliv na zkušební systém Činidla - musí být příslušně označena - jednoznačný původ, totožnost, koncentrace, datum přípravy, expirace - informace o uchovávání Testovací systémy Odpovídají potřebám studie Konstrukce a kapacita úměrná potřebám Fyzikální a chemické Testovací systémy Řádné podmínky ustájení, ošetřování a manipulace Izolace po příjmu Záznamy o zdroji a dodávce Identifikace Biologické Testované a referenční položky Charakteristické údaje, časové údaje, přijatá a použitá množství Identifikace (CAS, název apod.) Postup ověření totožnosti Vyloučení kontaminace, zabezpečení homogenity a stability Standardní operační postupy Písemné postupy pro práci v laboratoři Definují jak provádět činnosti specifikované v protokolu Nejčastěji psaný v chronologickém seznamu akčních kroků Jsou psány i s ůčelem vysvětlit, jak mají postupy fungovat Standardní operační postupy Písemné SOP schválené vedoucím testovacího zařízení SOP k použití na příslušném místě Dokumentace odchylek SOP zejména pro: Metody Obsluhu, údržbu přístrojů Standardní operační postupy jsou řízená dokumentace Standardní operační postupy Validaci, provozování počítačových systémů Přípravu, značení roztoků Příprava prostorů pro testovací systémy Testovací systémy – příjem, identifikace, péče Vzorky – odběr, manipulace (pitva, histopatologie) Postupy zabezbečení jakosti Vedení záznamů, uchovávání Standardní operační postupy Rutinní kontrola, čištění, údržba, testování a kalibrace Opatření, která je třeba přijmout v reakci na selhání zařízení Provedení studie Pro každou studii Písemný, schválený Standardizovaný pro krátkodobé studie Jednoznačné označení všech položek Průkaznost původu vzorků Dohledatelnost vzorků Provedení podle plánu Plán studie Provedení studie Zpráva o výsledcích studie Standardizovaná pro krátkodobé Podpis vedoucího studie – převzetí odpovědnosti a shoda se zásadami Prohlášení QA – inspekce Odráží primární údaje Místa uchování zprávy, vzorků, primárních údajů Zpráva pro každou studii 68 Dokumentace výsledků studie Každá studie musí být uzavřena závěrečnou zprávou, podepsanou a datovanou vedoucím studie. Jakékoli dílčí zprávy musí být datovány a podepsány. Opravy a doplňky mají mít formu zdůvodněných a datovaných dodatků. Závěrečná zpráva obsahuje: - název zprávy, název a adresa laboratoře - označení zkoušené látky a referenčních materiálů, čistota, stabilita - informace o zkušebním pracovišti, vedoucí studie, případně dílčích studií - data započetí a ukončení - prohlášení útvaru zabezpečování kvality s daty inspekcí, nálezy a hlášením - popis materiálů a zkušebních metod, odkazy na směrnice - souhrn výsledků, všechny informace požadované plánem - vlastní vyhodnocení výsledků, výpočty, statistické metody - hodnocení, diskuse, závěry - archivace, údaje o uložení vzorků, primárních dat a závěrečné zprávy Ukládání a uchovávání Archiv musí být zabezpečen proti vodě, požáru, klimatickým vlivům, bezpečné ukládání! Archiv je prostor nebo vhodné zařízení (skříň, místnost, budova nebo počítačový systém) určené k bezpečnému ukládání záznamů (a materiálů) Pro archivování je samostatná 15. směrnice OECD Ukládání a uchovávání Plán studie, primární údaje, vzorky, písemnosti Záznamy o inspekcích (QAP) Záznamy o údržbě, validační dokumentace SOP z minulých období i platné Záznamy o monitorování prostředí Archivace záznamů a materiálů 10 let Ukládání a uchovávání Řízený přístup Evidence pohybu materiálu Při ukončení činnosti přemístění do archivů zadavatelů (SOP) Dokumentace o předčasné likvidaci vzorků Metody OECD • Jedním z nutných předpokladů pro vzájemné uznávání výsledků je míra jejich hodnověrnosti. Ta je založena na: – práci ve stejném systému jakosti – použití stejných metod. • Zásady SLP jako jediný systém předepisují pro určitý druh zkoušky konkrétní metodu. 72 GLP test guidelines • Pokyny OECD ke zkouškám jsou kolekce mezinárodně dohodnutých zkušebních metod používaných vládoami, v průmyslu a nezávislých laboratořích . Ty se používají k určení bezpečnosti chemických látek a chemických přípravků, včetně pesticidů a průmyslových chemikálií • Metody stanovené OECD lze rozdělit do čtyř základních skupin: – metody fyzikálně chemické – vliv na biotický systém – degradace a akumulace – zdravotní efekty 73 Fyzikálně chemické metody • OECD stanovuje 21 fyzikálně chemických metod. Z hlediska SLP se jedná o typické krátkodobé studie. • Týkají se vlastností látek: – teploty tání – teploty varu – rozdělovacího koeficientu n-oktanol voda – rozpustnosti ve vodě – hustoty kapalin a tuhých látek – viskozity kapalin – dalších 74 Vliv na biotický systém • Testů zkoumání vlivu na biotický systém je předepsáno 17. Jedná se o nejjednodušší testy, ve kterých jsou jako testovací systém použity živé organismy. – stanovení akutní toxicity na rybách – akutní toxicity na dafniích – inhibice růstu řas. 75 Degradace a akumulace • Tato skupina zahrnuje 8 základních testů. – stanovení snadné biologické rozložitelnosti – BSK – ChSK – Zahn-Wellensova metoda (stanovení úplné biologické rozložitelnosti ve vodě rozpustných netěkavých organických látek, při které jsou tyto látky vystaveny účinku vysokých koncentrací mikroorganismů) – další 76 Vlivy na zdraví • Testy zaměřeny na zjišťování nebezpečných vlastností převážně na živých organismech. • Jako testovací systémy jsou používány jak vyšší organismy, tak buňky či mikroorganismy • Patří sem: – akutní toxicita (orální, inhalační, kožní dráždivost) – subakutní toxicita – mutagenita – testování chronické toxicity – Karcinogenita – reprodukční toxicita – toxikokinetika. 77