Analýza vzorků v medicíně -Poskytuje pohled na fungování organismu z mikroskopického a molekulárního hlediska - zlepšení možností diagnostiky a terapie -získáme informace o faktech, která nejsou na první pohled vidět, když nemoc probíhá bezpříznakově (asymptomaticky) Odebírané vzorky z lidského organismu: KREV – jeden z nejdůležitějších vzorků -tkáně - přímo odebrané tkáně, moč, stolice, sliny, dech, likvor, atd Proč zrovna krev? Přichází do kontaktu s tkáněmi těla – vyplavené látky z buněk přechází do krve Funguje jako transportní medium celé řady látek - přenáší je ke tkáním i od nich - zásobní i odpadní systém v jednom Vlastnosti: snadný odběr, doplnění se děje fyziologicky, možnost opakovaných odběrů v krátkém čase Odebrání 1. sražené krve, 2. nesražené (plné) krve Složení krve www.medicina.cz Odběr krve Venózní - kapilární - podle charakteru stanovení Venózní - klasicky z loketní jamky, ale i z jiných žil, provádí lékař -ideální je necvičit paží, u některých parametrů je to dokonce zakázáno -do různých zkumavek (různé přísady a objemy), podle toho, co chceme stanovit -před odběrem klid, po odběru pořádně mačkejte žílu kapilární - z prstu, z ucha - vždy ovlivněno kontaminací tkáňovým mokem Preanalytika před odběrem -Doba a činnosti před odběrem silně ovlivňují výsledky -Některé parametry vyžadují pečlivou přípravu před odběrem - nutno dodržet, jinak dojde ke zkreslení výsledků Zásady pro odběry -pokud se nejedná o okamžitý akutní odběr - před odběrem cca 8-10 hodin nejíst, ale pít je možné, vodu nebo hořký čaj (biorytmy) - Nekouřit, poslední jídlo před odběrem - lehké, ne tučné -zjistit užívané léky pacienta, případně zdravotní potíže související s odběrem -vynechat fyzickou zátěž den před odběrem Které obory se věnují analýze krve? Hematologie - zkoumá vlastnosti krevních buněk, koagulační parametry Transfúzní lékařství - analýza krevních skupin, protilátek proti krevním skupinám, HLA Ag Biochemie - analýza sloučenin v krvi pro sledování biochemických pochodů v těle Serologie - analýza protilátek proti cizorodým organismům Imunologie - sledování imunitních reakcí v těle Mikrobiologie - hledání cizorodých organismů v krvi nebo reakce těla na ně Toxikologie - analýza cizorodých látek - farmakologie - léky Genetika - hledání fragmentů i celých částí DNA Příklad všech biochemických reakcí v těle Co všechno můžeme v krvi stanovovat? -enzymy – ALT (alaninaminotransferáza), AST (alaninaspartát transf), GGT(Gama-glutamyltransferáza, ALP(alkalická fosfatáza – hydrolýza kys. fosforečné) (enzymy – poškození jater, svalů), AMS (alfaamyláza slinivka, ledviny) -minerály - včetně stopových prvků - Na, K, Cl, Se, Zn, Mg, Fe... -metabolity, odpadní látky - amoniak, urea, laktát, kreatinin (fce ledvin rozklad energie na svalový pohyb) -krevní plyny - pO2, pCO2 -substráty chemických reakcí - glukoza, TAG (triacylglycerol) -vitamíny - vitamín D, foláty, kyselina listová -hormony – TSH (Thyreotropní hormon), fT4 (tyroxin), testosteron, kortizol -protilátky - autoimunitní i protilátková odpověď proti cizorodému agens ·protilátky - autoimunitní i protilátková odpověď proti cizorodému agens ·orgánově specifické látky – cTnT, pAMS (troponin - infarkt myokardu), ·cizorodé organismy - baktrémie, viremie - HIV ·léky + drogy - digoxin, teofylin, antibiotika ·Buňky Stanovení enzymů, jiných látek – fotometricky, pomocí spec. protilátek Jak analyzujeme krev? Podle toho, co chceme vyšetřovat používáme různé postupy, neexistuje jeden univerzální přístup Vyšetření z plné krve - krevní obraz, ze stejného odběru i glykovaný hemoglobin – sledování terapie – (informace o průměrné hladině cukru v krvi v delším období) -transfuzní lékařství -genetika -kultivace cizorodých organismů - hemokultury -urgentní vzorky - jen vybrané analyty na speciálních strojích - cena, acidobazická rovnováha Jak analyzujeme krev II Sérum, plazma - vzniknou po oddělení buněčné složky krve (v plazmě neproběhla koagulace) -klinická biochemie -koagulační vyšetření -toxikologie -serologie -imunologie vzhledem k absenci krevních elementů (=”nečistot”) snadnější automatizace a možnost přesné analýzy Obrázky z klinických laboratoří Příklady, jak využít analýzy krve v praxi Poškozená tkáň vyplavuje pro sebe charakteristické látky -srdce - myokard - při jeho ischemii nebo poškození se vyplavují srdeční troponiny - cTnI a cTnT -při jejich zvýšení v krvi zjistíme, že došlo k tomuto poškození a můžeme zahájit léčbu -cTnI a cTnT - specifické pro srdce, dřívější analyty byly méně specifické, diagnostikovaly i jiné poruchy - CK, AST... -spolu s dalšími metodami určení poškození myokardu - např. srdeční infarkt -játra - žlučník a žlučovody - ALP a GGT - zvýšení při cholestáze (porucha tvorby a odtoku žluče, akutní jaterní onemocnění) Analýze krve v praxi Určitý orgán přestane plnit svoji funkci - dochází ke zvýšení látek které odbourává nebo vylučuje -Ledviny - při jejich snížené funkci dochází ke kumulaci urey a kreatininu v krvi -někdy je zjistí snížená funkce ledvin ještě před klinickými projevy - včasné zahájení léčby, oddálení komplikací -Játra - ztratí schopnost vychytávat bilirubin nebo jej vylučovat - žloutenka -nutno najít příčinu žloutenky - infekce, ucpání žlučovodů, otrava (houby) -amoniak - při těžkém požkození jater - smrtelné nebezpečí Analýza krve v praxi II Dojde k poruše hormonálního systému -Diabetes mellitus - cukrovka -I. typu - dojde k destrukci beta buněk ve slinivce - nedostatek inzulinu -II. typu - nejdříve dojde ke snížení odpovědi tkání na inzulin - slinivka jej vyplavuje častěji - vyčerpání až destrukce beta buněk -odlišíme dle C-peptidu - uvolňován při syntéze inzulinu -Štítná žláza - hormony štítné žlázy + regulační hormon TSH - dle těchto parametrů a zobrazovacích metod lze určit typ onemocnění štítné žlázy, dále kontrolovat úspěšnost terapie Sledování úspěšnosti léčby onemocnění Tumorové markery - látky uvolňované do oběhu při nádorových onemocněních -pro screening používaný PSA (prostatický specifický antigen)- karcinom prostaty, nutno doplnit dalšímy vyšetřeními -vždy v kombinaci s dalšími vyšetřeními, nelze říct - zvýšení určitého parametru = 100% nádor určitého orgánu -PSA - zvýšení např. po jízdě na kole -ideální použití - při nálezu nádoru naleznu marker, který je pro něj charakteristický a zvýšený - podle něj pak sleduji úspěšnost terapie Zánětlivé parametry - snížení při úspěšné léčbě - CRP, PCT(prokalcitonin), Leukocyty Sledování léků a jejich hladin Léky - ve vyšších dávkách toxické -mají svoje farmakologické vlastnosti, které jsou pro každého individuální dle jeho genetických dispozic a zdravotního stavu Digoxin - lék hojně využívaný v kardiologii při léčbě srdečního selhávání a fibrilací síně, srdečních arytmií -terapeutická hodnota se udává jako 0,6-1,2 (0,5-0,9) ng/ml, hodnota nad 2ng/ml je toxická -vylučování - ovlivněno váhou, věkem, pohlavím a FUNKCÍ LEDVIN - z praxe i hodnoty přes 3,5ng/ml, starší lidé naštěstí lépe snáší Vznik zánětu, větší infekce, sepse, spáleniny, imunitní odpovědi Dojde k nárůstu látek odpovědných za obranyschopnost organismu -Leukocyty v KO -CRP -PCT -Reaktanty akutní fáze - pozitivní nebo negativní -Protilátky - i alergie, imunologie -Protilátky proti infekčním agens - borelia, HIV, infekční žloutenky -kultivace hemokultury Sledování a předpověď rizik u daného jedince pomocí analýzy krve sledujeme rizika vzniku a rozvoje některých onemocnění -genetika - BRCA I/II (jsou tumor supresorové geny, mutace zvyšuje riziko vzniku nádorových onemocnění), analýza DNA plodu v krvi matky -cholesterol a tuky v krvi (HDL, LDL) -přítomnost autoprotilátek -NT-proBNP (ukazatel srdeční dysfunkcehormonálně neaktivní fragment prohormonu proBNP, který je ekvimolárně štěpen na hormon BNP a NT-proBNP) - srdeční selhávání, při negativní hodnotě jej lze vyloučit, prognoza u IM -novorozenecký screening - rozvoj geneticky podmíněných onemocnění u novorozenců Hledání genetických onemocnění 2 základní principy -přímá analýza DNA - při jasném podezření - Down syndrom (starší matky) -cena -pozitivní nebo negativní výsledek je až na pochybení laboratoře téměř jistý -hledání hromadících se látek v organismu - následně se potvrzuje pomocí DNAC+D Analýza vitamínů a stopových prvků a minerálů Se, Zn Vitamín D - osteoporoza, poruchy růstu Kyselina listová - krvetvorba, regenerace B12 - krvetvorba, regenerace Mg - křeče Krevní diferenciál (obraz) Hodnocení počtu, tvaru, velikosti a dalších vlastností jednotlivých krevních buněk -automaticky měřený -manuální zhotovení Jak se tedy k analýze krve postavit? Vždy nutno hodnotit ve spojení s -klinickým stavem pacienta -anamnézou -historií pacienta -s ostatními metodami Zdroje: ing. Petr Novák OKBH Nemocnice Žatec www.medicina.cz