Výběr termínu: blok 6
(návštěva odborníka z praxe)
•6.12. 11-13 učebna RCX 1
Vyhodnocení domácí úkol 1
Cvičení E1241
22.10.2019 Blok 2
Vyučující: B. Kubíčková, E. Rozmánková
EC50 + IC50 + LC50
NOEC (+ LOEC)
• Výběr na začátek – vědět co chci vybrat
• Oddělovač desetinných míst: tečka vs. Čárka
Na co dbát – vaše postřehy
Na co dbát
1. Zanechat všechny listy!
• Změny dohledatelné i později pro vaši potřebu (zapisujte si i komentáře)
• Ať vám můžeme zkontrolovat práci ;)
2. Správné zařazení do taxonů
• Rostliny = primární producenti
• Crustaceans=korýši => bezobratlí
• Pozor, zdali jste správně zaškrtli/odškrtli filtr
3. Uvádět na závěr jednotky u EC50 a NOEC (µg/L x mg/L)
4. Správné operátory (průměr x součet)
Příprava na laboratorní praktika
- výpočty
Příklad Danio rerio – rozpouštění diuronu
• Zásobní roztok v DMSO: 8 g/L
• Cílové koncentrace: 2-3,5-5-6,5-8 mg/L
• Duplikát v krystalizačních miskách: 20 embryí/20 ml
• Připravit pro každou koncentraci o 20 ml roztoku více (rezerva + oplach embryí)
Postup:
1. příprava 4 zásobních roztoků v DMSO (=> stejná konc. DMSO ve všech konc. v médiu)
2. příprava koncentrací v médiu
Zásobní roztok: 8 g/L (DMSO)
1. Zásobní roztoky: 2-3,5-5-6,5-8 g/L (DMSO)
• 2 způsoby:
• Vzoreček c1V1+c2V2=cV (přičemž c2V2 = voda = 0 => V1=cV/c1)
• Trojčlenka
2. Příprava koncentrací v médiu
1. Potřebujeme 60 ml od každé koncentrace
2. 2-3,5-5-6,5-8 mg/L
3. Maximalní povolená koncentrace rozpouštědla v testu: 0,1% DMSO!
Výsledek - Danio rerio – rozpouštění diuronu
• Připravíme si pro jistotu např. 100 µl od každého zás. roztoku
• Ze zás.roztoku C5 o 8 g/L tedy pipetujeme:
• Z každého zásobního roztoku v DMSO napipetujeme 60 µl do 60 ml
média
Koncentrace C4 6,5 g/L C3 5 g/L C2 3,5 g/L C1 2 g/L
µl z C5 8 g/L 81,25 62,5 43,75 25
µl DMSO 18,75 37,5 56,25 75
• Příklad Danio rerio – pozitivní kontrola etanol
• Cílové koncentrace: 0,5-1-1,5-2-2,5 %
• Duplikát v krystalizačních miskách: 20 embryí/20 ml
• Připravit pro každou koncentraci o 20 ml roztoku více (rezerva +
oplach embryí)
• (zásobní roztok je 100% EtOH)
Příprava na laboratorní praktika
- výpočty
Koncentrace C1 0,5% C2 1% C3 1,5% C4 2% C5 2,5%
ml EtOH 0,3 0,6 0,9 1,2 1,5
ml médium 59,7 59,4 59,1 58,8 58,5
Výsledek - Danio rerio – pozitivní kontrola etanol
• Potřebujeme 60 ml na koncentraci
Domácí úkol
• Příprava ředění pro řasy a dafnie
• Přinést hotové do laboratorních praktik v týdnu 4.-8.11.
Dafnie – příprava ředění
• Zásobní roztok: 8 g/L v DMSO
• Testované koncentrace: 2,5-5-10-20-40 mg/L
• Jamka 10 ml, pro každou koncentraci 5 jamek
• Do jamky lze přidat pouze 0,5 % rozpouštědla > jaké potřebuji zásobní
roztoky? Tak, aby v každé koncentraci bylo stejné množství
rozpouštědla
• Pozitivní kontrola: dvojchroman draselný (K2Cr2O7). Dle normy platí,
že test je validní pokud je EC50 v rozmezí 0,6-2,1 mg/L, návrh pěti (5)
testovaných koncentrací – pamatuj: do jamky můžu přidat jen 0,5 %
rozpouštědla. Jaké potřebuju zásobní roztoky?
Řasy – příprava ředění
• Koncentrace zásobního roztoku K2Cr2O7 (poz. kontrola) 2000 mg/L
• Koncentrace zásobního roztoku diuronu 20 mg/L ve vodě
• Testovaná řada K2Cr2O7
• 10-5-2,5-1,25 mg/L (výsledná koncentrace v jamce)
• Testovaná řada diuronu
• 50-25-12,5-6,25-3,125 µg/L
• Potřebná množství roztoků jsou uvedena v manuálu do cvičení
• Koncentrace jsou v jamce vyředěny na polovinu řasovým inokulem –
berte do úvahy při výpočtu koncentračních roztoků