Stanovení bílkovin dle Bradfordové a stanovení sušiny
1) 24 hod. kulturu zcentrifugujeme a 2x promyjeme fosfátovým pufrem
2)Standardy – bílkoviny
10.000μg/ml 1000μg/ml
3ml + 27 ml pufru
1ml bilk.+4ml p. 2+3 3+2 4+1 5
200μg/ml 400 600 800 1000
3) Měření Genesys
5 ml Coomassie Brilliant Blue G250
0,1 ml pufr pufr
0,1ml
Měření vlastního vzorku
po změření kalibrační přímky
5ml C.B.Blue + 0,1ml vzorku (90% zákal)
- do pozice 2. (1. původní blank) !!!!
Příprava vzorků pro měření sušiny
a koncentrace bílkovin
- resuspendovat promytou kulturu
v malém množství (pár ml) f. pufru
- cca polovinu odlít do erlenky a ředit
na zákal:
95% - sušina (T=5)
90% - bílkoviny
85% - sušina
75% - sušina
Přesnou hodnotu zapíši!!!
Měřím na Spekolu 11 při 620 nm
Ze vzorků na určení sušiny pipetuji
PŘESNĚ 2 ml do předem zvážených
váženek (+pufr)– dám do sušárny 106oC
- po 24 h váženky přijít zvážit!!!!!
Porovnat kultury (obsah bílkovin na sušinu),
určit vztah mezi zákalem a sušinou
Kalibrační
přímka