Nasadit buňky MDA-MB-231 400 000/3ml Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - Spočítat buňky Spočítat buňky Spočítat buňky Ne Po Čt St Út CDDP 100 µM CDDP 100 µM CDDP 100 µM 0 µM CDDP 100 µM CDDP Úloha 1.1. Nasadit buňky MDA-MB-231 400 000/3ml Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - Spočítat buňky Ne Po Čt St Út 0 10 1 5 100 50 MDA-MB-231, µM CDDP Úloha 1.2. Nasadit buňky MDA-MB-231 400 000/3ml na sklíčka Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - DOX 0,4 µg/ml Po Čt St Út MDA-MB-231 U2OS 0 0 CDDP 100 µM DOX 0,4 µg/ml DOX 0,4 µg/ml CDDP 100 µM Fixace + Prim. Ab. Sec. Ab. + Mounting Úloha 2. 0 CDDP + DOX CDDP 100 µM DOX 0,4 µg/ml MDA-MB-231 Nasadit buňky MDA-MB-231 400 000/3ml Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - DOX 0,4 µg/ml Sklidit buňky + koncentrace Pá So Út Po Ne St Western blot + Prim. Ab Sec. Ab + Vyvolání Úloha 3. Koncentrace proteinů µg/ml 0 0,1 0,5 1 1,5 2 Absorbance 750 -I 0,073 0,085 0,139 0,21 0,236 0,479 Absorbance 750-II 0,066 0,086 0,162 0,232 0,328 0,313 MDA-MB-231 Abs I Abs II Abs III Lyzat Pufr Lyzacni Kontrola 0,319 0,32 0,3195 1,603428 37,41984 22,58016031 CDDP, 100 µM 0,289 0,28 0,2845 1,381353 43,43569 16,56430925 DOX, 0,4 µg/ml 0,292 0,306 0,299 1,473355 40,72338 19,27661697 CDDP, 100 µM + DOX 0,4 µg/ml 0,643 0,566 0,6045 3,411753 17,58627 42,41373019 Měření proteinové koncentrace α-Tubulin PARP Cleaved-PARP Cleaved-PARP Caspase 3 Cleaved-Caspase 3 Apoptóza https://www.semanticscholar.org/paper/Patterns-of-Apoptotic-Poly(ADP-ribose)-Polymerase-Paine/00dc7 eeae328b2090dac54e7dc0bed7321ac2ba3/figure/1 p21 α-Tubulin Buněčný cyklus γH2A.X α-Tubulin Poškození DNA Nasadit buňky MDA-MB-231 400 000/3ml Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - DOX 0,4 µg/ml Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - DOX 0,4 µg/ml Sytox Green FACS Ne Po St Út 0 CDDP 100 µM CDDP 100 µM DOX 0,4 µg/ml CDDP + DOX DOX 0,4 µg/ml 48 h. 24 h. Úloha 4. MDA-MB-231 Nasadit buňky MDA-MB-231 400 000/3ml Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - DOX 0,4 µg/ml Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - DOX 0,4 µg/ml Propidium jodid (PI) Ne Po St Út 0 CDDP 100 µM CDDP 100 µM DOX 0,4 µg/ml CDDP + DOX DOX 0,4 µg/ml 48 h. 24 h. Úloha 4. MDA-MB-231 0 pRGC-Luc + p53 pRGC-Luc pRGC-Luc + CDDP pRGC-Luc + DOX pRGC-Luc MDA-MB-231 Úloha 6. Nasadit buňky MDA-MB-231 400 000/3ml Transfekce pRGC-Luc Po Čt St Út Ovlivnit buňky - CDDP 100 µM - DOX 0,4 µg/ml Měření Luc aktivity