C5855
KALORIMETRIE
ITC & DSC
Jan Novotný
2019
Zdroje
●
Matthew W. Freyer and Edwin A. Lewis: Isothermal Titration Calorimetry: Experimental
Design, Data Analysis, and Probing Macromolecule/Ligand Binding and Kinetic Interactions
●
Jerome M. Fox, Mengxia Zhao, Michael J. Fink, Kyungtae Kang, and George M.
Whitesides: The Molecular Origin of Enthalpy/Entropy Compensation in Biomolecular
Recognition
●
Jose C. Martinez, Javier Murciano-Calles, Eva S. Cobos, Manuel Iglesias-Bexiga, Irene
Luque and Javier Ruiz-Sanz: Isothermal Titration Calorimetry: Thermodynamic Analysis of the
Binding Thermograms of Molecular Recognition Events by Using Equilibrium Models
Na úvod ...
●
Jak se změní rovnovážná konstanta, pokud ΔG vzroste o 1 kcal/mol?G vzroste o 1 kcal/mol?
● Vyjádřete KA komplexace M+L→ML pomocí veličin [L] a ν=LLb/Mt.
●
Jaký je vztah mezi enthalpií a specifickým teplem fázového přechodu?
●
Nakreslete vazebnou isothermu a popište její parametry.
●
Vysvětelete pojem kooperativita v kontextu interakce ligand-receptor.
ITC - Kalorimetrická křivka
ITC – optimalizace experimentu
Vysvětlete účel kalorimetrické
konstanty c=Ln.KA
.[M]t
ITC – vazebná místa
Vyhodnoťte povahu vazebných
míst pro uvedené ITC křivky,
srovnejte KA
a ΔG vzroste o 1 kcal/mol?H.
Hnací síly interakce ΔG vzroste o 1 kcal/mol?G=LΔG vzroste o 1 kcal/mol?H-TΔG vzroste o 1 kcal/mol?S
Vysvětlete, proč je zvýšený
entalpický příspěvek často
kompenzován poklesem
entropického členu.
Vliv pH na KA
Ověřte platnost uvedeného vztahu
popisujícího vliv protonace
makromolekuly(M) na afinitu
interakce s ligandem. Jaký je
význam Kobs
?
Kompetiční titrace
Odvoďte vztah mezi vlastní
asociační konstantou K2
a jejím analogem K2
obs
v přítomnosti slabého
kompetitoru A o afinitě K1
.
Nápověda:
K2
obs
=L[MB]/(([M]+[MX])[B])
DSC
Vysvětlete dle zjednodušeného
schématu rozdíl mezi Cp
nativního
a denaturovaného proteinu.