POKROČILÉ PRAKTIKUM Z BIOCHEMIE

JMÉNO

                 UČO

Miroslava Velecká

                 499670

Jan Šimoník

                 473766


Úloha A: Analýza izoenzymů askorbát peroxidázy (APX) pomocí nativní PAGE a aktivity phenylalanin
amoniak-lyasy (PAL)


·         Srovnejte změny aktivity APX po aplikaci jednotlivých látek v závislosti na čase.

Výsledek[INS: :INS] zdůvodněte:

·         Enzym askorbát peroxidáza (APX) je enzym zodpovědný za detoxifikaci peroxidu vodíku u
rostlin. Katalyzuje reakci:             2 askorbát  +  H[2]O[2]  ®   2 monodehydroaskorbát  +  2
H[2]O. U vzorků infikovaných cryptogeinem  můžeme pozorovat pokles aktivity APX z důvodu nekrózy. U
ostatních vzorků zůstává aktivita nezměněná, jelikož nedošlo k nasátí petiolou nebo daná látka
neměla vliv na aktivitu APX.


·         Spočítejte aktivitu PAL v čase 24h po aplikaci neznámého vzorku v pmol/s na mg
rostlinného pletiva. Výsledky vyneste do grafu, kde budou srovnány změny aktivity PAL po aplikaci
neznámého vzorku s kontrolou (voda). Výsledek zdůvodněte:



D-Phe – kontrola, L-Phe – vznik kyseliny skořicové (nárůst A)

                                               D-Phe

                                               L-Phe

                                                                                              0,866

                                                                                              0,926

                                                                                              0,876

                                                                                              0,956

[INS:   :INS]

[INS: Rozdíl v Absorbanci L :INS] [INS: -D :INS]

1.       [INS: 0,06 :INS]

2.       [INS: 0,08 :INS]

[INS: Průměr: 0,07 :INS] [INS: :INS]

[INS: c = 0,07/(9530*1) :INS]

[INS: c = 7.35 uM :INS] [INS: :INS]

[INS: Někde chyba ve výpočtu, nutno přepočíst a uvést na mg rostlinného materiálu? :INS]

Vypočítat aktivitu v kat

c[produkt] = A.V/(ε.l)                                                  Vreakční směs = = 800 μl l

c[produkt] = 0,03./(9530.1)

c[produkt] = 3,15 x 10^-6 μmol/μl

x[směs ]=3,15 x 10^-6x 800 = 2,52 x 10^-3

a[PAL]= 2,52 x 10^-3/30 min = 8,39 x 10^-5 μmol/min = 1,4 x 10^-3 nkat[JL1]

Aktivita PAL byla po 24 h u našeho vzorku 1,4 x 10^-3 nkat. Náš vzorek byla voda. Nemůžeme porovnat
s jinými vzorky, jelikož nevíme, jestli i další skupiny neměly jako neznámý vzorek vodu. Hodnota
molárního absorpčního koeficientu jsem převzal z:
https://mdpires.com/d_attachment/molecules/molecules-24-04146/article_deploy/molecules-24-04146-s00
1.pdf?version=1573829445
________________________________

 [JL1]katal je mol/s! přepočet nesedí + viz. chyba výše!