Patogenní kvasinky Kvasinkové patogeny Candida Cryptococcus Malassezia Trichosporoi Rhodotorula • Hansenula Torulopsis Geotrichum Saccha USlffb yces > 70-90 % onemocnění kvasinkami jsou kandidózy > počet druhů působících jako etiologické agens a účastnících se patologických procesů u člověka, se zvyšuje > Většina kvasinkových druhů je nepatogenní, patogenními se stávají v podmínkách ooruch imunitní odpovědi Přehled onemocnění způsobených patogenními houbami Aspergillosis (Aspergillus s Blastomycosis (Blastomyces s Candidiasis (Invasive) (Candida s Coccidioidomycosis Cryptococcosis (Cryptococcus s Histoplasmosis (Histoplasma caps1 Mucormycosis (Mucor1 Paracoccidioidomycosis Sporotrichosis fSoorothrix schenckii > My kozy: • primární • oportunní (u imunokompromitovaných pacientů - AIDS, leukémie, diabetes, popáleniny, terapie kortiko-steroidy, imunosupresivy) • Systémové - plíce, játra, srdce, mozek, slezina • Lokální - kůže, ústní dutina, vagina aj > forma a závažnost infekce závisí na: -infekčním agens (druh, množství) - způsobu a bráně infekce - stavu imunitního systému hostitele > endogenní infekce (autoinfekce) zdrojem jsou komenzálové člověka - při porušení homeostázy, vnímavosti a rezistence > povrchové my kozy - nakažlivé Některé my kozy mají charakteristickou geografickou distribuci: Coccidioidomycosis: jihozápad USA a severní Mexiko Histoplasmosis: jižní oblasti USA Blastomycosis: USA a Afrika Paracoccidioidomycosis: Jižní Amerika Sporotrichosis: Střední Amerika, Mexiko Diagnostika: > kombinace klinického pozorování laboratorního vyšetření > Laboratorní vyšetření • mikroskopický průkaz • kultivační průkaz • sérologické metod Mikroskopický průkaz povrchové mykózy - šupinky kuže, části nehtů, seškrab kštice s vlasovými kořínky a kožními šupinami kandidóza - stery sliznic systémové infekce - vzorky tkán přímá mikroskopie: - ve vlhkých preparátech po natrávení tkáně 10-20% hydroxidem draselným - infekce sliznic - Gramovo barvení - morfologie buněk kultivace většina kvasinek snadno kultivovatelná Sabouraudův aaar (glukóza, sladinový agar, hydrolyzát kaseini + chloramfenikol nebo amikacin vankomycin) Czapek - Doksův agar - současně oři 25 - 30°C a 37°C - doba kultivace 1 - 5 dnů kvašení cukrů a další biochemické testy (identifikační soupravy) auxanogram - test na asimilaci cukrů a dusíkatých látek (zdroi C zymogra cukrů st na zkvašování sérologie Průkaz specifických protilátek (protilátková odpověď slabá) - ELISA Antimykotika: kvasinky - eukaryontní buňky - běžná antibakteriální antibiotika isou neúčinná Terčové struktury antimykotik: buněčná stěna plasmati membrána An antifungal agent is a drug that selectively eliminates fungal pathogens from a host with minimal toxicity to the host. Polyene Antifungal Drugs Amphotericin, nystatin, and pimaricin interact with sterols in the cell membrane (ergosterol in fungi, cholesterol in humans) to form channels through which small molecules leak from the inside of the fungal cell to the outside. Azole Antifungal Drugs Fluconazole, itraconazole, and ketoconazole inhibit cytochrome P450-dependent enzymes (particularly C14-demethylase) involved in the biosynthesis of ergosterol, which is required for fungal cell membrane structure and function. Allylamine and Morpholine Antifungal Drugs Allylamines (naftifine, terbinafine) inhibit ergosterol biosynthesis at the level of squalene epoxidase. The morpholine drug, amorolfine, inhibits the same pathway at a later step. Antimetabolite Antifungal Drugs 5-Fluorocytosine acts as an inhibitor of both DNA and RNA synthesis via the intracytoplasmic conversion of 5-fluorocytosine to 5-fluorouracil. kladv antimvkotik peroral ně: ketokonazol, terbinafin parenteral ně: amfotericin B, mikonazol... (malá vstřebatelnost z trávicího ústrojí) parenteral ně i peroral ně: flukonazol, i azol, flucyt ozi r azolové deriváty a) 2-nitroimidazoly : klotrimazol mikonazol ketokonazol b) triazoly : itrakonazol (kandidózy, kryptokokózy) flukonazol (perorálně - kryptokoková meningitida) - existuje primární i získaná rezistence k azolovým sloučeninám kyselina b va (Whitfieldova mast) - povrchové mykózy polyeny - toxické, ukládají se v nově tvořeném ke rati n u nystatin (kandidózy) amfotericin B (kandidózy, kryptokokózy) griseofulvin - proti d imidazoly kyselina nalidixová fluoropyrimidiny kandicidin proti dermatofytům další látky toxické vůči kvasinkám: jodid draselný, kyselina boritá, bazická barviv kombinace antimykotik: Pov o ve my y Povrchová kandidóza: - postižení kuže, nehtu, sliznic úst a pochvy (infekce sliznic - „moučnivka") - 80 - 90% Candida albicans, zbývající případy další druhy (C. tropicalis, C. kru sei, C. parapsilosis, C. glabrata...) - 20% lidské populace - C. albicans součást komensální flóry pokožky a sliznic - výskyt závisí na stavu organismu - bakteriální či virová infekce, těhotenství, aj 25°C Yeast Levures 37°C Hypha Hyphe 1 1 37°C A Pseudohyphae Pseudohyphes Identifikace: - Sabouraudův glukózový agar - kvasinková fáze (oválné buňky, 3-8 um), kolonie za 1-2 dny při 25°C - in vivo - směs kvasinkových buněk, pseudomycelia a pravého mycelia - po obarvení dle Grama: grampozitivní oválné ci buňky pUCJ Candida albicans - tvorba charakteristických klíčků (po 90-120 minutách inkubace v séru při 37°C) - další identifikace: soupravy, testy fermentace a utilizace cukrů a zdrojů dusíku Léčení: - lokální terapie nystatinem, mikonazolem vaginální kandidóza -azolove posevní cípky příp amfotericinem B, em b, :olové deriváty, recidivuiících infekce sliznic: - nejčastější povrchové kandidózy - na sliznici ohraničené bílé skvrny, mohou splývat a pseudomembrány (tvarohový vzhled) infekce dutiny ústní: - bukální sliznice, tvrdé p bílých skvrn zarudlé okolí e i osoby, os (AIDS) infekce kůže a nehtů: eci ažní iamce, pod prsy (v místech vlhké zapářky) - postižení nehtu a nehtového lůžka - při častém máčení rukou (ošetřovatelky, myčky nádobí) Mykotické plaky na zubech Původce: většinou Candida albicans, souvislost se stravovacími návvk - chronická infekce způsobená lipofilní Malassezia furfur - odbarvené skvrny na kůži M. furfur - běžný komenzál na kůži, většina infekcí je endogenní - vyžaduje k růstu lipidy; monopolárně pučící (jediný rod) - oválné lahvovité buňky, velikost 2-3 x 4-6 pm, při pityriasis versicolor kvas in kovité buňky s krátkými hyfami - kultivace - speciální půdy s Tweenem nebo lipidy (37°C) - podílí se na tvorbě lupů a s Systémové my y 338 : J vytvářející hladké lesklé kolonie, kolem buněk silné pou - onemocnění CNS a pl - sporadicky po celém světě, nejčastější pacientů s AIDS (u 10%) Drostř dusí ■ Ikalické substráty bohaté na Průkaz: mikroskopicky: v mozkomíšním moku a dalším klinickém materiálu - kulovité buňky 2-10 um s mukopolysacharidovým pouzdrem (až 60 % izolátů) - po smíšení mozkomíšního moku s tuší se pouzdro jeví jako jasný dvorec kolem buněk kultivace: - na Sabouradově agaru při 25-30°C a 37°C za 2-3 dny - smetanově bílé až žlutohnědé mukózní nie (neopouzdřené kmeny - suché) - netvoří pseudomycelium ani mycelium - nefermentuje cukry, silná produkce ureázy, asimilace inozitolu yces capitatus (dříve Trichosporon capitatum) -diseminované infekce - oslabení neutropeničtí pacienti se zhoubnými lymfomy - sisirniJéics Geotríchum candidum - infekce u diabetiků osob Saccharomyces $ cerevisiae - sepse a plieni infekce původce vaginálních mykóz (8,5 %) | Ř Rhodotorula - barevné kolonie (oranžové, červené) - neasimiluje inositol Dimorfní houby vláknitá fáz - většinou saprofytická (průnik přes kůži a sliznice) kvasinková fáze - infekční (hluboké infekce tkání a orgánů) - kvasinkový rust podporují bohatější pudy (krevní agar) a teplota 35-37°C - tvorba hyf - teplota 25-30°C Blastomykóza, kokcidiomykža, sporotrichóza etc. Sporothrix schenckii buňky ve fázovém kontrastu - hyfy a konídie Sporothrix schenckii e buněk freeze-fracture technikou Candida albicans Budding yeast Pseudohypha Parent yeast cell A f Germ tube Hypha Candida albicans ^31 Genová kontrola morfogeneze u C. albicans i i i O BBicj2lf",,,°1 Nature Reviews | Genetics Role Ca++ v morfogenezi Candida albicans Localized Ca2+-channel activation caused by localized changes in membrane potential or membrane stretch, results in calcium influx that directs polarized growth Ia Galvanotropism Midi -Cch1 p complex No electric field. Site of germ tube emergence is random. © © Electric field depolarizes membrane at cathodal face, activating Cchlp. Localized Ca2+ influx via Cchlp establishes axis of cell polarity. Germ tube emergence is cathodal. b Thigmotropism Membrane stretch Contact with a ridge |causes membrane stretch, detected by Midi p. Calcium entry via activated Midi p. Localized Ca2+ influx redirects cell polarity machinery to new growth axis.