In vivo modely savců ve fyziologi RNDr. Vendula Pospíchalová, Ph.D. (pospich@sci.muni.cz) Ústav experimentálni biológie Oddelení fyziológie a imunológie živočichú BÍ5599 Metódy aplikované biochémie a bunečné biológie 2021-11-22 Struktura dnešní přednášky 1. Etické a legislativní aspekty práce se zvířaty 2. Využití a výběr vhodného zvířecího modelu 3. Nejčastější (savčí) modely ve fyziologii (biomedicíně) 4. Laboratorní potkan 5. Laboratorní myš 6. Chov laboratorních myší 7. Experimenty s laboratorní myšmi 8. Genetická manipulace laboratorních myší 9. Souhrn a závěr Etické aspekty práce se zvířaty Práce se zvířaty je výsada/privilegium, rozhodně ne právo 1. Musí být jasný prínos pro společnost, zdravotní či veterinární péči či získání unikátních poznatků, které jinak než za pomoci živých zvířecích modelů získat nelze 2. Je nutné, aby přínos získaných poznatků jednoznačně převážil případný „diskomforf, bolest či utrpení zvířat během experimentů Etický kodex: - pokud to lze, mají se použít organismy z co nejnižších pater fylogenetického stromu - raději bakterie než myši, raději myši než primáti - důkladně zvážit počet a zdroj organismů, plánované procedury (minimalizovat bolest a znehybňující prostředky, zajistit vhodnou pooperační péči, právo na euthanasii, ...) - součástí projektů pokusů Zásady práce s pokusnými zvířaty „3+1 R" definováno v The Principles of Humane Experimental Technique - W.M.S. Russell and R.L. Burch (1959) • Refinement - zjemnění = dobrá obživa, adekvátní zacházení školenými pracovníky, prostor pro život, pokusy v anestézii • Reduction - zmenšení = počtu zvířat, délky pokusu, pokus se nesmi na stejném zvířeti znovu opakovat • Replacement - nahrazení = pokus se provádí na zvířeti jen tehdy, neznáme-li žádnou alternativu, jinak dáme přednost alternativě (tkáňové kultuře atd. či vývojově nižší organismy) + Responsibility - zodpovědnost = dodržovat zákony, schválené protokoly a etický kodex • Při nedodržení závažné následky nejen pro jednotlivce, ale i pro skupinu, ústav (univerzitu) a celospolečenské vnímání využití laboratorních zvířat při biomedicínském výzkumu Legislatíva upravující podmínky práce s modelovými organismy Nutno dodržovat evropskou směrnici: DIRECTIVE 2010/63/EUOFTHE EUROPEAN PARLIAMENT AND OF THE COUNCIL on the protection of animals used for scientific purposes") https://eur- lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriS erv.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:00 79:en:PDF http://ec.europa.eu/environment/ch emicals/lab_animals/legislation_en .htm a české právní normy Veřejná zakázky Úřední desky Tiskový servis Kalendář akcí Právní předpisy Kontakty E-podatelna ACRi Ochrana zvířat Rozcestník eAGPJ ► Ochrana zvířat Česky English iHledaný výraz ► Systém ochrany zvířat v ČR y Aktuální témata v ochraně zvířat ► Výsledky kontrol ochrany zvířat ► Vzdělávání a kurzy ► Legislativa ► Životni situace Pjbľ 40), uvedeny v certifikátu ke zvířatům • Výběr se řídí doporučeními FELASA -Federation of Laboratory Animal Science AsSOCÍationS (http://www.felasa.eu/) Archivace myších kmenů - kryoprezervace -embrya a spermie - rederivace, in vitro fertilizace (IVF) - pro „oživení" kmene i pro „ozdravení" (očištění od patogenů), ustanovení SPF linie, či izolátorového chovu HAL : 1 KCKJCiY MK BOŕíK A, ŕKAMINAlIlIN ftútttotriiratxtn. vufyiMi VltWlQGT StaphyfococcLEiaurcuv D er rrwrlap hytn lymnlwiitif í rfDrrairwragrfo >rrus iTOMJ O r/o hortp r rcsiř irttum flus-- Lmjmi \Myptat, others .■ M.viijre t.'.iJE ni r:\f-p íWť"M' dltMíTJľrkjm fMÍtiarmp ííyzjni MyniiiiiAv .'Uyobni. fadŕťxďiŕij MAMI «*Prt(Mři« íAMflh IMH í fWJJ Hrficobůctrt tpp. Woi/w cyromeQaknnrm fWIMV.' J ^Ht ufura Ivttapttsa Hji.-.f í-.-i:.-iíi-!i. wrui ÍiHHVI Pastrarriln spp. íntamoeboipp K.ti. ;ť reoNTHYi/j Sa/mmcUa yjp. Molwpwvovirui/WPV 7 andMPVÍJ í r.f#p mém nJiwm atvii fcmwi kymť/iůUyHí iii'TV.'ii.T,] ť í /iŕviii; W.-ii.'W fttfrWUE .'f OlM.l íwtMoťorťi (tVwJyr^A ft C í í \,-ľr Ir-.i. Ih:,< -iri|- SvrjMOCOcaa pneumoniae Tri r/i dito raa jpp. índctfirihi m b i. d utilitu ruJ Ivsl i řa FH-AU liil https://www.janvier-labs.com/421.html Značení laboratorních myší nečné označení nutno u myší s různým genotypem v jedné klícce Během odstavu od matky - rozdělení dle pohlaví a ustřižení špičky ocásku na genotypování 1) Ušní známky 3) Mikročipy 2) Značení uší nebo prstíků %0 O 1 Kiif hl ť ar l.ift Kur -v c c; č 3 3 to 5 3 f. 3 l 11 l » 1 1 \i ili J i'^-ilr-1 HALE F E M ALE Software pro práci s laboratorními zvířaty Show Log I L°89ed in as: -=—' Korinek Vladirr PyRAT Z ihon Based Relations! -acking sciomcs Animals ] Cages ^ Reports ] Requests ] Administration ^ Help ] LogoutfAlias ^ Animals Stud males Pups Apply Filter | Remove Filter | Print | QS | (3 more)_ View Page: 12 3 4 5 n Resutts: 795 animals found in 278 cages. How showing 1 through 100 Current Filter: All mutations, Area 2 basement, Show Deceased/Exported: No, Show Plugged: Yes, Owner=korinek Current Ordering: ID Case.) □ WR ID * □ 13F-0344B Parents t. 64U-10051 □ 18X-20374 □ □ Cage Location C Sex Gen Síra S20M-03700 2F9R3 m N/A Mytí í\dcl DOB Age (W) Project 05/04/2012 39 None 64U-10976 Ů4U-1114Ů S20M-04547 2F9R6 m N/A Villini-ere 64U-11060 64U-11441 B20M-00966 2F9R1 f N/A Villini-ere 64U-11060 64U-11441 B20M-00966 2F9R1 N/A Villini-cre ere Tg Animal Detail Back I Mark in Log 08/08/2012 21 None Add to Request □ 20M-08052 m. 20M-04035 t. 20M-01574 S20M-04413 2F9R5 387 m N/A Hic1/loxP-villin cre ERT □ ~5~ m: 20M-04159 20M-08194 t. 20M-01911 S20M-02750 2F9R3 f: 20M-01912 m N/A Hic1/delEx2-LGR5 Cre Owner: Contact: 20M-08052 Kořínek Vladimír Vladimir. Korinekt Project: ITT old age License: None Condition: Normal 20M-0879Ô f:64U-03309 B20M-003Ô9 2F9R1 392 f N/A Hid/ioxP - ROSA-CreERT2 mW Species: mouse Genetic Background: None Strain: HicldoxP- villin ere ERT □ 20M-09446 m: 20M-08194 t. 20M-08576 S20M-04035 2F9R4 370 m N/A Hic1/delEx2-LGR5 Cre □ 20M-09447 m: 20M-08194 t. 20M-08576 B20M-00866 2F9R1 f N/A Hic1/deiEx2-LGR5 Cre □ 20M-09459 m: 20M-08773 t. 20M-03774 S20M-04529 2F6R3 370 m N/A ZP3-cre m: 20M-08787 □ 20M-09506 f: 20M-08790 S20M-03966 2F9R4 353 m N/A Hid/ioxP - ROSA-CreERT2 Generation Cage Date of Birth Date Sacrificed Breeding Performance H/A S20M-04413 25/05/2011 Hone Pro správu myší i komunikaci s ošetřujícím personálem Každá myš unikátní číslo (i třeba jen virtuální) ■ Mutations Modify Harne Grade ■ IöxP +/+ ■ Cre +1- Možnost filtrování při vyhledávání Nevýhoda - pouze v AJ History Description Source D est Cage Cage Move 20/11/2012 07:43 Moved by kolacir B20M-00960 S20M-Ü4413 Move 01/11/2012 07:14 Moved by kolacir S20M-03117 B20M-00960 Set Project 19/03/2012 21:09 Project changed trom 'None' to 'ITT old age' by — Move 23/02/2012 07:33 Moved by kolacir B20M-00481 S20M-Ü3117 Move Ü6/Ü2/2Ü12 12:47 Moved by kolacir S20M-02929 B20M-ÜÜ481 Move Ü3/Ü1/2Ü12 11:21 Moved by kolacir B20M-00630 S20M-Ü2929 Mnv* 30/11/2011 Moved hvknl^ir s?nu-n?ri4i R?nM.nni=i3n II. ^Experimental toolbox" - běžně užívané metody a zdroje - přirozené a indukované mutace - embryonální kmenové buňky (ESCs) - „knock-out a knock-in" myši -Cre/loxP systém - nové metody „gene-targetingu" - ZFN, TALEN a CRISPR/Cas9 - transgenní myši - myší kliniky Genetika laboratorních zvířat 1. Isoqenni = geneticky definované kmeny (isogenicita= genetická totožnost všech jedinců) - inbrední kmeny - vznik příbuzenskou plemenitbou po více než 20 generací (bratr a sestra nebo rodič a potomek) - koizogenní (=mutantní) kmeny - od původního kmene se liší jen v jednom genu, ve kterém došlo k mutaci - kongenní kmeny - vznik křížením dvou kmenů a následným zpětným křížením (minimálně 10, selekce sledovaného znaku), výskyt specifických genů jednoho kmene na pozadí kmene druhého - konsomické kmeny -na pozadí jednoho kmene přenesen zpětným křížením celý Chromosom kmene druhého, obtížný proces vzniku a udržování knemů 2. Neisoqenní = geneticky nedefinované kmeny - outbrední linie - geneticky heterogenní populace, vyhýbáme se příbuzenskému křížení, tak aby koeficient inbreedingu zůstával co nejnižší - vhodné pro behaviorální pokusy (potkani) 3. Kmeny geneticky částečně definované N ej častej š í kmeny laboratorních myší • In bred ní kmen - všichni jedinci jsou odvozeni od jediného páru a jsou homozygotní ve všech alelách = geneticky identičtí jedinci • fenotypová uniformita (nízká variabilita reaktivity v experimentu) • Vytvořeny v 1. pol.20.stol. a udržovány (Jackson Lab,NIH,Charles River) • C57BL/6J - „black 6" - nejpoužívanější kmen, první osekvenovaný myší genom, permisivní pro většinu mutací, resistentní vůči nádorům, možnost indukce obezity, DM II. typu i aterosklerózy dietou • 129 - pro „gene-targeting" - vysoká frekvence produkce zárodečné linie, mnoho odvozených linií embryonálních kmenových buněk • BALB/c - produkce monoklonálních protilátek pomocí hybridomů • C3H/HeJ - používaný v mnoha odvětvích - výzkum infekčních chorob,.. • FVB/NJ - pro transgenezi - velký samčí pronukleus a velká mláďata Metody funkční genomiky Funkční genomika cílem je určení funkce všech genů v genomu Dva hlavní přístupy: A) přímá (klasická) genetika (forward genetics) 1. fenotyp (znak) 2. gen - vychází z NÁHODNÉ mutageneze celého genomu B) reverzní genetika (reverse genetics) 1. sekvence DNA 2. Fenotyp základem jsou CÍLENÉ mutace Reverse genetics Knockouts Identify gene Gene-targeting I I Forward genetics Whole genome random mutagenesis Mutagenise Identify phenotype Identify gene Přímá genetika - přirozené a indukované mutace 2. Kolekce přirozeně se vyskytujících mutací vzácný vznik, většinou ve velkých chovech př. Nahá („nude", nu/nu, athymická, Foxnlnu) myš • 1966: vznik (Glasgow, UK), 1968: myši jsou imunodeficientní (nemají thymus), 1996: myši jsou mutantní v transkripčním faktoru Foxnl Indukované mutace - a) chemická mutaqeneze nejčastěji N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) př. ApcMin myš - model vzniku kolorektálního karcinomu, mutace v genu Apc b) Genetické mutace - „gene-traps" (genová past) inaktivace genu (SA-splice acceptor), exprese reportéru a DNA značka pro rychlé určení zasaženého genu Gene Trap Vector LAC Z NEO I Endogenous Gene — E»on 1 j- E»on 2 |— I Trapped Gene — Enon 1 |—| | LACZ | NEO |—| Exon 2 |— SA SITE Transcripts Eion 1 LACZ NEO Reverzní genetika „Gene targeting" - vnášení cílených mutací The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2007 Mario R. Capecchi, Sir Martin J Evans, Oliver Smithies The Nohe t Prize in Physiology 01 Medicine 200ř rtobel Prize Award Ceremony Mario R. Capeccfil Sir Martin J Evans OSver Smitťšes Vnášení cílených mutací bylo dříve omezeno pouze na buňky s vysokou frekvencí homologní rekombinace, což jsou mimo kvasinek jen myší embryonální kmenové buňky To bránilo vnášení cílených mutací u jiných organismů (uplatňovala se proto především transgeneze) Zlom nastal se zavedením nových metod vnášení cílových mutací (ZNF, TALEN a především Crispr/Cas9), ty umožnily vnášet Mari0 R Capecch| cílené mutace prakticky do všech buněk a organismů "for their discoveries of principles for introducing specific gene modifications in mice by the use of embryonic stem cells". Rholo. U. Nfcnta Modem Sir Martin J. Evans Oliver Smithies Gene targeting" dříve - homologní rekombinace cílového vektoru v embryonálních kmenových buňkách step 1 Gene targeting in ES cells 1. ES cell culture Embryonic stem (ES) cells are cultivated from mouse pre-implant at ion embryos (blastocysts). Rare cell carrying targeted gene Positive-negative selection Target gene 4. Proliferation of targeted ES cell Selection for presence of neo! and absence of HSV-tk enriches targeted ES cells. Pure population of ES cells carrying targeted gene Inserted DNA Vector I HSV-tk 1 Homologous DIMA Homologous DNA 2. Construction of targeting vector The vector contains pieces of DNA that are homologous to the target gene, as well as inserted DNA which changes the target gene and allows for positive-negative selection. 3. ES cell transfection The cellular machinery for homologous recombination allows the targeting vector enables the target vector to find and recornbine with the target gene. Vector HSV-tk 1 I I i i zerr: Target gene Homologous recombination .:m Targeted gene Jak získat z pozměněných embryonálních kmenových buněk myš step 2From gene targeted ES cells to gene targeted mice 5. Injection of ES cells into blastocysts The targeted ES cells are injected into blastocysts,,, ... where they mis and form a mosaic with the cells of the inner cell mass from which the embryo develops, The injected blastocysts are implanted into a surrogate mother where they develop into mosaic embryos, Mosaic inner cell mass 6. Birth and breeding of mosaic mice The mosaic mice mate with normal mice to produce both gene targeted and normal offspring. Bom mosaic mice Mosaic mouse c7 Normal Gene targeted mice - called "knockout mice" when the targeted gene is inactivated Sperm Sperm Normal mice ©The Nobel Committee for Physiology or Medicine Illustration: Annika Rohl Genový „knock-out, knock-in" Ä) Klasický (celkový, totální) knock-out - gen zcela vyřazen (dříve často nahrazen selekčním markerem), může vést ke smrti jedince již v prenatálním věku, což neumožňuje studium funkce v dospělém organismu B) Knock-in - do genového lokusu vložena mutace (záměna, inserce, delece,...) nebo např. reportérovy gen či Cre rekombináza C) Podmíněný (kondicionální) knock-out - Cre/loxP systém místně a časově specifická inaktivace genu NORMAL GENE X Více informací na: https://www.youtube.com/watch?v=oLPjiwM0G7A r J L C) FLOXED GENE A) GENE KNOCK-OUT Cre/loxP systém - podmíněná delece genu loxP site (locus of X-ing over) ATAACTTCGTATA ATGTATGC TATACGAAGTTAT • CreERT2-Cre recombináza fúzovaná s estrogenovým receptorem je regulována hydroxytamox ifenem (aktivní až po injekci tamoxifenu) • CreER12-umožňuje místně i časově specifickou regulaci rekombinace DNA inverted repeat Spacer inverted repeat ovary female gcmiline {ZP.VCr^ P^k/Cre. ...J i AxC Line A "ßoxed " ücquence Cne — loxP sides in the ííUfle urientaiiOrt gent X —P~^M— it Lit sumiiJticc diilcíed in all the cells + -I- Deletion Babinet C, Cohen-Tannoudji M.; 2001 Ooüs with a Tran ügemc mice expressing Ctc in: brain Line B a given tissue conditional mutation: sequence deleted tn a given lissue Nové metody „gene targetingu" „B.C." Zinc finger nuclease (ZNF) technologie 2. TALEN (Transcription Activator-Like Effector Nucleases) • založeno na endogenních mechanismech opravy poškozené DNA • funkční v mnoha buněčných liniích a organismech • „knock-outové" organismy připravené za měsíc či dva (ľfí; m Ji 34 27 19 11 10 hESC CHO hESC CD34 HEK293 iFSC Uvař i I https://www.genengnews.com/insights/ genome-editing-b-c-before-crispr/ l-Scei ZFN TALEN CAS9 A timeline of edited cells, organisms, editing outcomes, and nucleases from the "B.C" age (B.C. = before CRISPR, = before 2013). The organisms, left to right, are: budding yeast and mice (gene targeting); tissue culture cells; Xenopus oocytes; Drosophila melanogaster; human tissue culture cells; zebrafish; maize; rat; mouse; silk moth; C. elegans, Xenopus tropicalis, rabbit, pig; rice. CRISPR/Cas9 technologie - revoluce ve vědě https://www.voutube.com/watch?v=J EYSQ-KxOIE&ab channel=TED https://www.youtube.com/watch?v=tr QtaluDaD4&ab channel=CENOnline https://www.youtube.com/watch?v=2p P17E4E-08 designová nukleáza ZFN, TALEN, CRISPR-Cas9 Dvojitá šroubovice DNA nehomologní _\ spojení konců 1/ - Genová disrupce (knock-out) Jednovláknové zlomy DNA injekce Dvojvláknové zlomy DNA homologní oprava Zavedení nového genu (knock-in) -1-' Embryo ^ ^ Klonování Příjemkyně Genově editované potomstvo f C 3. 0 in Z 01 3 a ■-■ n a. THE NOBEL PRIZE IN CHEMISTRY 2020 http://infopigs.blogspot.com/2019/09/transgenni-prasata.html Emmanuelle Jennifer A. Charpentier Doudna "for the development of a method for genome editing" THE ROYAL SWEDISH ACADEMY OF SCIENCES Transgenní zvířata Transgenní organismy - jejich genom obsahuje cizorodou DNA, jejíž místo integrace je však NÁHODNÉ Příprava (pokusná myš) - injekce „nahé" DNA (konstruktu) do zygoty • náhodná integrace do genomu (často ve formě „ tandem arrays") • implantace do „náhradních" (foster) matek (200-300 embryí) • genotypování potomstva na přítomnost transgenu (1-10%) • křížení „founderů", analýza fenotypu \*nilii*lrai!cee3 ( ^ \___- X 4^ jfá^ 4^ -á^ □OTOCyíML Tfl" "Tfl" Ifl1 "HJ~ Úspěšnost cca 1-10% | Transgeneze Transgeneze vs. Gene targeting Transgenní myši Smysl pokusu - co se stane, dojde-li k expresi genu v jiné než původní tkáni • nadprodukce proteinu (v původní či jiné tkáni) • produkce změněného proteinu či Cre rekombinázy • studium regulačních oblastí genu nebo značení buněk in vivo (exprese „reportérových" proteinů - GFP, (3-galaktozidáza) • Výhody - rychlost a jednoduchost provedení • Nevýhody - náhodná integrace konstruktu - narušení genů v místě integrace • poziční efekt regulačních oblastí genů v místě integrace na expresi transgenu (umlčování transgenu, ovlivnění exprese trangenu atd.) • integrace více kopií konstruktu (efekt „genové dóze") ■ _y gene ^ ( • Řešení - nutnost analýzy více „founders" *** • použití DNA sekvencí eliminujících poziční efekt (inzulátory, Matrix Associated Regions; MAR) • použití velkých částí chromozomů (Bacterial Artificial Chromosome; BAC recombineering) « insulator { * cnhamicr enhance! International knock-out mouse consortium Cíl IKMC -připravit (kondiciovaný) knock-out pro každý myší gen Pomoci tohoto přístupu zjistit funkci každého genu Nutno systematicky studovat fenotyp myší - tzv. myší kliniky (jedna i v BIOCEV ve Vestci u Prahy) I M P C ADVANCED TOOLS http://www.mousephenotype.org/about-ikmc A Login ^Register ABOUTIMPC NEWS & EVENTS CONTACT MYIMPC Home» About IMPC .About IKMC About the International Knockout Mouse Consortium The members of the International Knockout Mouse Consortium (IKMC) are working together to mutate all protein-coding genes in the mouse using a combination of gene trapping and gene targeting in C57BL/6 mouse embryonic stem (ES) cells. The IKMC includes the following programs: • Knockout Mouse Project (KOMP) (USA) • CSD, a collaborative team at the Children's Hospital Oakland Research Institute fCHQRDig. the Wellcome Trust Sanger Instituted and the University of California at Davis School of Veterinary Medicine d. led by Pieter deJong, Ph.D., CHORI, along with K. C. Kent Lloyd, D.V.M., Ph.D., UC Davis; and Allan Bradley, Ph.D. FRS, and William Skarnes, Ph.D., at the Wellcome Trust Sanger Institute. • Regeneron, a team at the VelociGeneig division of Regeneron Pharmaceuticals; Inc., led by David Valenzuela, Ph.D. and George D. Yancopoulos, M.D., Ph.D. • European Conditional Mouse Mutagenesis Program (EUCOMM)^1 (Europe) • EUCOMM: Tools for Functional Annotation of the Mouse Genome (EUCOMMTOOLS) (Europe) • North American Conditional Mouse Mutagenesis Project fNorCOMM)^1 fCanada] • Texas A&M Institute forGenomic Medicine (TIGM)iff (USA) Jak lze geneticky upravené myši systematicky studovat? Czech Centre for Phenogenomics in&ciiutB cl MorEcular Ľenetics of the caecti Acndemv of Sciences Madel Generation ■ Phenotyping ■ Animal Facility ■ Preclinical Testing - search the web ... KEY: ™ HOM Viable line ™ HOM Lethal line ■■■■ HET Viable line ■ ■■ HQM SubViable Mandatory tests -r.—t.—tt—t—7—i Test sindevelopment Non-Manoatory tests ---' orunderconsideration About Us Research & Education Events Cuntutt ~ We are enhancing our understanding of the genetic basis for human diseases What can we help you with From our Twitter https ://www. phenogenomics.cz/ t^s«.*«»«*«* Fenotypování (Phenotyping) Komplexní fyziologické a morfologické posouzení myši v SPF prostředí pomocí standardizovaných testů dle IMPReSS (International Mouse Phenotyping Resource of Standardised Screens), Viability Embryo LacZ —V Gross Morphology Embryo Gross Morphology Placenta E m bryo LacZ Viability OR Gross Morphology Embryo Gross Morphology Placenta HCT Viability Histopathology Embryo Histopathology Placenta Gross Morphology Embryo Gross Morphology Placenta pCT HREM Viability Histopathology Embryo Histopathology Placenta Gross Morphology Embryo Gross Morphology Placenta OPT HREM Viability 7M + 7F Mutant Adult Mice Open Field Grip Strength Hematology Adult LacZ Weight Curve - 4wk to 16wk Y-maze / Fear Light Dark Conditioning Echo 1 Acoustic Startle/PPI ] Calorimetry ]^|^^^| ChalEenge Whole Body Plethysmography Clinical Chemistry Insulin Blood Level Immuno-phenotyping I n tra periton ea I Gl u cose Tolerance Test HeartWeight | Gross Pathology and Tissue Collection Auditory Brain Stem Response 1 Eye Body Composition (lean/fat) 1 Morphology [Organ Weight] Tissue embedding & block banking Histopathology Shrnutí Ochrana zvířat je etický imperativ nejen během experimentů s nimi Myš je nejpoužívanější model pro biomedicínský výzkum Chov konvenční vs. bariérový chov IVC, SPF, izolátorový chov Výborný genetický model - inbrední kmeny, možnost manipulace genomu - gene targeting vs. transgeneze Klasický vs. kondicionální knock-out (knock-in) + Cre/loxP systém Databáze - www.jaxmice.org, www.komp.org, www.eucomm.org, www.informatics.jax.org, www.creline.org SCIENtEphotOLI Děkuji za pozornost!