C7188 Úvod do molekulární medicíny 8/10 MOLEKULÁRNÍ FARMAKOLOGIE II GENOVÁ TERAPIE Ondřej Slabý, Ph.D. Masarykův onkologický ústav CEITEC Lékařská fakulta Masarykovy univerzity © Ondřej Slabý, 2009 Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 3 Klinické hodnocení nových léčiv Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 4 © Ondřej Slabý, 2009© Ondřej Slabý, 2009 Klinické hodnocení nových léčiv I. fáze klinického hodnocení * První podání lidským subjektů * Prioritou je hodnocení bezpečnosti * Hlavním cílem je stanovení tzv. MAXIMÁLNÍ TOLEROVATELNÉ DÁVKY (MTD) * Stanovují se optimální dávkovací řežimy pro další fáze klinického zkoušení * Dalším cílem je popis tzv. BEZPEČNOSTNÍHO PROFILU PŘÍPRAVKU * Farmakokinetické analýzy * Charakteristické je zařazováni zdravých dobrovolníků (v případě vysoce toxických látek=cytostatika pacienti) * Počet zařazených subjektů 10-20 * Pro design je typické navyšování dávky obvykle ve skupinách 3 pacientů Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 8 © Ondřej Slabý, 2009 Klinické hodnocení nových léčiv Randomizace je proces náhodného rozdělování subjektů do srovnávacích ramen klinického hodnocení (kompletní, bloková, stratifikovaná). Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 5 © Ondřej Slabý, 2009 Klinické hodnocení nových léčiv II. fáze klinického hodnocení • Prioritou je hodnocení účinnosm léčby • Hlavním cílem této fáze je tedy neukončit je v případě slibné účinnosm a naopak ukončit je v případě průkazu účinnosm nedostatečné • Hodnocení bezpečnosm a tolerance • Výsledky této fáze jsou rozhodovacím bodem žadatele o registraci léčivého přípravku pro jeho testování v dalších fázích • Experimenty jednoramenné a dvojramenné • Zařazováni jsou pacienm splňující vstupní kriteria (diagnóza, pokročilost onem.) • Počet subjektů 20-200 • Léčivo je podano soubrou a vyhodnocen podíl respondérů, pokud neodpovídá předpokladu je studie ukončena, v opačném případě zařazeni další Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 6 © Ondřej Slabý, 2009 6 Strana 3 © Ondřej Slabý, 2009 III. fáze klinického hodnocení • Z předchozích fází máme informace o bezpečnosm, dávkování a účinnosm • Cílem této fáze je prostřednictvým řízeného experimentu přímé srovnání bezpečnosm a účinnosm hodnoceného přípravku s kontrolou, kterou může být placebo nebo aktuálně používaná nejlepší léčba. • Hlavním cílem je přinést data prokazující, že účinnosm a bezpečnost léčivého přípravku jsou stejné nebo lepší než u dosud použivaných přípravků • Zařazováni jsou pacienm splňující vstupní kriteria (diagnóza, pokročilost onem.) • Počet subjektů 100-1000 • Randomizace, paralelní, cross-over uspořádání IV. fáze klinického hodnocení • Hodnocení prováděna až po registraci daného přípravku a zahájení jeho používání v běžné léčebné praxi • Hlavní cíl ověřit vlastnosm léčivého přípravku v reálném prostředí v reálných populacích pacientů Klinické hodnocení nových léčiv Úvod do molekulární medicíny 8/12 © Ondřej Slabý, 2009Strana 9 Klinické hodnocení nových léčiv INTERIM ANALÝZA – plánované jednorázové nebo opakované statistické zpracování dat klinického hodnocení s předem jasně definovanými kritérii pro případné ukončení nebo pokračování experimentu v závislosti na vlastních výsledcích interim analýzy. ETICKÉ A EKONOMICKÉ DŮVODY ZASLEPENÍ – single blinding – zaslepena je pouze jedna strana subjekt hodnocení nebo investigátor double blinding – zaslepeni jsou subjekty hodnocení i investigátor triple blinding – zaslepen je i personál spravující data experimentu Zaslepení je prvek designu významně zvyšující jeho objektivitu. METANALÝZA – je metodika sofistikovaného zobecnění výsledků dvou a více nezávisle Provedených experimentů. Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 20 © Ondřej Slabý, 2009 Strategie cílené léčby Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 10 © Ondřej Slabý, 2009 Terapeutické protilátky • Emil von Behring – objev protilátek, terapeutický význam coby „magických střel či otrávených šipů“ - polyklonální • Paul Ehrlich zavedl pojem imunita, antigen, protilátky, imunoterapie • 1975 C.Milstein a G.F.Kohler popsali technologii tvorby MP (1984-Nobelova cena) V jedné hybridní linii spojili biologické vlastnosti B-lymfocytu tvořícího protilátky a nádorové buňky myelomové řady (tzv. hybridomová technologie) - monoklonální Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 12 Struktura promlátky - imunoglobulinu Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 11 © Ondřej Slabý, 2009 Příprava monoklonálních protilátek Nemodifikované myší mAb – pro lidský organismus jsou cizorodé a vyvolávají imunitní odpověď tj. tvorbu antimyších protilátek (tzv. HAMA), které vedou až k anafylaxi či sérové nemoci Humanizované mAb (chimerické humánní/myší) – připravují se spojením hybridomové a DNA rekombinantní technologie Variabilní úsek MP kódující anlgenní specifitu je myší Konstantní úsek MP je z lidského imunoglobulinu Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 13 © Ondřej Slabý, 2009 Typy monoklonálních protilátek Úvod do molekulární medicíny 8/12 Biologické účinky navozené mAb Strana 16 © Ondřej Slabý, 2009 Úvod do molekulární medicíny 8/12 Klener et al, 2010 Biologické účinky navozené mAb/typy monoklonálních promlátek Přímý účinek (indukce apoptózy, interference s receptorem a ligandem, ovlivnění účinnosti klasických cytostatik, dle charakteru antigenu) Účinek zprostředkovaný cytotoxickými buňkami (ADCC) Účinek zprostředkovaný komplementem Protilátky klasické-monospecifické -bifunkční a bispecifické – trifunkční Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 15 © Ondřej Slabý, 2009 Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 14 © Ondřej Slabý, 2009 Typy monoklonálních protilátek Protilátky konjugované Konjugované s imunotoxiny Konjugované s radionuklidem Konjugované s cytokiny Konjugované s cytostatiky Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 17 © Ondřej Slabý, 2009 Přehled mAb používaných v terapii nádorových onemocnění Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 20 © Ondřej Slabý, 2009 Strategie cílené léčby Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 18 © Ondřej Slabý, 2009 Cílená léčba: terapie cílená na nádorové buňky – inhibice proliferace Inhibice receptorových tyrozinkináz (RTK) RTK představují klíčové receptorové struktury extracelulárních mitogenních signálů (růstových faktorů) Monoklonální promlátky jsou zacílené na extracelulární receptorovou část RTK. Nízkomolekulární tyrozinkinázové Inhibitory (TKI) blokují intracelulární tyrozinkinázovou doménu RTK. Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 19 © Ondřej Slabý, 2009 Cílená léčba: terapie cílená na nádorové buňky – inhibice proliferace Klener, 2010 Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 22 © Ondřej Slabý, 2009 Receptorová rodina ErbB a nádorová onemocnění ErbB jsou receptory typu 1 tyrozinkinázové rodiny, představují 4 transmembránové glykoproteiny ErbB1 -ErbB4 (HER1 -HER4) Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 21 © Ondřej Slabý, 2009 Cílená léčba: terapie cílená na nádorové buňky – inhibice proliferace Klener, 2010 Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 23 © Ondřej Slabý, 2009 Cross-talk s dalšími onkogenními signálními drahami Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 25 Cílená léčba: terapie cílená na nádorové buňky – inhibice proliferace Úvod do molekulární medicíny 8/12 © Ondřej Slabý, 2009Strana 26 Duální inhibice kináz Úvod do molekulární medicíny 8/12 © Ondřej Slabý, 2009Strana 27 © Ondřej Slabý, 2009 Cílená léčba: terapie cílená na nádorové buňky – inhibice proliferace Klener, 2010 Strana 28 © Ondřej Slabý, 2009 Úvod do molekulární medicíny 8/12 Cílená léčba: terapie cílená na nádorové buňky – inhibice angiogeneze Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 29 © Ondřej Slabý, 2009 Schemamcké znázornění strategií cílené léčby Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 32 © Ondřej Slabý, 2009 Test for drug response* 60% benefit from therapy 86% benefit from therapy Try alternate therapy High response to therapy Low response to therapy Plate 0000066592 Proc e ss Group 0799006 Ma rke r WI7466-1 (#592) Status: GetGenos Pass User: vish Pass Unknowns: #Wells Passed 84 Failed 0 Averages X Y XX 2.77 0.14 XY 2.78 2.65 YY 0.15 2.74 Controls: (Max) X Y NEG - PCR 0.12 0.07 Syn 2.68 0.36 66592 66592 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Neg. Unknown Synthetic Temp A/A C/C A/C Treat TEST Don’t Treat? * Specific blood, lssue or imaging marker that can be used to prospeclvely idenlfy palents for efficacy, safety and/or dose Cílená léčba: prediktivní onkologie: individualizace léčby K-Ras Mutant 99% 1% ORR=No ORR=Yes Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 31 © Ondřej Slabý, 2009 Cílená léčba: predikmvní onkologie: individualizace léčby Results: K-Ras Mutation and OVERALL RESPONSE RATE K-Ras Wildtype 78% 22% ORR=No ORR=Yes CETUXIMAB PANITUMUMAB mAb prom EGFR Nemalobuněčný karcinom plic a mutace EGFR – erlomnib, gefimnib Maligní melanom a mutace V600E genu BRAF – vemurafenib GIST a mutace KIT a PDGFRA – imamnib a sunimnib Další příklady prediktivních biomarkerů – companion diagnostics Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 33 © Ondřej Slabý, 2009 "Here's my sequence..." Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 34 © Ondřej Slabý, 2009 Moderní transportní systémy léčiv: lipozomy a nanočásmce Ideální nano- transportní systém zajistí, že konjugát léčiva a transportního systému doručí léčivo do specifického místa účinku. Lipozomy a nanočástice jsou účinné technologie pro racionální transport cytostatik v terapii nádorových onemocnění. Jejich užití zlepšuje farmakokinetické vlastnosti, kontrolované a prodloužené Uvolňování léčiva a především nižší systémovou toxicitu. Do praxe zaveden lipozomalní Doxil (doxorubicine), nanočásticový na albumin vázaný Paclitaxel – nab Abraxane Lipozomy jsou to částice tvořené fosfolipidy o velikosti 0,6–2 μm s tloušťkou membrány 5 nm. Jádro i povrch lipozomu je hydrofilní, vnitřek membrány tvoří lipofilní zbytky mastných kyselin fosfolipidů. Léčivo je možné umístit podle jeho povahy do jádra nebo do membrány lipozomu Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 35 © Ondřej Slabý, 2009 Moderní transportní systémy léčiv: lipozomy a nanočásmce Úpravou povrchu lipozomů, např. polyethylenglykolem (PEG), se prodloužila jejich cirkulace v krevní plazmě a částečně se vyřešil problém s jejich vychytáváním jako cizorodých čáslc relkuloendoteliárním systémem. V praxi se používají léky s obsahem daunorubicinu a doxorubicinu jako parenteralia ve farmakoterapii Kaposiho sarkomu, s amfotericinem B při léčbě invazivních plísňových infekcí, s obsahem virionů inaklvované hepalldy A jako očkovačí látka prol hepalldě A, při terapii syndromu dechové nedostatečnosl u předčasně narozených děz s obsahem lyofilizátu z hovězích plic, s ekonazolem při lokálním ošetření plísňových kožních chorob. Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 36 © Ondřej Slabý, 2009 Lipozomy: aktivní a pasivní transport Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 37 © Ondřej Slabý, 2009 Nanočásmce V současnosl je největší pozornost věnována nanočáslcím. Svou velikosz 60–300 nm leží nanočáslce na subcelulární úrovni a mohou se proto jako lékové mininosiče cíleně usměrnit do orgánů, tkání, buněk a nemocných čász těla, které zůstávají jiným lékovým formám nedostupné. Jsou určeny pro cílené uvolňování a působení léčiva při perorálním, parenterálním i lokálním podání, pro aplikaci do oka i nosu. Volbou metody přípravy a aklvizací povrchu nanočáslc je možné je nasměrovat na různé cíle. Očekává se od nich využiz při cíleném transportu cytostalk, specifickém doručení anlbiolk a anlparazilk, v perorálních lékových transportních systémech pro inzulin, proteiny, geny, pro vakciny i při topické aplikaci. Solid lipids nanočástice Polymerové nanočástice PLA - polyactid PLGA - poly(D,L-lactide–co-glycolide) PEG - polyethylenglykol Zlaté nanočástice Albuminové nanočástice Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 38 © Ondřej Slabý, 2009 Nanočásmce Syntéza zlaté nanočásmce Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 39 © Ondřej Slabý, 2009 Nanočástice Malam et al., Trends in Pharmacological Sciences, 2009 Úvod do molekulární medicíny 8/12 Strana 40 © Ondřej Slabý, 2009 Albuminové nanočásmce Abraxane je první léčivo založené na nanočáslcovém transportu vazbou na albumin (nab). nab Paklitaxel má prol volnému paklitaxelu delší poločas a prol rozpozštědlu Cremophor EL, ve kterém je paklitaxel podáván nezpůsobuje hypersenzilvitu. Imunoterapie představuje takový způsob léčby, kdy k navození léčebného účinku využíváme buňky nebo molekuly imunitního systému. Mezi imunoterapii můžeme řadit také léčebnou vakcinaci, která navozuje specifickou imunitní odpověď vůči onemocnění, které propuklo již před začátkem vakcinace. Naopak preventivní vakcinaci, kdy očkování provádíme před propuknutím onemocnění, mezi imunoterapii neřadíme. Pasivní imunoterapie Pasivní imunoterapie znamená podání již hotových složek imunitního systému, které jsou schopny plnit svou funkci bez jejich další aktivace. Mezi pasivní imunoterapeutické postupy řadíme např. podání směsného koncentrátu imunoglobulinů získaných z krevní plazmy zdravých dárců krve. Aktivní imunoterapie Aktivní imunoterapie znamená, že podáním látek nebo buněk dojde nejprve k aktivaci imunitního systému, která následně zabezpečí léčebný efekt. Vlastní podané látky nebo buňky přitom zpravidla nemají přímý léčebný efekt. Ten je dosahován teprve specifickou nebo nespecifickou aktivací imunitního systému. IMUNOTERAPIE IMUNOTERAPIE - přehled IMUNOTERAPIE – Dendritické buňky IMUNOTERAPIE – Dendrimcké buňky Terapeumcké využiy kmenových buněk Co je to genová terapie? • The inserlon of usually genelcally altered genes into cells especially to replace defeclve genes in the treatment of genelc disorders or to provide a specialized diseasefighlng funclon - Merriam-Webster DicOonary • Experimental treatment of a genelc disorder by replacing, supplemenlng, or manipulalng the expression of abnormal genes with normally funcloning genes - NaOonal Center for Biotechnology • It is an approach to trealng disease by either modifying the expressions of an individual's genes or correclon of abnormal genes - American Society of Gene and Cell Therapy • Gene therapy is the use of DNA as a pharmaceulcal agent to treat disease - Wikipedia Genová terapie monogenních podmíněných chorob je léčebný postup při němž je do genomu pacienta vložena sekvence DNA přičemž tato sekvence kóduje nějaký chybějící nebo nefungující protein. Genová terapie je nástroj moderní terapie založený na cílené modifikaci (či interakci?) s buněčnou DNA/RNA za účelem aktivace nebo inaktivace konkrétního genu. ??? 1990 PRVNÍ GT ADA-SCID Milníky a píky genové terapie Základní typy genové terapie Genová terapie somamckých buněk vs. Genová terapie zárodečných buněk (celosvětové moratorium) Genová terapie EX VIVO vs. IN VIVO Tři základní principy genové terapie Anguela XM, Annual Review of Medicine, 2019 ? Genová terapie První úspěšná genová terapie byla provedena 24. září 1990 v NIH v Marylandu •čtyřleté děvčátko trpělo nemocí zvanou ADA (adenozin deaminázová deficience) „bublinové děti“ • při léčbě do ní byly vloženy její vlastní buňky imunitního systému (zejména Tlymfocyty), které byly upraveny tak, že do nich byla ex vivo vložena normální kopie ADA genu •několik týdnů po té, co genová terapie začala, došlo k zlepšení práce imunitního systému a po několika měsících začala pacientka žít „relativně normální život“ První evidentní úspěchy genové terapie: X-SCID §případ z roku 1990 získal mnoho publicity §později bylo opakováno s dalšími pacienty (na jednoho pacienta 10 – 12 treatments) úu některých z nich došlo k dramalckému zlepšení úvšichni pacienl ale byli zároveň léčeni enzymovými preparáty, takže není jisté, co stojí za zmto úspěchem §první jednoznačný a jasný úspěch genové terapie se projevil na příbuzné nemoci, na X-linked SCID §opět šlo o léčbu ex vivo §byl užit retrovirus ve kterém byl obsažen gen IL2Rγc §kmenové buňky kostní dřeně exprimující CD34 (=což dělají pouze hematopoielcké buňky kostní dřeně) byly inkubovány 3 dny v přítomnosl retrovirového vektoru úběhem tohoto času se buňky rozdělily 5-8x §tyto buňky byly později vráceny do pacientů §u 9 z 11 pacientů došlo k pronikavému zlepšení a lto pacienl mohli vést normální život !!!!! U dvou z těchto vyléčených chlapců došlo později k vzniku leukémie, skoro jistě díky aklvaci LMO2 onkogenu tento onkogen se aklvoval zm, že do jeho blízkosl se inzertoval retrovirus díky tomuto faktu byly pokusy s retrovirální transdukcí lymfocytů pozastaveny He said that his group used the gene-editing tool CRISPR/Cas9 to disable the CCR5 gene in the fertilized eggs that produced the babies, called “Lulu” and “Nana” (not their real names). CCR5 produces a protein that allows the most common version of the HIV virus to enter cells. Some people naturally have mutations in the gene that help protect them from HIV infection. Such “gene surgery” has already proven safe in adults with HIV, He said in the video. HIV infection is still a deadly disease and in the developing world, “discrimination increases the devastation,” He said. Gene editing could spare such children from their parents’ fate, He claims. Metody dopravení DNA do tkáně Pomocí -virových vektorů -nevirově Metody dopravení DNA do tkáně – virové vektory RETROVIRY -jsou schopny atakovat pouze dělící se buňky (neprochází kompaktní jadernou membránou) - napadají především T-lymfocyty - pouze ex-vivo terapie a náhodná integrace do hosltelského genomu - riziko inzerční mutageneze - maximální velikost transgenu do 7.5 kbp - retroviry nezpůsobují lyzi buňky LENTIVIRY mohou nahradit klasické retroviry, jelikož jsou schopny infikovat a integrovat svůj genom do nedělících buněk např. neurony, makrofágy, hematopoemcké kmenové buňky a buňky svalů a jater delece v LTR, není schopen produkovat infekční čáslce, ale schopen integrace ADENOVIRY dsDNA viry napadají všechny typy buněk virová DNA se neintegruje do genomu hosmtele exprese je silná ale pouze dočasná (max. měsíc) způsobují silnou imunitní odpověď (exprese wild-type proteinů virové čáslce) nová generace adenovektorů neobsahující přirozené geny nejsou vhodné pro léčbu nádorových buněk, protože ty na ně nemají receptory Většina lidí má prollátky, 90% vektorů je degradováno během prvních 24 hodin od podání ADENO-ASOCIOVANÉ VIRY (AAV) dsDNA viry Většina odovozena od serotypu 2 (AAV2) nikdy nespojovány s lidskými nemocemi napadají všechny typy buněk virová DNA se integruje do genomu hosltele na specifickém místě (u člověka na konci 19tého chromozomu) Není riziko inzerční mutageneze exprese je ale slabá a vektory mají malou kapacitu 4kb nezpůsobují silnou imunitní odpověď Kdy je doporučeno dlouhodobé sledování záleží na použitém vektoru Vector Pros Cons Long-Term Follow-Up Recommended? Adenovirus ► Capable of holding large amounts of DNA ► Non-integrating, less risk of mutations ► Only the cells that are directly modified will express the gene of interest – longterm expression is unlikely ► Can induce immune response No* Adeno-associated virus (AAV) ► Not known to cause human diseases, so very little risk of immune response ► Integrates at specific site so limited risk of mutations ► Can only hold a small amount of DNA ► Transient expression Product specific (2-5 years of follow-up) Retroviruses (e.g. lentivirus, gammaretrovirus) ► Long-term expression of the gene due to DNA integration ► Can infect both dividing and non-dividing cells ► Non-specific insertion site can cause high risk of mutations ► Potential for activation of protooncogenes and risk of malignancies Yes Nonviral Vectors (e.g. plasmids, RNA) ► Capable of holding large amounts of DNA ► No immune response ► Less efficient at modifying cells No *Specific circumstances that indicate persistent expression of the transgene, in the absence of integration or genome editing, may require LTFU observations to mitigate long term risks to subjects. Jaké vlastnosti by měl mít ideální vektor • Bezpečný (bez vedlejších účinku, neimunogenní) • Cílený na příslušné buňky • Snadno získatelný (produkce, purifikace apod.) • Stabilní • Efeklvní v doručení DNA • Snadno aplikovatelný • Schopný chránit genelckou informaci, kterou nese • Nesmí obsahovat –sekvence homologní s funkčními geny, jiné čtecí rámce, informace pro produkci toxického produktu apod. Workflow při výrobě přípravku ex vivo genové terapie Příprava CAR T-lymfocytů Příprava T lymfocytů s chimerickým anmgenním receptorem (CAR) - Ex vivo genová terapie Why Are Cell and Gene Therapies Challenging? Monoclonal anmbodies Ex vivo gene therapy (e.g. CAR-T) • Starting materials well categorized • Starting material has high variability • Single or limited number of GMP-compliant sources for API • Multiple sources of starting material (apheresis centres) • Single lot = 1000s of patients; make-to-stock is possible • Single lot = 1 patient; therapy manufactured in real time • Product is not personalised • Needle-to-needle traceability required – patient must receive therapy manufactured from his/her own cells • Long and large clinical trials – long term safety/efficacy data; time to build global experience and plan commercial supply chains • Short and small clinical trials – limited data means long term safety studies may be required; less time to plan and develop commercial supply chain • Simpler reimbursement models based on massive amount of commercialization experience • High cost, potentially curative therapies (Kymriah $475k; Yescarta $375k). Reimbursement models potentially more complex and based on outcomes • Shorter term follow-up if treatment is successful • Long term follow-up, even if treatment is successful or curative • Can be scaled up without scaling out • Scale-up only achieved by scaling out, increasing supply chain complexity Shahryari A et al., Front Genet, 2019 Přehled schválených přípravků genové terapie Gencidine - první schválená genová terapie na světe (v Číně) – Ad vektor Glybera - Genová terapie deficitu lipoproteinové lipázy (AAV) první schválenou genovou terapií v Evropě v roce 2012 byl alipogene lparvovec • uveden na trh pod názvem Glybera • AAV serotyp 1 (tropismus ke svalové buňce) nesoucí kopii lidské lipoprotein lipasy • deficience lipoprotein lipasy se vyskytuje u 1 člověka z 1-2 miliónů • cena pro jednoho pacienta byla původně 1.6 miliónů dolarů • v r. 2015 snížena na 1 milión dolarů • lék byl použit jedinkrát v Německu v září 2015 • společnost uniQure oznámila, že nebude prodlužovat licenci v Evropě až vyprší na podzim 2017 h‹ps://www.technologyreview.com/s/601165/the-worldsmost-expensive-medicine-is-a-bust/amp/ Strimvelis • lék na ADA-SCID – výskyt v Evropě zhruba 15 případů ročně, 12 v USA • ex vivo genová terapie hematopoelckých kmenových buněk (HSC pomocí retrovirového vektoru s lidskou ADA • cena byla stanovena na 594 000 € (dvojnásobek roční ceny enzymoterapie) • schválen EK v květnu 2016 V současnosm jsou tři přípravky genové terapie schváleny FDA August 2017 May 2018October 2017 FDA approves first gene therapy (CAR-T therapy), Kymriah© (tisagenlecleucel), for treatment of children and young adults with relapsed or refractory B-cell acute lymphoblastic leukemia and for adults with relapsed or refractory diffuse large B-Cell FDA approves another CAR-T therapy, Yescarta© (axicabtagene ciloleucel), to treat relapsed or refractory large B-cell lymphoma administered with a one lme IV infusion. FDA approves Luxturna© (vorelgene neparvovec-rzyl) to treat RPE65 mutalon-associated relnal dystrophy, an inherited form of vision loss that may result in blindness administered by Subrelnal injeclon (one lme per eye). * Kymriah’s cost is indicalon-specific. Note, price listed includes only the acquisilon cost of the medicalon. Before receiving medicalon, palent must receive 3 days of condiloning chemotherapy. Product must be infused in the hospital seŽng and palent typically remains inpalent for a minimum of 7 days, all of which will increase total cost of care. FDA approves Kymriah © for second indicalon, treatment of relapsed or refractory large Bcell lymphoma or leukemia administered with a one lme IV infusion. December 2017 Cost estimate for treatment is $373,000 - $475,000* Cost estimate for treatment is $373,000* Cost estimate is $475,000 per eye Cost eslmate is $373,000 - $475,000 37% 29% 26% 2%5%1% > 1,770 Global Gene Therapy Trials Suppormng >700 Gene Therapy Candidates Phase I Phase I/II Phase II Phase II/III Phase III Phase IV Přípravky genové terapie schválené nebo s očekávaným schválením FDA v roce 2019 May 2019 - approved Late 2019Mid/late 2019 Zolgensma (AVXS-101) Spinal muscular atrophy (SMA) Type 1 One-time IV infusion US prevalence 500 people Expected cost $1-4 million Toca-511 Recurrent high grade glioblastoma One-time administration followed by ER 5- fluorocystine. US prevalence 8,000 people Cost TBD Lisocabtagene Large B-cell lymphoma One-time IV infusion US prevalence 1-3 per 10,000 Cost TBD Valoctocogene roxaparvovec Hemophilia A One-lme IV infusion. US prevalence 1 per 12,000 people Cost TBD LenmGlobin Transfusion dependent beta- thalassemia One-lme IV infusion US prevalence 1,000 people Cost TBD Source: Informa Pharma Intelligence, May 2018 The number of gene-therapy developers has ballooned from 69 (2014) to 255 in 2018 - Alliance for RegeneraOve Medicine (ARM) 1990 PRVNÍ GT ADA-SCID Genová terapie dnes VÁNOCE!!!!!!! HEZKÉ SVÁTKY!!! Náplň příšy přednáškyTake home Strana 47 © Ondřej Slabý, 2009 Úvod do molekulární medicíny 8/12 Fáze klinického hodnocení léčiv Randomizace, zaslepení, interim analýza, metanalýzy Monoklonální protilátky - typy Příprava monoklonálních protilátek Biologické účinky monoklonálních protilátek Cílená léčba protinádorových onemocnění: obecná strategie Cílená léčba protinádorových onemocnění: inhibice RTK Cílená léčba protinádorových onemocnění: inhibice angiogenze Cílená léčba protinádorových onemocnění: léčba kostních metastáz Individualizace léčby: příklad anti-EGFR terapie Moderní transportní systémy Moderní transportní systémy-lipozomy Moderní transportní systémy-nanočástice Genová terapie – definice, obecné strategie Ex vivo a in vivo genová terapie Metody doručení genu do tká ně Příklady genová terapie u monogenních dědičných chorod ADA, X-SCID Principy genové terapie nádorových onemocnění Preimplantační genetická diagnostika Strana 37 © Ondřej Slabý, 2009 Dotazy? Úvod do molekulární medicíny 8/12