J12
Základy klinické
parazitologie
VLLM0421c (jaro 2017)
Osnova
●
klasifikace parazitů
●
střevní paraziti
●
krevní paraziti
●
urogenitální paraziti
2/50
Paraziti
●
parazit = organizmus, který ke svému životu
využívá organizmu jiného (bakterie, viry, …)
●
parazit jako předmět zájmu lékařské parazitologie
je zpravidla vyhrazen pro eukaryotické organismy
jiné než houby
●
parazitizmus = vztah dvou organizmů, kdy jeden z
nich (parazit) žije na úkor druhého (hostitel)
3/50
Klasifikace parazitů
●
jednobuněční parazité:
– améby
– bičíkovci a další jednobuněční parazité
●
mnohobuněční parazité
– ploštěnci (Platyhelminthes, „ploší červi“)
●
motolice (motolice, schistosomy)
●
tasemnice (tasemnice bezbranná a dlouhočlenná,
škulovec, tasemnice dětská a rybí, tkáňové
tasemnice, např. měchožilové)
– oblovci („oblí červi“) (roup, škrkavka dětská,
tenkohlavec, škrkavka psí a kočičí a mnohé další)
– členovci (hmyz a roztoči) 4/50
Klasifikace parazitů (2)
●
endoparazité:
– střevní (od lamblií po tasemnice)
– krevní (intra- a extraerytrocytární)
– urogenitální (například bičenky)
– tkáňoví (například toxoplasma)
– ostatní (například oční)
●
ektoparazité (většinou členovci)
●
klasifikace je podstatná pro jejich diagnostiku (např.
u tkáňových parazitů preferujeme nepřímý průkaz,
protože je obtížné najít vhodný vzorek na průkaz
přímý)
5/50
Střevní parazité
●
nejběžnější, mohou způsobit průjmy a jiné nespecifické
problémy (dyspepsie, svědění, únava...)
●
bičíkovci: Giardia (Lamblia) intestinalis
●
améby: Entamoeba histolytica
●
nepatogenní améby: Entamoeba dispar (velmi
podobná patogenní E. histolytica), Entamoeba coli
●
hlístice: roup (Enterobius vermicularis), škrkavka
(Ascaris lumbricoides) a další
●
motolice: Schistostoma sp., Fasciolopsis buski
●
tasemnice: Taenia sp. , Echinococcus sp.
6/50
Enterobius vermicularis
(roup dětský)
●
drobná hlístice (♀: 8–13 mm, ♂: 2–5 mm)
●
dospívá v tlustém střevě, vajíčka klade v okolí
análního otvoru, přenos fekálně-orální, u dětí častá
autoinfekce
●
noční perianální svědění nespavost podrážděnost,→ →
roztěkanost
●
výskyt zejména
v dětských kolektivech
●
léčba: mebendazol
7/50
Enterobius vermicularis
(roup dětský) (2)
8/50
Ascaris lumbricoides
(škrkavka dětská)
●
větší hlístice ( : 20–35 cm, : 15–30 cm)♀ ♂
●
tvarem těla podobná žížale (nemá „opasek“)
●
v tenkém střevě
●
s rostoucím počtem jedinců se příznaky začínají
stupňovat
●
na počátku onemocnění dýchavičnost (larva migrans
poškozuje plíce) a horečka, následují otok, bolest břicha
a průjem, alergické reakce, možné mechanické ucpání
žlučovodu a pankreatu)
9/50
Ascaris lumbricoides
(škrkavka dětská) (2)
●
vývojová stádia
10/50
Ascaris lumbricoides
(škrkavka dětská) (3)
11/50
Ascaris lumbricoides
(škrkavka dětská) (4)
12/50
Toxoplasma gondii
●
kokcidie, parazituje v buňkách člověka i zvířat
●
definitivním hostitelem kočkovité šelmy
●
mezihostitelem většina teplokrevných živočichů
včetně člověka
●
oocysty = infekční stádium (vylučují kočky)
●
tachyzoiti = z oocyst, rychle napadají nervovou a
svalovou tkáň
●
bradyzoiti = z tachyzoitů, klidové intracelulární
stádium (tkáňové cysty)
●
definitivní hostitel se nakazí pozřením masa
obsahující bradyzoity nebo pozřením oocysty
13/50
Toxoplasma gondii (2)
●
akutní toxoplasmóza (subfebrilie, malátnost,
chřipkovité příznaky, lymfadenopatie)
●
nemoc obvykle bez příznaků (může být
asymptomatická generalizovaná lymfadenopatie)
●
intrauterinní infekce plodu (u těhotných, které se s
parazitem dosud nesetkaly hrozí poškození plodu a
abortus)
●
toxoplasmová retinitida
●
u imunokompromitovaných (např. AIDS) může
toxoplazmóza vyvolat závažné poškození CNS
●
spekuluje se o možném ovlivnění chování a rychlosti
reakcí
14/50
Toxoplasma gondii (3)
15/50
Toxoplasma gondii (4)
16/50
oocysta
tachyzoiti
Leishmania sp.
●
intracelulární parazit (fagocyty, především makrofágy)
● přenašečem je drobný dvoukřídlý krevsající hmyz
(koutule, flebotom) rodů Phlebotomus a Lutzomyia
● přes dvacet významných druhů:
– leishmanie „Starého“ a „Nového“ světa
– kožní (L. tropica, L. major; pouze kůže → vředy),
– kožně-slizniční (L. brasiliensis; metastázy do
sliznice)
– viscerální (L. donovani, L. infantum (L. chagasi);
kala azar: z kožní léze do systému → horečky,
anémie, leukopenie, hepatosplenomegalie)
17/50
Leishmania sp. (2)
18/50
Plasmodium sp.
●
nejzávažnější parazitární nákaza ve světě
●
přenašeč komár Anopheles sp. (kladou vajíčka do vody)
●
mezihostitelem plazi, ptáci, savci (vč. člověka)
●
intracelulární vývoj v hepatocytech či erytrocytech
●
P. falciparum (tropika, „maligní terciána“)
●
P. vivax, P. ovale („benigní terciány“) – horečka po 48
hodinách
●
P. malarie (kvartána) – horečka po 72 hodinách
19/50
Plasmodium sp. (2)
●
malarický záchvat = zimnice a třesavka (krátce)
následovaná vysokou horečkou (několik hodin)
●
sporozoit – terminální stádium vývoje v přenašeči,
infekční pro člověka; vzniká z gametocytu v komárovi →
injikováno do krevního řečiště
●
schizont – ze sporozoitů v játrech; podstupuje
schizogonii (nepohlavní rozmnožování rozpadem)
●
merozoit – vzniká rozpadem schizontů; v krevním
řečišti napadají erytrocyty
●
trofozoit – aktivní intracelulární stádium, živící se na
hostiteli, později se vyvine ve schizonta (rozpad)
●
gametocyty – vývoj z trofozoitů, nasaje je komár
20/50
Plasmodium sp. (3)
21/50
Plasmodium sp. (4)
22/50
Trichomonas vaginalis
(bičenka poševní)
●
urogenitální infekce
●
v akutní fázi překrvení a zpěněný žlutozelený výtok
●
v chronické fázi méně výrazné příznaky
●
muži přenašeči (asymptomaticky
nebo mírné příznaky zánětu)
●
jen trofozoit (netvoří cysty)
přenos sexuálně, popř.→
kontaminovanými předměty
(ručník apod.)
23/50
Giardia (Lamblia) intestinalis
(lamblie střevní)
●
střevní nákaza (nejčastějším hostitelem člověk)
●
není schopna pronikat do sliznice a žije pouze v lumen
tenkého střeva
●
přenos alimentární cestou (fekální znečištění pitné
vody; značně odolné cysty)
●
pokryjí sliznici střeva omezení resorpce narušení→ →
trávení
●
průjmové onemocnění
(vodnaté páchnoucí průjmy,
nebývá horečka ani krev
ve stolici)
24/50
Taenia sp.
●
Taenia solium (tasemnice dlouhočlenná)
– mezihostitel prase
– taenióza = přítomnost tasemnic ve střevě
– cysticerkóza = přítomnost larev v orgánech
●
Taenia saginata (tasemnice bezbranná)
– mezihostitel skot
– způsobuje jen taeniózu (nikoli cysticerkózu)
●
rozlišení:
– podle vajíček nelze rozlišit
– větvení dělohy (T. solium málo větvená,
T. saginata hodně větví) nebo PCR či ELISA
25/50
Taenia sp. (2)
T. saginata vs. T. solium
26/50
Odběr materiálu
●
střevní parazitózy kusová stolice (viz dále)
●
tkáňové parazitózy sérum
●
trichomonóza buďto sklíčko na barvení Giemsou
(samotné nebo společně se sklíčkem na barvení
Gramem, tj. jako klasický MOP), nebo výtěr v soupravě
C. A. T. swab
●
průkaz akantaméb použité kontaktní čočky ve své
tekutině (případně lze provést seškrab rohovky)
●
ostatní podle situace (moč, obsah cysty…)
27/50
Odběr stolice
●
nutno zaslat vzorek stolice velikosti lískového ořechu
(na rozdíl od bakteriologie, kde stačí výtěr)
●
nádobka, ve které je zasílán, nemusí být výjimečně
sterilní
●
na rozdíl od vyšetření na izolaci virů vzorek není nutno
chladit
28/50
Odběrové médium C. A. T. na
vaginální a uretrální výtěry na
kvasinky a trichomonády
zde se odběrová tyčinka zalomí,
aby se vešla do zkumavky
29/50
Diagnostické metody parazitologie
●
mikroskopie; nativní preparát, nebo barvení
(trichrom, Giemsovo barvení, Ziehl-Neelsen na střevní
kokcidie)
●
kultivace se používá zřídka (trichomonády a
akantaméby)
●
přímého průkazu pomocí PCR
●
nepřímý průkaz se používá u tkáňových parazitóz,
(toxoplasmózy, toxokarózy apod.)
30/50
Mikroskopie preparátů
●
metoda dle Kato (dobarvení pozadí malachitovou
zelení, aby se paraziti zvýraznili )
●
Faustova metoda je koncentrační (viz dále)
●
Grahamova metoda se používá jen u roupů (viz dále)
●
nativní preparát „sensu stricto“ a barvené preparáty
(např. trichromem) se použijí u zvýšeného podezření na
střevní prvoky (buďto primárně, nebo po prohlédnutí
Fausta a Kato)
●
mikroskopuje se bez imerze, objektivy 10×, 20×,
40×
31/50
Faustova metoda
●
stolice se opakovaně smíchá s roztokem síranu
zinečnatého, centrifuguje a supernatant použije do
dalšího kroku
●
nakonec se roztok doplní až po vršek zkumavky a
překryje krycím sklíčkem
●
paraziti ulpívají na krycím
sklíčku zespodu (viz obrázek)
●
sklíčko se přenese na
podložní sklo (kde je již Kato)
32/50
Mikroskopie preparátů (2)
●
vajíčka červů nalézáme přímo ve Faustově metodě či
v Kato
●
pokud objevíme cystám (nebo trofozoitům) podobné
útvary použijeme:
– nativní preparát, (stolice rozmíchaná v kapce
fyziologického roztoku), po prvním prohlédnutí lze pro
zvýraznění některých struktur přidat Lugolův roztok
– barvení trichromem (používá se fixace alkoholsublimátem
a dále se používá 70% alkohol, vlastní
trichrom, 96% alkohol a karbolxylen nebo
hematoxylin)
– pro kryptosporidia případně ještě barvení dle
Ziehl-Neelsena
33/50
Grahamova metoda
●
speciální průhledná lepicí páska
●
nalepení na perianální řasy odlepení přilepení→ →
na podložní sklíčko
●
jednodušší a výtěžnější než vyšetření stolice
●
použití u dětí
●
u dospělých většinou odběry stolice
34/50
Diagnostika parazitů
●
tlustá kapka
– kapku krve na podložním skle rozetřeme
krouživými pohyby rohem druhého podložního skla
– nefixujeme, necháme zaschnout a rovnou barvíme
●
tenký nátěr
– kapku krve rozetřeme do tenkého nátěru kratší
hranou druhého podložního skla přiloženého v
ostrém úhlu plynulým pohybem do ztracena
– hranu druhého skla klademe za kapku krve a
táhneme jí za sklem, nehrneme ji před ním
– fixujeme metanolem
●
barvíme Giemsou 35/50
Tenký nátěr, tlustá kapka
36/50
Diagnostika trichomonád
●
kultivačně mikroskopické vyšetření
●
odebere se výtěr na tamponu zanořeném do média
C. A. T.
●
médium se nechá kultivovat do druhého dne
●
kapka média se mikroskopuje jako nativní preparát
●
preparáty však nelze uchovat
●
druhý možný způsob – nátěr na sklíčku barvený dle
Giemsy (je-li součástí MOP, označuje se jako MOP V)
●
fluorescenční barvení jen výjimečně
37/50
Diagnostika ostatních
parazitárních nákaz
●
diagnostika ektoparazitů v rukou dermatologa
(popř. i laika, např. vši)
●
tkáňoví paraziti: sérum na nepřímý průkaz (KFR,
ELISA)
●
v některých případech, zejména tropických parazitóz, je
lépe konzultovat odběr a jeho provedení s
laboratoří
●
u některých filarióz se doporučuje provádět odběr
pouze v noci, popř. pouze ve dne
38/50
Úkol 1: Odběry v lékařské
parazitologii
●
pro každou odběrovou soupravu napište její popis
a použití
●
soupravy jsou na bočním stole
39/50
Úkol 2: Mikroskopie střevních
parazitů
●
na bočním stole máte vše k Faustově metodě a
k metodě dle Kato
●
krycí sklíčko z Faustovy koncentrační metody již
bylo pinzetou přesunuto na první polovinu sklíčka
(pokud nebylo, opatrně ho tam přesuňte)
●
na druhé polovině sklíčka již máte preparát dle Kato
(zelený) – sklíčka jsou negativní
●
Grahamova metoda – sklíčka pozitivní
●
mikroskopujte bez imerze, objektivy 10×, 20×, 40×
40/50
Úkol 3: Demonstrace parazitů,
jejich vajíček a životních cyklů
●
úkol 3a: prohlédněte si parazity a zakreslete
●
úkol 3b:
41/50
roup
(Enterobius
vermicularis)
škrkavka
(Ascaris
lumbricoides)
tenkohlavec
(Trichuris
trichiura)
tasemnice
(Taenia sp.)
dále na obrázcích: giardia (cysta a trofozoit)
a článek tasemnice
Úkol 4: Mikroskopie Trichomonas
vaginalis
●
prohlédněte si výtěr z pochvy barvený podle Giemsy
●
v preparátu nalezněte prvoka Trichomonas vaginalis
●
prvok je vejčitého tvaru, cca 10× větší než bakterie,
světle modré barvy s protáhlým karmínově
červeným jádrem
42/50
Úkol 5a: Mikroskopie malarického
tenkého roztěru
●
prohlédněte si preparát a pokuste se zakreslit
pozorované objekty (preparát bude připraven na
promítacím plátně)
43/50
Úkol 5b: Hodnocení stádií parazita
●
vyplňte pole popisků k jednotlivým obrázkům
●
použijte termíny: časný trofozoit, pozdní trofozoit,
schizont, merozoiti, gametocyt
44/50
Úkol 6: Diagnostika Toxoplasma
gondii serologickými testy
●
KFR
– první jamka je test antikomplementarity
– ve druhé je ředění 1 : 5 a pak geometrickou řadou
(1 : 10, 1 : 20, 1 : 40, 1 : 80 etc.)
– nepřítomnost hemolýzy je pozitivní, hemolýza
negativní
●
ELISA
– všechny hodnoty nad (C1+ D1)/2 jsou pozitivní
– A1 je blank, B1 negativní kontrola, E1 pozitivní
kontrola
45/50
Úkol 6: Příběhy k pacientům
●
P: zdravá těhotná s kočkami doma
●
Q: jiná zdravá těhotná, bez koček
●
R: mladá tulačka, bez koček, ale v kontaktu
s jahodami kontaminovanými divou zvěří
●
S: senior, pracoval v zahradě, příznaky retinitidy +
zvětšené uzliny
46/50
Úkol 6: Výsledky
47/50
Pacient KFR ELISA
IgA
ELISA
IgG
Závěr
P 1:10 – + Chráněna
předchozí infekcí
Q 0 –  –  Nechráněna (musí
si dávat pozor)
R 1:160 + + Infekce, léčit
spiramycinem
S 0 – – Navzdory
seronegativitě léčit
kvůli příznakům
Úkol 7: Přehled ektoparazitů
Štěnice Veš dět. Zákožka Blecha Muňka Klíště
Bed bug Louse Itch mite Flea Crab louse Tick
Cimex Pediculus Sarcoptes Pulex Phthirus Ixodes
48/50
myiázy = onemocnění způsobená mušími larvami
Úkol 8: Pozorování Entamoeba
histolytica v barvení trichromem
●
prohlédněte si v mikroskopu pomocí imerze preparát
Entamoeba histolytica, barvený Gomoriho trichromem
●
určené jako Entamoeba histolytica/dispar
(mikroskopicky nelze rozlišit, dourčeno v NRL pomocí
PCR)
●
pokuste se spočítat jádra (E. histolytica má
maximálně čtyři, na rozdíl od E. coli)
●
zakreslete a popište pozorované struktury
49/50
Po tomto cvičení byste měli umět:
●
popsat životní cykly nejběžnějších parazitů, včetně
projevů a diagnostiky onemocnění
●
podrobně vysvětlit možnosti odběrů vzorků v
jednotlivých případech parazitárních nákaz
●
poznat nejběžnější parazity (jejich cysty, trofozoity,
apod.)
50/50