Bi7529 Metody mykologického výzkumu
Izolace mikroskopických hub
MASARYKOVA UNIVERZITA
PŘÍRODOVĚDECKÁ FAKULTA
ÚSTAV EXPERIMENTÁLNÍ BIOLOGIE
ČESKÁ SBÍRKA MIKROORGANISMŮ
http://www.sci.muni.cz/ccm
Výsledky
1. Stanovení celkového počtu směsné populace plísní v ovzduší
vnitřního prostředí sedimentační metodou
Metody izolace mikroskopických hub
místnost vnitřní pr. vnější pr. izolovaná populace hub
VS pokoj 2 11
ZK pokoj 13 37 Cladosporium sp.
VB pokoj/zahrada 13 35 Cladosporium sp.
Hodnocení: Pro pobytové místnosti se považují hodnoty 50 KTJ plísní / Petriho misku / hod. za hodnoty, které přibližně odpovídají
kategorii znečištění střední dle EUR 14988.
Za hygienicky závažné znečištění se považuje hodnota u/v vyšší než 2,0. Hodnota u/v = 2,0 znamená, že koncentrace
mikroorganismů je uvnitř objektu dvakrát vyšší než ve venkovním vzduchu.
k nejhojnějším mikromycetám šířících se vzduchem patří zástupci rodů Cladosporium,
Alternaria, Aureobasidium, Botrytis, Epicoccum a Penicillium
nepohlavní stadia vřeckovýtrusných hub (Ascomycota)
druhy kosmopolitně rozšířené, vyskytující se zejména v půdě a na rostlinných zbytcích
1. Stanovení celkového počtu směsné populace plísní v ovzduší
vnitřního prostředí sedimentační metodou
VS ZKVB
venku
uvnitř
Cladosporium
Fungi, Dikarya, Ascomycota, Pezizomycotina, Dothideomycetes, Cladosporiales, Cladosporiaceae
cca 100 druhů
saprofytické druhy s kosmopolitním rozšířením (C.
herbarum, C. cladosporioides, C. sphaerospermum)
parazitické druhy na rostlinných hostitelích
„Indoor fungi“
biodegradace – olejomalby
rozkládají polyethylen, polypropylen, epoxid)
mykoremediace – C. sphaerospermum
(monocyklické aromatické uhlovodíky)
Cladosporium
konidiofory semi- a mikronematózní, rovné nebo
zakřivené, nevětvené či větvené (ramokonidie) s
dobře viditelnými jizvami po odpadlých konidiích
ramokonidie – koncové části větveného konidioforu
konidiogeneze hloblastická
konidie se tvoří v jednoduchých nebo větvených
akropetálních řetízcích (amero, didymo nebo
fragmokonidie), hnědé
http://srzon.com/incolors/collectioncdwn-cladosporium-spp.htm
http://www.caltexmoldservices.com/Caltex/section/mold_library/cladosporium/
http://old.vscht.cz/obsah/fakulty/fpbt/ostatni/miniatlas/cla.htm
Cladosporium
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
Metody izolace a mikroskopických hub
Rhizopus sp., Fusarium sp.průduškový čajVB
Aspergillus sp., Penicillium sp.,
Syncephalastrum sp.
černý čaj (sypaný)ML
VS bílý pepř ZK
ovocný čaj Rhizopus sp., Aspergillus spp.
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
černý čaj (sypaný)
Syncephalastrum sp.
Penicillium sp.
Aspergillus
Aspergillus
Fungi, Dikarya, Ascomycota, Pezizomycotina, Eurotiomycetes, Eurotiomycetidae, Eurotiales, Aspergillaceae
zástupci rodu Aspergillus - popsáno 362 druhů
ubikvitní saprofyté rozšířeni zejména v teplejších oblastech světa (půda)
častý kontaminant potravin a krmiv
řada druhů osmofilní
producenti mykotoxinů (aflatoxin) poškozujících ledviny a játra, zdrojem jsou zejména
arašídy, oříšky kešu, pistácie a sušené plody
Aspergillus acidus - fermentace černého čaje
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
černý čaj (sypaný)
Aspergillus
Aspergillus niger komplex
https://openi.nlm.nih.gov/detailedresult.php?img=PMC2275192_13fig1&req=4
fig1: Colony morphologies of type strains of species assigned to
Aspergillus section Nigri grown on CYA and MEA plates at 25 °C for 7
d. (A-B) A. aculeatinus, (C-D) A. aculeatus, (E-F) A. brasiliensis, (G-H)
A. carbonarius, (I-J) A. costaricaensis, (K-L) A. ellipticus, (M-N) A.
foetidus, (O-P) A. japonicus, (Q-R) A. heteromorphus, (S-T) A.
homomorphus, (U-V) A. ibericus, (W-X) A. lacticoffeatus.
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
Syncephalastrum
Fungi, Mucoromyceta, Mucoromycota, Mucoromycotina, Mucoromycetes,
Mucorales, Syncephalastraceae
c) merosporangiasporogenní hlavice
černý čaj (sypaný)
Penicillium
Fungi, Dikarya, Ascomycota, Pezizomycotina, Eurotiomycetes, Eurotiomycetidae, Eurotiales, Aspergillaceae
cca 350 druhů
ubikvitní saprofyté celosvětově rozšířeni, jsou přítomny v půdě, ve vzduchu, v
rostlinných i živočišných zbytcích
producent mykotoxinů a mnoha dalších extrolitů (ochratoxin A, citrinin, patulin)
alergenní
využití: startovací kultury k výrobě sýrů (P. camemberti syn. P. candidum, P.
roqueforti), výroba antibiotika penicilínu, P. nalgiovense – fermentované uzeniny
http://shop.homecheesemaking.com.au/white-mould-spores-penicillium-candidum-the-culture-that-produces-the-white-coating-in-camembert-and-brie-cheeses-enough-for-more-than-250l-of-milk/
Mikroskopické znaky
nepohlavní stádium – štětičkovité konidiofory,
konidie
pohlavní stádium - charakteristické tvorbou
drobných plodnic
hodnotí se stavba konidioforu
Penicillium
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
černý čaj (sypaný)
Penicillium sp.
Rhizopus
Fungi, Mucoromyceta, Mucoromycota, Mucoromycotina, Mucoromycetes, Mucorales, Mucoraceae
stolony, svazečky nevětvených sporangioforů, rhizoidy
deštníkový tvar kolumely po rozpadu sporangia
http://botany.natur.cuni.cz/en/taxonomy/term/121
Rhizopus
FOTO: http://botany.natur.cuni.cz/en/taxonomy/term/121
http://old.vscht.cz/obsah/fakulty/fpbt/ostatni/miniatlas/rhi.htm
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
ovocný čaj
Rhizopus sp.
Aspergillus sp.
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
ovocný čaj
Aspergillus sp.
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
ovocný čaj
Aspergillus sp.
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
průduškový čaj
Rhizopus sp.
2. Izolace mikroskopických hub – metoda přímého výsevu
průduškový čaj
Rhizopus sp.
Fusarium sp.
?
3. Izolace mikroskopických hub stěrem z prostředí
Metody izolace mikroskopických hub
VS okenní rám žlutooranžové kolonie – Epicoccum ?
ZK okenní rám
světle zelené kolonie – Penicillium
VB klaviatura Rhizopus sp.
Houby vnitřního prostředí „indoor fungi“
Epicoccum
Fungi, Dikarya, Ascomycota, Pezizomycotina, Dothideomycetes, Pleosporomycetidae, Pleosporales, Didymellaceae
http://old.vscht.cz/obsah/fakulty/fpbt/ostatni/miniatlas/epi.htm
http://www.mycology.adelaide.edu.au/Fungal_Descriptions/Hyphomycetes_%28dematiaceous%29/Epicoccum/
diktyokonidie
4. Izolace z osiva
Metody izolace mikroskopických hub
VS
VBZK
Chaetomium
Fungi, Dikarya, Ascomycota, Pezizomycotina, Sordariomycetes, Sordariomycetidae, Sordariales, Chaetomiaceae
výskyt na potravinách a krmivech rostlinného původu, na výrobcích s celulózou
a v půdě
plodnice – perithecia s trichomy (sety)
http://old.vscht.cz/obsah/fakulty/fpbt/ostatni/miniatlas/images/plisne/perokresby/
http://www.uoguelph.ca/~gbarron/MISCELLANEOUS/chaetomi.htm
4. Izolace z osiva
Chaetomium sp.
http://fungi.myspecies.info/all-fungi/fusarium-avenaceumhttp://prgdb.crg.eu/wiki/Species:Fusarium_oxysporum
Fusarium
Fungi, Dikarya, Ascomycota, Pezizomycotina, Sordariomycetes, Hypocreomycetidae, Hypocreales, Nectriaceae
5. Izolace vodních hyfomycet
Metody izolace mikroskopických hub
VB
ZK
VS Potok
u lanového centra
(cyklostezka u Anthroposu)
Tetracladium marchalianum,
Tricladium sp.
Svratka Tetracladium sp., Tricladium sp.,
Lemonniera sp., Tetrachaetum elegans
Vodní hyfomycety
– druhy rostoucí i fruktifikující na substrátech (detrit,
dřevo) ponořeném ve vodě (vodní hyfomycety
Anguillospora, Articulospora, Flagellospora,
Lunulospora, Tetracladium ……)
Clavariopsis aquatica
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0084-59062007000200005&script=sci_arttext
http://ja.wikipedia.org/wiki/%E3%83%95%E3%82%A1%E3%82%A4%E3%83%AB:Clavariopsis_aquatica_01.jpg
5. Izolace vodních hyfomycet
Tetracladium sp.
Svratka
Lemonniera sp.
Tetrachaetum sp.
5. Izolace vodních hyfomycet
Alternaria sp.
– nepatří mezi vodní hyfomycety
Svratka
Tricladium sp.
Alternaria
Fungi, Dikarya, Ascomycota, Pezizomycotina, Dothideomycetes, Pleosporomycetidae, Pleosporales, Pleosporaceae
http://www.doctorfungus.org/thefungi/penicillium.phphttp://www.sci.muni.cz/ueb/mik/Miniatlas/alt.htm
ubikvitní, saprofytický rod
Alternaria alternata
kolonie olivově šedé, šedobílé, šedé až černé, reverz šedý až černý
vícebuněčné, hnědé konidie (porokonidie) uspořádány v řetízcích, hladké nebo
bradavičnaté
5. Izolace vodních hyfomycet
Tricladium sp.
park Anthropos
Tetracladium marchalianum
6. Mikrokultura (sklíčková kultura č.1)
6. Mikrokultura (sklíčková kultura č.2)
6. Mikrokultura (sklíčková kultura č.3)
7. Rozbor vzorku půdy metodou desetinásobného ředění
Metody izolace mikroskopických hub
http://www.mycolog.com/CHAP4a.htm
Morfologické skupiny konidií
A) Amerokonidie – jednobuněčné
B) Didymokonidie – dvoubuněčné
C) Helikokonidie – stočené do spirály
D) Staurokonidie – hvězdicovité
E) Diktyokonidie – vícebuněčné, dělené ve více směrech
F) Fragmokonidie – vícebuněčné v jedné řadě
G) Skolekokonidie – dlouhé, tenké
F E
B C D
Techniky přípravy mikroskopických preparátů
Jak studovat mikroskopické houby
izolace
získání axenické (čisté) kultury
detailní studie mikroskopických struktur hub
zhotovení přesného popisu struktur s nákresem
získání DNA sekvence (ITS - Internal Transcribed
Spacer region) pro počáteční porovnání s on-line
databázemi
srovnání výsledků s literaturou pro identifikaci
v mnoha případech je nezbytné pro správnou
identifikaci srovnání se správně identifikovanou
sbírkovou kulturou
Izolace
Analýza DNA
Uchovávání
Nativní preparát
Mikroskopie
Mikromorfologie
Makromorfologie