Patogenní kvasinky
Kvasinkové patogeny
Candida Cryptococcus
Malassezia
Trichosporon
Rhodotorula
Hansenula Torulopsis
Geotrichum
Saccharomyces
> 70-90 % onemocnění kvasinkami jsou kandidózy
> počet druhů působících jako etiologické agens a účastnících se patologických procesů u člověka, se zvyšuje
> forma a závažnost infekce závisí na: -infekčním agens (druh, množství)
- způsobu a bráně infekce
- stavu imunitního systému hostitele
> komenzálové člověka - endogenní infekce (autoinfekce) při porušení homeostázy, vnímavosti a rezistence
> povrchové my kozy - nakažlivé
Povrchové mykózy :
- postihují kůži, nehty, sliznici úst a pochvy
- většinou endogenní, přenos i pohlavním stykem
Candida (albicans) - komenzál
Malassezia furfur (kožní infekce pityriasis versicolor)
Systémové mykózy
(mykózy postihující vnitřní orgány a orgánové
systémy)
Původci: Cryptococcus, Candida
> imunodeficientní pacienti
> pacienti po transplantaci
> Vlastnosti patogenů:
> Mannan (stěnový polysacharid) u kandid a mukopolysacharid pouzdra u Cryptococcus neoformans - potlačují buněčnou imunitu
Diagnostika:
> kombinace  klinického  pozorování a laboratorního vyšetření
> Laboratorní vyšetření:
• mikroskopický průkaz
• kultivační průkaz
• sérologické metody _____
mikroskopický průkaz
povrchové mykózy - šupinky kůže, části nehtů, seškrab kštice s vlasovými kořínky a kožními šupinami
kandidóza - stery sliznic
systémové infekce - vzorky tkání z více míst ^»=^
přímá mikroskopie:
- ve vlhkých preparátech po natrávení tkáně
10-20% hydroxidem draselným
- infekce sliznic - Gramovo barvení
- morfologie buněk
histologické vyšetření
kultivace
většina kvasinek snadno kultivovatelná
- Sabouraudův agar
(glukóza, sladinový agar, hydrolyzát kaseinu + chloramfenikol nebo amikacin + vankomycin)
- Czapek - Doksův agar
- současně při 25 - 30°C a 37°C
- doba kultivace 1 - 5 dnů
- kvasení cukrů a další biochemické testy
(identifikační soupravy)
auxanogram - test na asimilaci cukrů a dusíkatých látek (zdroj C)
zymogram - test na zkvašování cukrů
sérologie
Průkaz specifických protilátek:
(protilátková odpověď slabá) - ELISA
Antimykotika:
kvasinky - eukaryontní buňky - běžná antibakteriální antibiotika jsou neúčinná
Terčové struktury antimykotik:
buněčná stěna plasmatická membrána cytoskelet RNA
Antimykotika —► toxický účinek na hostitele) -kvasinky a plísně jsou eukaryotické buňky jako buňky lidské
Přehled antimykotik:
Imidazolová antimykotika
Ovlivňují cytochrom P-450, netvoří se tak ergosterol Zástupci:
Ketokonazol_ - široké antimykotické spektrum (dermatofyty, kandidy, dimorfní houby, indikace:systémové mykózy a vaginální mykózy
Klotrimazol
Triazolová antimykotika Flukonazol
Polyenová antimykotika
váží na ergosterol plasmatické membrány a způsobují perforace buněčné stěny, působí hlavně na kvasinky a plísně
Zástupci:
Amfotericin B_ - hlavně na kvasinky, plísně a prvoky, Nystatin_ - antimykotikum k lokálnímu užití.
Ostatní systémová antimykotika
Griseofulvin - váže se na mikrotubuly a blokuje mitózu Flucytosin - inhibuje syntézu RNA a DNA a biosyntézu a sekundárně
syntézu proteinů
- Příklady antimykotik
- perorálně: ketokonazol, terbinafin
- parenterálně:
amfotericin B, mikonazol...
(malá vstřebatelnost z trávicího ústrojí)
- parenterálně i perorálně:
flukonazol, itrakonazol, flucytozin... Perorální - podání ústy
Parenterální: nitrožilní (i. v.), nitrosvalové (i. m.), podkožní (s.c.)
azolové deriváty
inhibice syntézy ergosterolu
a) 2-nitroimidazoly :
klotrimazol mikonazol ketokonazol
b) triazoly :
itrakonazol (kandidózy, kryptokokózy) flukonazol kryptokoková meningitida)
- existuje primární i získaná rezistence k azolovým sloučeninám
kyselina benzoová
(Whitfieldova mast) - povrchové mykózy
polyeny
interagují s ergosterolem v plasmatické membráně
nystatin (kandidózy)
amfotericin B (kandidózy, kryptokokózy)
griseofulvin - proti dermatofytům (degradace
cytoskeletu)
kyselina nalidiXOVá (inhibice syntézy DNA)
FlUOropyrimidiny (inhibice syntézy RNA)
Kandicidin (účinek na ergosterol plasmatické
membrány)
další látky toxické vůči kvasinkám:
jodid draselný, kyselina boritá, bazická barviva
kombinace antimykotik:
Povrchové mykózy
Povrchová kandidóza:
- postižení kůže, nehtů, sliznic úst a pochvy (infekce sliznic - „moučnivka")
- 80 - 90% Candida albicans, zbývající případy další druhy (C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis, C. glabrata...)
- 20% lidské populace - C. albicans součást komensální flóry pokožky a sliznic
- výskyt závisí na stavu organismu - bakteriální či virová infekce, těhotenství, aj
25°C
Yeast Levures
37°C
Hypha Hyphe
37°C
^71
5
Pseudohyphae Pseudohyphes
Identifikace:
- Sabouraudův glukózový agar - kvasinková fáze (oválné buňky, 3-8 um), kolonie za 1-2 dny při 25-37°C
- in vivo - směs kvasinkových buněk, pseudomycelia a pravého mycelia
- po obarvení dle Grama: grampozitivní oválné pučící buňky
■ Candida albicans- tvorba
charakteristických klíčků (po 90-120 minutách inkubace v séru při 37°C)
- další identifikace: soupravy, testy fermentace a utilizace cukrů a zdrojů dusíku
Léčení:
- lokální terapie nystatinem, amfotericinem B, mikonazolem
vaginální kandidóza - azolové deriváty, azolové poševní čípky u recidivujících případů
infekce sliznic:
- nejčastější povrchové kandidózy
- na sliznici ohraničené bílé skvrny, mohou splývat a vytvářet pseudomembrány (tvarohový vzhled)
- infekce dutiny ústní:
- bukální sliznice (moučnivka), tvrdé patro, okolí   bílých skvrn zarudlé
- kojenci, staré osoby, osoby se sníženou imunitou (AIDS)
- umělý chrup - infekce pod protézou
infekce kůže a nehtů:
- v tříslech, mezi prsty, v podpažní jamce, pod prsy (v místech vlhké zapářky)
- postižení nehtu a nehtového lůžka - při častém máčení rukou (ošetřovatelky, myčky nádobí)
Candida albicans
štúdium vlivu antibiotika nystatinu na morfológii plasmatické membrány
I
I
pH
T
Genová kontrola morfogeneze u C. albicans
101
\
I
Tec1 y
HSGíi
T T T
PsauííoHYťiftae
RUM
Njüuro Röyiows I Genetics
Role Ca++ v morfogenezi Candida albicans
Localized Ca2+-channel activation caused by localized changes in membrane potential or membrane stretch, results in calcium influx that directs polarized growth
Pityriasis versicolor
- chronická infekce způsobená lipofilní Malassezia furfur
- odbarvené skvrny na kůži M. furfur
- běžný komenzál na kůži, většina infekcí je endogenní
- vyžaduje k růstu lipidy; monopolárně pučící (jediný rod)
- oválné lahvovité buňky, velikost 2-3 x 4-6 |jm, při pityriasis versicolor kvasinkovité buňky s krátkými hyfami
- kultivace - speciální půdy s Tweenem nebo lipidy (37°C)
- podílí se na tvorbě lupů a seboroické dermatitíde
Systémové mykózy
Kryptokokóza:
- způsobuje Cryptococcus neoformans
vytvářející hladké lesklé kolonie, kolem buněk silné pouzdro
- onemocnění CNS a plic
- sporadicky po celém světě, nejčastější u pacientů s AIDS (u 10%)
- prostředí - alkalické substráty bohaté na dusík
Průkaz
mikroskopicky: v mozkomíšním moku a dalším klinickém materiálu - kulovité buňky 2-10 pm
s mukopolysacharidovým pouzdrem (až 60 % izolátů) - po smíšení mozkomíšního moku s tuší se pouzdro jeví jako jasný dvorec kolem buněk
kultivace: - na Sabouradově agaru při 25-30°C a 37°C za 2-3 dny
- smetanově bílé až žlutohnědé mukózní kolonie (neopouzdřené kmeny - suché)
- netvoří pseudomycelium ani mycelium
- nefermentuje cukry, silná produkce ureázy,
asimilace inozitolu
Blastoschizomyces capitatus
(dříve Trichosporon capitatum)
-diseminované infekce
- oslabení neutropeničtí pacienti se zhoubnými lymfomy
- asimilace pouze glukózy a galaktózy
Geotríchum candidum
- infekce u diabetiků, __
imunosuprimovaných osob
Saccharomyces cerevisiae
- sepse a plicní infekce
- izolace z 8,5 % vaginálních mykóz
5
Rhodotorula
- barevné kolonie (oranžové, červené)
- neasimiluje inositol
Dimorfní houby
vláknitá fáze
- většinou saprofytická (průnik přes kůži a sliznice)
kvasinková fáze
- infekční (hluboké infekce tkání a orgánů)
- kvasinkový růst podporují bohatější půdy
(krevní agar) a teplota 35-37°C
- tvorba hyf - teplota 25-30°C
Příkladv mvkóz způsobených
dimorfními kvasinkami
sporotrichosis blastomycosis histoplasmosis
coccidioidomvcosis
Dimorfní patogenní kvasinky		
	Fungus                            In vitro (25° G)                          [n vivo (37ä C)	
	Blastomyces                                               Mů|íJ C^^^ CocCidioides             "^^^                                                       ^^^^^ Spherule	
	Histoptesmv                        ^Z^^^^j Mold                    C^X^ Y^ Paracoccidioides                         ^__Mokr              ^"íá"1' Vea&t	
	Sporothrix CZ^^	
Blastomykóza, kokcidiomykža, sporotrichóza etc.		
Kožní sporotrichóza
Sporothrix schenckii
buňky ve fázovém kontrastu - hyfy a konídie
Sporothrix schenckii
studie buněk freeze fracture technikou
F*
•M
v- m
\    i s
Sporothrix schenckii
Blastomyces dermatitis