1 Správná laboratorní praxe Branislav Vrana vrana@recetox.muni.cz Inovace tohoto předmětu je spolufinancována Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky 2 ÚVOD GLP = Give me a Lot of Papers! SLP = Spousta Listů Papíru! Zásady správné laboratorní praxe (Zásady) jsou soubor pravidel tvořících systém práce testovacích zařízení při provádění neklinických studií bezpečnosti chemických látek a chemických přípravků. Jedná se tedy o systém kvality, nikoli o „Kodex dobrých mravů chemikových“ D E F I N I C E Smysl SLP 5 Farmaceutický průmysl Laboratoř GLP Úřad a společnost Hodnocení bezpečnosti Mezinárodní obchod Smysl SLP Neklinické studie vlivu na zdraví a životní prostředí 6 NE V NEMOCNICI EXPERIMENTY ZDRAVÍ ŽIVOTNÍ PROSTŘEDÍ Conterganová aféra • Thalidomid (obchodní název Contergan) je chemická látka, která má léčivé účinky. Zároveň se jedná o teratogen a karcinogen • Od 50. let 20. st. do začátku 60. let. 20. st. byl ve 46 státech používán jako uklidňující (sedativum) a uspávací látka (hypnotikum) pro těhotné ženy • Medikament užilo asi 5 milionů osob, ve 300 miliónech denních dávek po 100 mg • Předchozími testy nebylo zjištěno, že by látka v pokusech na zvířatech i v rámci klinických studií na dobrovolnících měla negativní vedlejší účinky • Celosvětově se vinou Conterganu narodilo asi 12 000 postižených dětí 7 působí proti ranním nevolnostem silně teratogenní PROČ BYLA VYTVOŘENA SLP ? • Na počátku 70. let se FDA dozvěděla o případech špatné laboratorní praxe po celých Spojených Státech. • FDA se rozhodli udělat hloubkové šetření v 40 toxikologických laboratořích • Zjistili podvodné aktivity a mnoho nevhodných laboratorních postupů • Příklady některých z těchto špatných laboratorních praktik: – Zařízení nebylo kalibrováno pomocí standardů, proto poskytovalo nesprávné výsledky – nesprávné/nepřesné dokumenty o postupech laboratórních studií – Nevhodné testovací systémy Neslavný příklad  Jedna z laboratoří, které byly vyšetřovány, se dostala do hlavních zpráv  Jméno laboratoře bylo Industrial Bio Test. Byla to velká laboratoř, která testovala pro velké firmy jako Procter & Gamble.  Bylo zjištěno, že myši, které používali k testování kosmetiky, jako pleťové mléko a deodoranty dostali rakovinu a uhynuly  Industrial Bio Test zahodili mrtvé myši a skryli výsledky, posoudili produkty za vhodné pro lidskou spotřebu  Zaměstnanci zapojeni do výroby, distribuce a prodeje pro laboratoř nakonec skončili ve vězení Smysl SLP • Smyslem Zásad Správné laboratorní praxe OECD (GLP) je zajištění tvorby vysoce kvalitních a spolehlivých testovacích dat týkajících se bezpečnosti chemických látek ve vztahu k lidskému zdraví a životnímu porostředí 10 http://www.labcompliance.com/tutorial/glp/ Praktické vysvětlení smyslu SLP 11 If experimental work is conducted in compliance with GLP, with or without the aid of computers, it should be possible for an inspector, maybe 4 or 5 years hence, to look at the records of the work and determine easily why, how and by whom the work was done, who was in control (the Study Director), what equipment was used, the results obtained, any problems that were encountered and how they were overcome1. 1Weller, D.L.M., 1988. GLP and quality assurance. Good laboratory practice and computerisation in the analytical laboratory. Anal. Proc. 25, 199. https://doi.org/10.1039/ap9882500199 12 KVALITA 13 Účel analýzy - příklady • Vytvoření číselné databanky za účelem zjišťování trendů • Přijetí/odmítnutí chemikálie/výrobku před použitím ve výrobním postupu. • Posouzení hodnoty dodávky zboží před zaplacením. • Soudní žaloba na podnik, který prodal výrobek neodpovídající udané specifikaci • Trestní obvinění osoby, u níž byly nalezeny drogy Závažnostdůsledkůchybnéanalýzy 14 ÚVOD DO PROKAZOVÁNÍ KVALITY vymezení důležitých pojmů Kvalita – Dříve používaný pojem „jakost“ byl v roce 2005 nahrazen pojmem „kvalita“ a v roce 2008 implementován do norem ČSN ISO Kvalita je vhodnost pro daný účel Kvalita splňuje nebo dokonce přeplňuje zákazníkovo očekávání. Kvalita je nepřímo úměrná variabilitě výrobku nebo služby. Kvalita je žádoucí/charakteristická vlastnost nebo rysy výrobku/služby, které výrobek nebo služba má mít Cesta ke kvalitě 15 Mezinárodní standardy pro kvalitu zkušebních laboratoří 16 17 Kvalita měření • reprodukovatelnost měření – porovnatelnost měření provedených různými laboratořemi • návaznost měření k primárnímu etalonu Použití referenčních materiálů návazných na základní SI jednotku (kg, mol...) “Návaznost = vlastnost výsledku měření nebo hodnoty etalonu, kterou může být určen vztah k uvedeným referencím, zpravidla národním nebo mezinárodním etalonům, nepřerušeným řetězcem porovnávání, jejichž nejistoty jsou uvedeny” 18 SYSTÉMY KVALITY, ŘÍZENÍ KVALITY A PROKAZOVÁNÍ KVALITY (ČSN EN ISO 9000:2001 Systémy managementu kvality) Řízení kvality – Quality control – plánované činnosti s cílem ověřovat kvalitu měření (operativní) – část managementu kvality zaměřená na plnění požadavků na kvalitu Prokazování kvality – Quality assurance – Soubor opatření, které laboratoř musí podniknout, aby zajistila, že je vždy schopna poskytnout data s vysokou kvalitou. – část managementu kvality zaměřená na poskytování důvěry,že požadavky na kvalitu budou splněny – Interní zabezpečení kvality poskytuje důvěru vedení – externí prokazování jakosti poskytuje důvěru zákazníkovi že se jedná o plánované činnosti navržené tak, aby bylo zjevné, že se řádně používají nástroje řízení kvality 19 Systém kvality Organizační struktura, postupy, procesy a zdroje potřebné k zavedení managementu kvality 20 SYSTÉM KVALITY • Činnosti prokazování a řízení kvality (QA/QC) jsou v organizaci uskutečňovány prostřednictvím souboru postupů prováděných personálem laboratoře při stálém monitorování její činnosti, které by ve svém důsledku měly vést k produkci důvěryhodných dat a k eliminaci příčin nedostatečné spolehlivosti (prevence chyb). Vhodně nastavený vnitřní systém řízení kvality obsahuje – indikativní složku (= včasné odhalení neshody) – kurativní složku (= analýza a odstranění příčin) – zpětnou vazbu (úprava systému tak, aby se zamezil výskyt podobné neshody) 21 5Q – pět pravidel pro celkové zajištění a zlepšování kvality • plánování kvality (QP) – volba analyzátorů, kalibračních a kontrolních materiálů, způsob odběru a přepravy vzorku do laboratoře; • kvalita laboratorního procesu (QLP) – kvalifikace personálu, přístroje a údržba, měřící postupy – úkolem je standardizovat laboratorní činnost; • řízení kvality (QC) – sledování a hodnocení procesů v laboratoři; • zabezpečení kvality (QA) – monitorování činností, označování vzorků, snižování času od dodání vzorku do laboratoře po expedici výsledků (TAT – anglicky turn around time); • zlepšování kvality (QI) – řešení problémů týkajících se kvality, stálé zlepšování procesů Klíčové prvky kvality laboratoře – 5P 22 Eliminace lidských chyb – nesmí „projít ementálem“ 23 24 PŘÍRUČKA KVALITY • laboratorní prostředí; • zařízení; • personál; • požadavky na činidla, kalibrační a kontrolní standardy, referenční materiály; • metody, postupy; • kontrola a vydávání zpráv; • návaznost výsledků; • interní audity a přezkoumání systému; • plány vzdělávání a záznamy. Dokumentem nejvyšší úrovně je příručka jakosti. 25 Úrovně prokazování kvality (QA) • validace a standadisace metod • IQC (vnitřní řízení kvality) – použití referenčních materiálů, regulačních diagramů • ůčast na medzilaboratorních porovnávacích zkouškách • akreditace ISO/IEC 17025 26 Příručky a standardy pro prokazování kvality (QA) Trends in Analytical Chemistry, Vol. 23, No. 8, 2004, 535-552 27 SPRÁVNÁ LABORATORNÍ PRAXE Zásady správné laboratorní praxe (Zásady) nesprávné používání z neznalosti zásady správné laboratorní praxe Zásady správné laboratorní praxe (OECD) URČENÍ Zásady jsou určeny pro ta zařízení, která poskytují údaje o nebezpečných vlastnostech chemických látek a chemických přípravků pro účely klasifikace (rozhodování správních orgánů) URČENÍ Správná laboratorní praxe není určena pro testovací zařízení – laboratoře, provádějící rutinní kontrolní analýzy, např. provozní kontroly, analýzy pitných vod nebo ovzduší. 30 Určení SLP 31 SLP je potřebná pro: SLP není nutná pro: Neklinické studie bezpečnosti a vývoj léčiv Základní výzkum Vývoj pesticidních produktů Vývoj nových analytických metod Vývoj toxických chemických láteok Chemické testy používané na odvození specifikací potravinových produktů na trhu Kontrolu potravin (aditiva do potravin) Testování látek s nebezpečím výbušnosti SLP: Správná laboratorní praxe  SLP je systém kvality  Definice: Soubor pravidel tvořících systém práce, za kterých se studie bezpečnosti chemických látek plánují, kontrolují, zaznamenávají, předkládají a archivují.  SLP je někdy zaměňována s normami laboratorní bezpečnosti, jako je nošení ochranných brýlí. Cíle SLP • SLP zajišťuje, že předložené údaje jsou skutečným odrazem výsledků, které jsou získány během studie. • SLP také zajišťuje, že data jsou sledovatelná. • Podporuje mezinárodní uznání testů 33 Oblasti, v nichž se SLP uplatňuje • Vývoj a testování léčiv • Vývoj a testování pesticidů • Vývoj a testování toxických chemikálií (průmyslových) • Kontrola potravinářských aditiv • Testování látek s ohledem na nebezpečí exploze 34 Typické studie podle zásad SLP • fyzikálně-chemické testování • studie toxicity • studie mutagenity • studie environmentální toxicity vodních a suchozemských organismů • studie osudu látek ve vodě, půdě a ovzduší; bioakumulace • studie ke stanovení reziduí pesticidů v potravinách nebo krmivech pro zvířata • studie účinků na mezokosmy a přírodní ekosystémy • testy v oblasti analytické a klinické chemie 35 36 HISTORIE Historie Životní prostředí, vliv chemikálií na životní podmínky Kontrolní inspekce a audity studií, nedostatky 70. léta USA, 1976 (návrh), 1978 definitivní zásady FDA (Food and Drug Adnimistration) Historie SLP 38 1973 GLP v legislativě Nového Zélandu a Dánska 1978 předpisy o GLP v USA 1979 EPA GLP standardy 1977 při OECD vytvořena skupina, která má vytvořit mezinárodní pravidla GLP 1981 oficiální schválení OECD principů GLP 1989 schválení dokumentu o vzájemném akceptování dat v souladu s GLP tyto zásady se musí promítnout do legislativy členských států v každé zemi bude ustanoven inspektorát GLP 1998 nové zmodernizované OECD Zásady GLP Organizace pro hospodářskou spolupráci a rozvoj 39 (Organisation for Economic Co-operation and Development - OECD) - 1948 Organizace pro Evropskou hospodářskou spolupráci (OEEC) - 1961 OECD Nejvyšší orgány - Rada - Výkonný výbor Základní úkoly - Dosáhnout nejvyššího udržitelného hospodářského růstu a zaměstnanosti a zvyšovat životní standard členských zemí při udržení finanční stability - Přispívat k rozumnému zvyšování hospodářství v členských i nečlenských zemích - Přispívat k rozšiřování světového obchodu Zásady SLP Základní dokumenty: No. 1 OECD Principles of Good Laboratory Practice No. 2 Revised Guides for Compliance Monitoring Procedures for GLP No. 3 Revised Guides for the Conduct of Laboratory Inspections and Study Audit Dalších 11 směrnic, které blíže specifikují jednotlivé články dokumentu č. 1 Historie 1999 převzetí Zásad státy Evropské Unie – 1999/11/EC zásady (2004/10/EC), 1999/12/EC monitorování zásad (2004/9/EC) 1981 rozhodnutí OECD o vzájemném uznávání dat (MAD), zásady tvoří přílohu Evropská unie a SLP 42 - 1992 Maastrichtská dohoda - 1992 EU - 2004 Vstup ČR do EU Nejdůležitější instituce - Komise (výkonný orgán) - Evropský parlament - Rada ministrů - Evropský soudní dvůr Dokumenty pěti kategorií - Nařízení (Regulation), závazné pro členy, nadřazené národním zákonům - Směrnice (Directive), hranice, které se musí přizpůsobit národní legislativa - Rozhodnutí (Decision), závazné jen pro určitého adresáta - Doporučení (Recommendation), návrh nebo rada - Stanovisko (Opinion), nezávazné hledisko EU a Správná laboratorní praxe • EU převzala systém Správné laboratorní praxe OECD a podle tohoto rozhodnutí platí pro členské státy, že: – vypracují národní postupy pro sledování shody se zásadami SLP, – založené na inspekcích testovacích zařízení a auditech studií, – jmenují národní orgán, který bude vykonávat funkce a činnosti – vyžadované postupy pro sledování shody, – budou vyžadovat, aby testovací zařízení vystavovala prohlášení, že studie proběhla podle zásad SLP. 43 Zavádění zásad v ČR Prosinec 1995 vstup ČR do OECD – nutnost zavedení Zásad 1998 – pilotní projekt MJV OECD (leden), MJV Praha listopad 1999 zákon 157/1998 Sb. a vyhláška 305/1998 Sb. 80. léta SPOFA, inspektorát SÚKL (od roku 1991) Zavádění zásad v ČR Legislativa Správnou laboratorní praxi stanovuje hlava III § 18 - 20 zákona č. 350/2011 Sb. a vyhláška č. 163/2012 Sb. ve znění pozdějších předpisů Povinnost testovacích zařízení zavést zásady SLP stanovuje §21 zákon č. 350/2011 Sb. ve znění pozdějších předpisů. 2000 oficiální ustavení Národního inspekčního orgánu ministrem regulačním úřadem je Ministerstvo životního prostředí 46 REACH a Chemický zákon Nařízení č. 1907/2006 (REACH) Nový systém kontroly chemikálií zajistí, aby se nejpozději od roku 2020 používaly pouze chemické látky se známými vlastnostmi a to způsobem, který nepoškozuje životní prostředí a zdraví člověka. Správnou laboratorní praxi stanovuje zákon č. 350/2011 Sb. o chemických látkách a chemických směsích a o změně některých zákonů (chemický zákon) Zavádění zásad v ČR Národní program SLP, prvky postupů monitorování Správné laboratorní praxe http://www.aslab.cz/index.php?id=943 Zavedení systému kvality v laboratoři • Volba vhodného systému kvality • Určení pracovníka odpovědeného za implementaci systému kvality (manažer kvality) • Vyčlenění zdrojů pro zavedení systému kvality • Vypracování potřebné podklady (výber norem, postupů) a dokumentace • Zabezpečení školení pracovníků o požadavcích systému kvality • Provedení sebahodnocení laboratoře • Volba certifikační nebo akreditační organizace, znát její požadavky • Podrobit se procesu akreditace nebo certifikace externí organizací 48 ZÁSADY SLP Definice používaných pojmů 50 Pojmy vztahující se k organizaci zkušebního pracoviště: - zkušební pracoviště (osoby, prostory, vybavení) - vedoucí studie (osoba odpovědná za celkovou studii) - plán zajišťování kvality (vnitřní kontrolní systém k zajištění GLP) - standardní operační postupy (podrobné písemné popisy zkoušek) - zadavatel (osoba nebo organizace, která studii zadává a financuje) Pojmy vztahující se ke studii - studie (pokus nebo soustava pokusů k získání požadovaných údajů) - plán studie (dokument stanovující celý rozsah studie) - zkušební systém (použitý ve studii - chemický, biologický, buněčný) - primární údaje (všechny laboratorní záznamy původních pozorování) - testovaný vzorek (materiál odebraný ze studovaného systému ke zkoušce) Pojmy vztahující se ke zkoušené látce: - zkoušená látka (látka nebo směs, která je předmětem zkoumání) - referenční látka (dostatečně definovaná látka sloužící ke srovnání) - šarže (specifické množství látky získané v jediném výrobním cyklu) - vehikulum (nosič, prostředek pro rozpouštění zkoumané látky pro aplikaci) Zákon č. 350/2011 Sb. Chemický zákon Administrativní část Definice Podání žádosti Kontroly Příloha č. 1 – Zásady Příloha č. 2 – Vzor žádosti Příloha č. 3 – Vzor osvědčení Příloha č. 4 – Postupy pro provádění kontrol … Prvky zásad SLP Personál a organizace testovacího zařízení Programy zabezpečování kvality Přístroje, materiál a činidla, zařízení Testovací systémy Standardní operační postupy (SOP) Provedení studie Zpráva o výsledcích studie Archivace záznamů a materiálů 52 Organizace a zaměstnanci Laboranti Ved. anal. Laboranti Chef ryb Laboranti Chef deg. Ved. biol. Laboranti Zást. tox. Ved. tox. Vedoucí laboratoří Vedoucí AA Vedoucí AB Zástupce A Archiv Zástupce B Zabezpečení jakosti Zástupce C Ředitel Vedoucí laboratoří = vedoucí testovacího zařízení Testovací zařízení Organizace a zaměstnanci Archiv Technický personál Vedoucí dílčího zkoušení Vedoucí studie Program zabezpečení jakosti Vedení (vedoucí) testovacího zařízení Organizace a zaměstnanci Určení odpovědnosti za testovací zařízení Kvalifikace zaměstnanců, vhodnost prostor Jmenování vedoucího studie, osoby odpovědné za archiv a program zabezpečení jakosti Vhodnost počítačových systémů, postupy zaručující jejich vhodnost a validaci Evidence studií, uchovávání seznamu (Master Schedule) Vedoucí testovacího zařízení Organizace a zaměstnanci JEDINÁ ŘÍDÍCÍ OSOBA STUDIE Schválení plánu studie Dodržení plánu studie Dokumentace změn Podpis závěrečné zprávy, převzetí odpovědnosti Ostatní zaměstnanci Seznámení se zásadami Vedoucí studie Program zabezpečování kvality Pracovníci zabezpečující kvalitu Nezávislost na prováděné studii Soulad průběhu studie s plánem – inspekce Kontrola závěrečné zprávy Program zaručující soulad se zásadami, písemný (SOP, příručka kvality, SMF) Prostory Oddělení prostor pro Skladování Testovací systémy Příjem testovaných položek Prostory pro archivaci Ochrana skladovacích prostor před škůdci, kontaminací a znehodnocením Vhodná velikost, konstrukce, umístění Přístroje, materiály, činidla Neovlivňují testovací systémy Chemikálie, činidla, roztoky - značení Název Koncentrace Expirace Původ Stabilita Přístroje validované 60 Přístroje, materiály a činidla Přístroje - musí být vhodného typu a přiměřené výkonnosti - vhodné umístění - dobrý technický stav - pravidelné prohlížení, čištění, údržba - pravidelná kalibrace podle SOP - uchovávání záznamů o všech činnostech Materiály - použité ve studii nesmějí mít rušivý vliv na zkušební systém Činidla - musí být příslušně označena - jednoznačný původ, totožnost, koncentrace, datum přípravy, expirace - informace o uchovávání Testovací systémy Odpovídají potřebám studie Konstrukce a kapacita úměrná potřebám Fyzikální a chemické Testovací systémy Řádné podmínky ustájení, ošetřování a manipulace Izolace po příjmu Záznamy o zdroji a dodávce Identifikace Biologické Testované a referenční položky Charakteristické údaje, časové údaje, přijatá a použitá množství Identifikace (CAS, název apod.) Postup ověření totožnosti Vyloučení kontaminace, zabezpečení homogenity a stability Standardní operační postupy Písemné postupy pro práci v laboratoři Definují jak provádět činnosti specifikované v protokolu Nejčastěji psaný v chronologickém seznamu akčních kroků Jsou psány i s ůčelem vysvětlit, jak mají postupy fungovat Standardní operační postupy Písemné SOP schválené vedoucím testovacího zařízení SOP k použití na příslušném místě Dokumentace odchylek SOP zejména pro: Metody Obsluhu, údržbu přístrojů Standardní operační postupy jsou řízená dokumentace Standardní operační postupy Validaci, provozování počítačových systémů Přípravu, značení roztoků Příprava prostorů pro testovací systémy Testovací systémy – příjem, identifikace, péče Vzorky – odběr, manipulace (pitva, histopatologie) Postupy zabezbečení jakosti Vedení záznamů, uchovávání Standardní operační postupy Rutinní kontrola, čištění, údržba, testování a kalibrace Opatření, která je třeba přijmout v reakci na selhání zařízení Provedení studie Pro každou studii Písemný, schválený Standardizovaný pro krátkodobé studie Jednoznačné označení všech položek Průkaznost původu vzorků Dohledatelnost vzorků Provedení podle plánu Plán studie Provedení studie Zpráva o výsledcích studie Standardizovaná pro krátkodobé Podpis vedoucího studie – převzetí odpovědnosti a shoda se zásadami Prohlášení QA – inspekce Odráží primární údaje Místa uchování zprávy, vzorků, primárních údajů Zpráva pro každou studii 71 Dokumentace výsledků studie Každá studie musí být uzavřena závěrečnou zprávou, podepsanou a datovanou vedoucím studie. Jakékoli dílčí zprávy musí být datovány a podepsány. Opravy a doplňky mají mít formu zdůvodněných a datovaných dodatků. Závěrečná zpráva obsahuje: - název zprávy, název a adresa laboratoře - označení zkoušené látky a referenčních materiálů, čistota, stabilita - informace o zkušebním pracovišti, vedoucí studie, případně dílčích studií - data započetí a ukončení - prohlášení útvaru zabezpečování kvality s daty inspekcí, nálezy a hlášením - popis materiálů a zkušebních metod, odkazy na směrnice - souhrn výsledků, všechny informace požadované plánem - vlastní vyhodnocení výsledků, výpočty, statistické metody - hodnocení, diskuse, závěry - archivace, údaje o uložení vzorků, primárních dat a závěrečné zprávy Ukládání a uchovávání Archiv musí být zabezpečen proti vodě, požáru, klimatickým vlivům, bezpečné ukládání! Archiv je prostor nebo vhodné zařízení (skříň, místnost, budova nebo počítačový systém) určené k bezpečnému ukládání záznamů (a materiálů) Pro archivování je samostatná 15. směrnice OECD Ukládání a uchovávání Plán studie, primární údaje, vzorky, písemnosti Záznamy o inspekcích (QAP) Záznamy o údržbě, validační dokumentace SOP z minulých období i platné Záznamy o monitorování prostředí Archivace záznamů a materiálů 10 let Ukládání a uchovávání Řízený přístup Evidence pohybu materiálu Při ukončení činnosti přemístění do archivů zadavatelů (SOP) Dokumentace o předčasné likvidaci vzorků Metody stanovené OECD • Jedním z nutných předpokladů pro vzájemné uznávání výsledků je míra jejich hodnověrnosti. Ta je založena na: – práci ve stejném systému kvality – použití stejných metod • Zásady SLP jako jediný systém kvality předepisují pro určitý druh zkoušky konkrétní metodu 75 GLP test guidelines • Pokyny OECD ke zkouškám jsou kolekce mezinárodně dohodnutých zkušebních metod používaných vládami, v průmyslu a nezávislých laboratořích . Ty se používají k určení bezpečnosti chemických látek a chemických přípravků, včetně pesticidů a průmyslových chemikálií • Metody stanovené OECD lze rozdělit do čtyř základních skupin: – metody fyzikálně chemické – vliv na biotický systém – degradace a akumulace – zdravotní efekty 76 Fyzikálně chemické metody • OECD stanovuje soubor fyzikálně chemických metod. Z hlediska SLP se jedná o typické krátkodobé studie. • Týkají se vlastností látek: – teploty tání – teploty varu – rozdělovacího koeficientu n-oktanol/voda – rozpustnosti ve vodě – hustoty kapalin a tuhých látek – viskozity kapalin – dalších 77 Vliv na biotický systém • Testů zkoumání vlivu na biotický systém. Jedná se o nejjednodušší testy, ve kterých jsou jako testovací systém použity živé organismy. – stanovení akutní toxicity na rybách – akutní toxicity na dafniích – inhibice růstu řas 78 Degradace a akumulace • Tato skupina zahrnuje několik základních testů. – stanovení snadné biologické rozložitelnosti – BSK – ChSK – Zahn-Wellensova metoda (stanovení úplné biologické rozložitelnosti ve vodě rozpustných netěkavých organických látek, při které jsou tyto látky vystaveny účinku vysokých koncentrací mikroorganismů) – další 79 Vlivy na zdraví • Testy zaměřeny na zjišťování nebezpečných vlastností převážně na živých organismech. • Jako testovací systémy jsou používány jak vyšší organismy, tak buňky či mikroorganismy • Patří sem: – akutní toxicita (orální, inhalační, kožní dráždivost) – subakutní toxicita – mutagenita – testování chronické toxicity – Karcinogenita – reprodukční toxicita – toxikokinetika 80 81 POROVNÁNÍ SLP S JINÝMI SYSTÉMY KVALITY 82 Jednotlivé systémy kvality Mezinárodní organizace pro normalizaci (ISO) je celosvětově zodpovědná za harmonizaci technických předpisů, včetně kvality Společný evropský institut pro normalizaci (CEN) je zodpovědný za vydávání evropských norem EN Základní filozofie GLP, ISO 9000 a ISO/IEC 17025 je shodná, jde o systémy kvality, na jejichž konci je odvedená práce v nejvyšší možné kvalitě. Podmínkou je školený personál, odpovídající prostory a vybavení, kvalitní výchozí materiál, dobře odvedená činnost, dokumentace umožňující kdykoli činnost rekonstruovat a dobře fungující systém jištění kvality. Volba systému kvality • Jaký systém kvality je vhodný pro práci určité laboratoře, je do značné míry určeno oblastí, ve které působí. – Normy ISO 9000 jsou určeny zejména pro výrobní podniky. – chce-li laboratoř vydávat protokoly, může prokázat svou způsobilost akreditací podle ISO 17025, která popisuje všeobecná kritéria pro činnost zkušebních laboratoří. – Působí-li laboratoř v oblasti bezpečnosti látek ve vztahu k ochraně člověka a prostředí, měla by pracovat ve shodě v principy GLP. 83 Rozdíly SLP • Jelikož se testují potenciální zdroje poškození zdraví, je systém SLP povinný • Existuje státní inspektorát SLP, který dohlíží, že testování probíhá v souladu se zásadami SLP • Inspektorát vydává Osvědčení SLP zařízením, která splňují požadavky 84 SLP nařizuje zákon pouze pro účely klasifikace chemických látek nebo přípravků testování hypotézy o neškodnosti (škodlivosti) zdraví a ŽP technická norma zvyšuje důvěru zákazníka zjištění nějaké vlastnosti materiálu (na jeho vzorku) ISO/IEC 17 025 SLP PŘEDEPSANÉ SOP plán studie závěrečná zpráva (včetně primárních dat) zprávy QA historie všech SOP Master Schedule – záznam o plánování a alokaci zdrojů ŘÍZENÉ ISO/IEC 17 025 DOKUMENTY SLP Závěrečná zpráva (podepsaná vedoucím studie) všechny primární údaje výpočty výsledky inspekcí QA prohlášení QA Protokol jen výsledky (podepisuje vedoucí laboratoře) ISO/IEC 17 025 VÝSLEDKY SLP Předepsán průběh inspekce Průběh auditu nepředepsán, ani na něj není v normě odkaz ISO/IEC 17 025 SHODA LABORATOŘE S POŽADAVKY 89 Normy řady ISO 9000 popisují modely zabezpečování kvality při návrhu, vývoji, výrobě, instalaci a servisu. Jsou aplikovatelné na různé průmyslové obory, jsou zaváděny především v průmyslových podnicích. V rámci certifikace může být do systému kvality zařazena i podniková laboratoř, která produkuje výsledky pro interní kontrolu.Výsledkem posouzení je certifikát potvrzující dosažení přiměřené důvěry, že výrobek, postup nebo služba je ve shodě s předepsanou normou. Certifikace je dobrovolná a je spojena s konkurenceschopností podniku. Certifikační orgán pak provádí periodické kontroly během celé doby platnosti certifikátu. Je to mezinárodní systém kvality a slouží jako podklad pro certifikaci, k dosažení podnikatelského cíle, k zabezpečování kvality (audity) nebo odstraňování nedostatků. Tento systém je nejobecnější a je komplexní, povinnost jej dodržovat nevyplývá ze zákona a firma jej zavádí jako známku své kvality. 90 ISO/IEC 17025 kladou důraz na zabezpečení kvality a věrohodnost údajů poskytovaných laboratoří. Rozšiřuje prvky systému jakosti o: - právní identifikovatelnost laboratoře - nestrannost a věrohodnost laboratoře při vykonávání zkoušek - odbornou kvalifikaci personálu a prokázání technických znalostí - prokázání návaznosti měření (referenční materiály, mezilaboratorní testy) - stanovení minimálního rozsahu informaci v protokolu o zkoušce - požadavky na archivaci i primárních dat - požadavky na důvěrnost a utajení získaných dat Je určeno především pro laboratoře provádějící zkoušky opakujícího se charakteru (analýzy vod, ovzduší potravin) 91 ČSN EN ISO/IEC 17025 a jeho dokumentace Aby laboratoř získala osvědčení o akreditaci, musí mít zaveden funkční a dostatečně zdokumentovaný systém kvality, aby bylo možné kdykoli prokázat, že zkouška proběhla za definovaných podmínek. Musí dodržovat platné národní legislativy a hygienické předpisy a veškeré své činnosti musí mít popsány v příručce kvality. To je základní dokument popisující plnění akreditačních kritérií a má být k dispozici všem pracovníkům laboratoře a být trvale udržován v aktuálním stavu. Musí obsahovat: - identifikační údaje laboratoře a organizace, kam je začleněna - ustanovení o koncepci kvality - strukturu laboratoře, organizační schéma, kvalifikovaný personál - popis pracovních a funkčních činností, odpovědností a pravomocí (laboratoř má mít vedoucího, technického vedoucího a manažera kvality) - dokumentaci prostor, vstupů osob, úklidu, zařízení a vybavení - všeobecné a specifické postupy zabezpečování kvality - odkazy na zkoušení způsobilosti a referenční materiály - uspořádání zpětné vazby a opatření k nápravě - postupy pro vyřizování stížností - zabezpečení nestrannosti, nezávislosti a věrohodnosti (nesmí být vnější vlivy, komerční ovlivnění, vazba na výrobce) 92 Laboratoř musí vést záznamy o každém důležitém zařízení a tyto musí obsahovat: - název zařízení - výrobce, identifikace typu a výrobní číslo - datum dodání a uvedení do provozu - současné umístění - stav zařízení při dodání a údržba - poškození, selhání, opravy - identifikační číslo v laboratoři - údržba, zodpovědná osoba - technická dokumentace - omezení pro použití - postupy pro provádění kalibrace (jak se provádí, jak často, rekalibrace standardů, návaznost) 93 Potřebnou návaznost poskytují v chemických měřeních referenční materiály. Jsou používány pro kalibraci přístrojů a metod, sledování provozu a prokazování správnosti výsledků a validaci metod. Referenční materiál je definován jako látka, jejíž jedna nebo více vlastností jsou dostatečně homogenní a určené, aby mohly být použity pro přisouzení hodnot. Certifikovaného referenčního materiálu lze použít pro kalibraci s návazností celé metody. Shoda mezi hodnotou získanou analýzou a certifikovanou hodnotou lze použít pro stanovení správnosti hodnot u analyzovaných vzorků. U matricových RM je třeba volit matrici co nejpodobnější analyzovanému vzorku. Pro přípravu roztoků standardů v laboratoři jsou nezbytné písemné návody a trvalé označení roztoků identifikací, koncentrací, datem, expirací a zdravotními riziky. RM je třeba vhodným způsobem skladovat a je nutné vést evidenci všech používaných RM s přesnou identifikací (typ, zdroj, šarže), podmínkách skladování, expiraci, způsobu použití, omezení, certifikátem a dokumentací výrobce. 94 Laboratoř by měla vycházet z normovaných metod, v případě vlastních metod je třeba provést jejich validaci Vlastní metody musí být plně dokumentovány, validace podloženy výsledky měření, stanoven postup pro řízení kvality. Metody se používají jako standardní operační postupy (SOP). Metody podléhají periodickým revizím, i zrevidované metody musí být dokumentovány a chváleny, a staré nahrazeny. Validace je soubor systematických laboratorních studií dokládajících provozní charakteristiky metody a měly by zahrnovat: - selektivitu - rozsah - linearitu - citlivost - mez detekce - mez stanovitelnosti - robustnost - správnost - přesnost To vše musí být uvedeno v dokumentaci metody. 95 Správná výrobní praxe, SVP (Good manufacturing practice, cGMP) se týká zejména farmaceutické výroby. Požadavky na kvalitu léčiv jsou extrémně vysoké a tato kvalita nesmí kolísat v čase. Rozdíly oproti ostatním systémům jištění kvality: - trojí nezávislé jištění kvality - ředitel má nejvyšší odpovědnost - vedoucí kontroly kvality (rozhoduje o splnění kvality podle zkoušky) - vedoucí jištění kvality (neustále sleduje výrobní podmínky) - Dodržování cGMP je povinné, systém jištění kvality je doplněn o státní dozor. - Státní orgány provádějí inspekce, zda v kterémkoli okamžiku nedochází ohrožení kvality Inspektor má právo kdykoli podnik navštívit a okamžitě zastavit výrobu a distribuci 96 Správná klinická praxe Po úspěšném ukončení neklinických zkoušek následuje klinické zkoušení, které musí probíhat za přesně definovaných a objektivně kontrolovatelných podmínek, aby se dospělo k validním výsledkům. Podmínky Správné klinické praxe jsou podobné GLP: - klade se důraz na zkoušení a výsledky - dodržování je povinné - existuje inspektorát SKP, jehož pracovníci provádějí audity na pracovištích Rozdíly: - klinické pracoviště žádá státní regulační úřad o schválení každé konkrétní klinické zkoušky - každé klinické pracoviště smí provádět jen určitý typ klinického hodnocení 97 Plán zajišťování kvality - je písemný plán zaručující, že prováděné studie budou ve shodě s GLP - je realizován odpovědnou osobou, pověřenou vedením pracoviště - tato osoba se nemá účastnit studie, jejíž kvalitu zajišťuje - veškerá zjištění hlásí přímo vedoucímu pracoviště Pracovník pověřený zajišťováním kvality - dohlíží na to, aby zúčastnění pracovníci měli plán studie a odpovídající SOP - pravidelnými inspekcemi a audity dohlíží na jejich dodržování - uchovává veškeré zápisy z těchto inspekcí - neprodleně oznamuje vedoucímu pracoviště a vedoucímu studie odchylky - prostuduje závěrečné zprávy a prověří, že metody a pozorování jsou správně popsány a výsledky odpovídají primárním datům - napíše a podepíše hlášení, které se přikládá k závěrečné zprávě studie 98 Inspekce se řídí směrnicemi, zejména rozhodnutím Rady OECD C(95)8/FINAL, které zavazuje členské země k vytvoření národních úředních postupů ke kontrole dodržování zásad SLP. Národní program dodržování SLP je podrobné schéma vytvořené členskou zemí ke kontrole pomocí inspekcí a auditů. Národní úřad pro kontrolu SLP je zodpovědný řídící orgán kontroly. Inspekce je na místě provedená kontrola pracovních postupů a zvyklostí na zkušebním pracovišti, posouzení shody s SLP a kvality a neporušenosti dat. Audit je porovnání primárních údajů s průběžnými a závěrečnými zprávami za účelem ověření, že byly zpracovány a interpretovány správně, podle plánu a SOP, a že nedošlo k něčemu, co by mohlo zpochybnit jejich platnost. 99 Postup inspekcí - předběžná inspekce (seznámení inspektora s pracovištěm) - úvodní pohovor (vysvětlení účelu, rozsahu inspekce, vyžádání dokumentů a vzorků, kontakt s útvarem zajišťování kvality) - organizace práce a pracovníci (personál, vzdělávání, dokumentace) - plán zajišťování kvality (ověření dostatečnosti mechanismů) - pracoviště (rozměry, uspořádání, záměny, kontaminace) - biologické zkušební systémy (péče, ošetření, pomocná zařízení) - přístroje, materiály, činidla, vzorky (kvalita, kapacita) - zkušební systémy (přiměřené postupy užití a kontrola) - referenční látky (totožnost, skladování, SOP na zacházení) - SOP (písemné pro všechny důležité postupy, dodržování) - provádění studií (plány, dodržování, zaznamenávání - zprávy (podpisy, jakost, opravy, archivace) - archivace, dokumentace (SOP pro archivaci, typy dokumentů) 100 Audit může být součástí inspekce, může mít velmi různý rozsah. Cílem je zrekonstruovat celou studii na základě jejího plánu a SOP, primárních údajů a archivu. Může jít o kontrolu - dostatečného personálního zajištění (vzdělání a čas) - konkrétního zařízení (údržba, kalibrace) - zacházení s materiálem - osudu laboratorních zvířat (aplikace, dávky, nálezy) - dokumentace 101 Interní audit kvality 102 Jak přežít audit Příprava - shromáždit data a dokumentaci k auditované studii, nenechat auditory hledat v ostatních materiálech - uložit vedoucímu studie projít veškeré materiály a zodpovědět otázky - prohlédnout časový harmonogram a zajištění kvality - připravit pracovní místo pro auditory - vyvěsit plán místností - připravit zaměstnance na to, jak bude audit probíhat 103 Průběh auditu - kontinuálně sledovat inspekci, doprovázet auditory - mít všechny materiály připraveny - předkládat kopie, nedávat originály - uschovat duplikáty všech poskytnutých materiálů - ihned realizovat korigující akce - denně organizovat informační schůzky k průběhu auditu - být zdvořilý a spolupracovat - odpovídat jen na položené otázky - chránit důvěrné informace Závěr - provést závěrečné shrnutí - zeptat se na další otázky a důvody k nespokojenosti - připravit složky s inspekčními materiály - připravit zprávu o auditu 104 Výsledky inspekce a auditu musí být zpracovány písemně a projednány se zkušebním pracovištěm. Drobné závady nemusí zabránit konstatování shody pracoviště se zásadami SLP, ale vedoucí musí zjednat nápravu. Inspektor může tato nápravná opatření znovu zkontrolovat. Závažnější odchylky hlásí inspektor příslušnému úřadu pro kontrolu dodržování SLP. Byla-li inspekce provedena na žádost kompetentního orgánu, bude mu úplná zpráva doručena prostřednictvím úřadu pro kontrolu dodržování SLP. 105 Interní audit Audit má několik forem: - Audit kvality uvnitř laboratoře - prověrka kvality, interní audit, (ověření existence a dodržování postupu kvality, kompetence vnitřního systému kontroly kvality) - přezkoumání vyšším managementem (ověření, zda je systém účinný) - posuzování, externí audit nezávislým orgánem jako součást akreditace. Jedná se o systematické a nezávislé zkoumání s cílem posoudit, zda činnosti a výsledky vztahující se ke kvalitě jsou v souladu s plánovaným uspořádáním, zda jsou účinně zavedeny a vhodné k dosažení daného cíle. 106 Validace a verifikace Validace metody je potvrzení přezkoušením a poskytnutí objektivního důkazu, že jsou jednotlivé požadavky na specifické zamýšlené použití splněny. Provádí se pomocí reálných vzorků pro celý předepsaný koncentrační rozsah a různé matrice. Norma uvádí, že laboratoř musí validovat metody nenormalizované, vyvinuté, rozšířené, modifikované, normalizované mimo zamýšlený rozsah.Není nutno provádět při převzetí normovaných metod. Závěrem je vypracování validačního protokolu, který obsahuje získané výsledky, postup yužití pro validaci a prohlášení, že metoda vyhovuje zamýšlenému použití. Verifikace metody je ověření správného fungování metody. Provádí při zavádění všech metod, včetně normovaných, dále při jakýchkoli změnách (personál, materiál, laboratoř, přístroje…) 107 Software Norma ČSN ISO/IEC 17 025 uvádí, že laboratoř musí zajistit, aby: - softwarové vybavení vyvinuté uživatelem bylo dostatečně podrobně zdokumentováno, vhodně validováno a vhodné k danému použití - byly stanoveny a zavedeny postupy pro ochranu dat. Takové postupy musí zahrnovat věrohodnost a důvěryhodnost vstupních údajů, jejich sběru, ukládání a zpracování - počítače a automatizovaná zařízení byla udržována za účelem zajištění správné funkce a byly zajištěny podmínky nezbytné k udržení věrohodnosti zkušebních a kalibračních údajů - musí být zajištěna ochrana dat při přenosu a archivaci a ochrana počítačů a sítě MS Word a Excel se považují za validované. 108 Práce s daty a zprávami 109 ŘÍZENÍ DOKUMENTACE • Záznam - informace uchovávaná trvale nebo dočasně na nějakém médiu • Účel záznamu - umožnit vyhledání nezkreslené informace podle potřeby – monitorování – kontrolování – komunikování – dokazování 110 Druhy záznamů • nakupování – objednávky, faktury, dodací listy, seznamy, účetní doklady, • laboratorní postupy – analytické metody, pravidla kalibrování přístrojů, postupy údržby a čištění, záznamy o školení, postupy pro zaznamenávání stížností zákazníků, řízení jakosti, • komunikace mezi laboratoří a zákazníkem – požadavky na analýzy, odhady nákladů, pracovní příkazy, analytické zprávy, faktury • analytická činnost – laboratorní deníky a listy, analytická data, regulační diagramy, záznamy o kalibracích 111 ŘÍZENÍ DOKUMENTACE • Tvorba dokumentů • Identifikace dokumentů – co to je – co obsahuje – kdo jej vytvořil a kdy – jestli měl příslušné oprávnění, – zda je obsah stále platný – stupeň zabezpečení, právo ke kopírování a celistvost 112 ŘÍZENÍ DOKUMENTACE • Katalogy dokumentů – soupis historie – identifikaci platné verse – kdo je oprávněn vytvářet a doplňovat konkrétní typ dokumentu • Každá stránka dokumentu musí nést následující informaci: – název (obvykle plný titul na první stránce a zkrácený tvar na následujících stránkách – číslo verse, – datum, – číslo stránky (z celkového počtu – DŮLEŽITÉ), – stupeň zabezpečení. • Titulní stránka – ůdaje o – zákazu kopírování – schvalující osobě – rozdělovník – číslo kopie (celkový počet výtisků) 113 ŘÍZENÍ DOKUMENTACE • Kopírování dokumentů – zákaz kopírování! • Ukládání a archivace dokumentů 114 Uplatnění GLP při terénních studiích Vzorkování Laboratoř musí mít: - plán odběru vzorků - standardní pracovní postup pro odběr vzorků - dokumentace odběru vzorků