api
užití
ktroforéz
při studiu enzymů
Zdeněk Glatz
c Reuss
8
S*
■Ši
Elektrofore
(1909)
eonor Michaelis
Michaelis Menten Plot
w. Vmax ; [S] Km + [S]
Vmax
asymtote
^m Substrate concentration [S]
á elektrofo
selius(1902 -1971)
li
á elektrofo
Zónová elektroforéza
abilizace
♦Kapi
939
957 A 959 Pol
979 A
Kapilární elektroforéza
967 - Hjerten mm kapilára
Kapilární elektroforé
1981 - Jorgenson Lukacsová
m kapilára
A.B
U
-jJl
10 15 Tim« (minutes)
ram of dansyl amino acids
20
Beckman 1987
ki JJdskáb
o genomu
□ -DGEM-F
Hl H
20
CCľGGGG HľCCTC ľ flC ňGT CGHCCTGCfiGGC ňľ CCfl RGCľTCň GT RT ill 6D 10 60 90
C T R Tfl C 100
at
?
f.
oqrni m
m
sta n ta
0,23 s1
103s
- katalasa
7 . 107s
Katalasa
2 H20
Čís
1 molekula enzymu přemění 40 000 000 molekul substrátu za 1 s
stanovení koncentrac
3 000 bílkovin
Koncentrace
atalytická aktivita
Substrát
dukt
Stanovení aktivitv enz
j
yrr
Klinická di
Farmakologie - vývoj leci Biotechnologické procesy
m Bioanalytická chemie
v
5
stanovení aktivity enzymu
♦ Spektrofotometrické
♦ Spektrofluorimetrické
♦ Elektrochemick
♦ Radiochemické
♦ Separační - HPLC, GC, CE
nzyme Assays
R.Eisenthal and M.J. Danson
APPROACH
in Enzymatic Analysis
Rossomando
H P
LC
EDWARD F. ROSSOMANDO
\ I I I I
odvCE
■M
♦ Aplikační diverzita
nabité i neutrální lá nízkomolekulární i vysokomolekulárni látky chirální i achirální ľ" bakterie i viry
Výhody C
♦ Aplikacn ♦Jednoduch
CEC
v>
\ I I I I
hody CE
♦ Aplikační diverzita
♦ Jednoduchá instrumentace
♦ Vysoké rozlišení a účinnost separací
♦ Malá spotřeba vzorku
♦ Rychlost analýzy
♦ Malá spotřeba chemikálií a malé množství odpadů
hody CE
Sri
dium enzymovych reakci
bi CE Hi
capillary
I
Precapillary
Postcapillary
Studium enzymových reakcí
pomocí CE
re-capillary" provedeni :
\ \
apnara je používaná pouze pro separaci a dete'
- nutná manipu
zi enzymovou reakcí a
Kinetické stanoven
glutathion S-transferass
MU
175 H
-r: -
'2Í -j
100
75 : 21-
:
/_V-CH-^Hi   . GSH
GSH
rs
&5rrin
5í n "
22 Tl '
: Ti-
I. conjugate
—CH-CH—3H
S-CHí-CHC0NHCH2C00H I
NHCO CH; C Hi CHĺ N H;} CO O H
OH
Y-CH-CHj
Í-CHi-CHCONHCHiCOOH I
NHCOCH2CH2CH(NHi}COOH II. conjugate
Conjugate II Conjugate I
:
-r
mir
Šišková, Z. et al. J. Sep. Sci., 2005, 28, 1357.
cytochrom P450 2C9
mAU
16-
14-12-•:>-
8-
4     ,,, 5'
1 ls^>%,4' cyp2c9
HO-C II
0
N 1 I
h c
2'
ho-c 0
90 minutes
120 minutes
!<~*J........, ^ L
60 minutes
30 minuses
Diclofenac
on
ci
. J,		
		IU.—-
UJ
—kJ
4'-hydroxydiclofenac
/
1^
I
I
Konecny, J. et al. Electrophoresis, 2007. 28, 1229.
tudium enzymových reakcí
omoci
-capiMary" provedení :
kapilára je navíc využita i jako reakční
- stanovení je a
smísení, inkubace,
zováno - dávkování,
ce, detekce => CE
roforeticky zprostředkovaná
ikroanalýza
ctrophoretically Mediated MicroAnalysis
M
tC /\/\
J. Bao, RE. Regnier, J. Chromatogr. 608, 217 (1992).
rozdílná elektroforetická mobilita enzymu a jeho substrátu(ů)
pro vyvolaní reakce pnmo v kapiláře
1 \
ft 4
/ I   r- l—1 Binir«i
_f _| J_>   ~! una
GWYNETH!
TWO
Thumbs
Up!"
EMMA
miun mm
.:I!-Ti -<IiH I N'.il* Mlliiilll
CesCu vol kaHuelur
EMMA
zona
Vvhod
> Menši spotřeb; substrátv. inhib
> Vyhodnocovaní
A - vvhodnoce
Glu-6P + NAD
6P-Glu + NADH
inuální mód
Zonální mód
Suhjslríilc
B J. Harmon et al.,J. Chromatogr. A 726,193 (1996).        E.S .Kwak et al., Anal. Chim. Acta 397,183 (1999).
zonální mód
vypnutí el. napětí: "zero potential amplification
tudium enzymových reakcí
omoci
Post-capillary" provedení :
vzorek je nejprve separován pomocí CE, na konci kapiláry je reaktor, kde probíhá enzymová reakce
- uvedenou variantu nelze u komerčních CE zařízení
použít
A. Emmer, J. Roeraade, Chromatographia 39 (1994) 271.
W porne
oci
n-ca
í C
On-line - on-capillary
Inkubace + analyza
rhodanasa - pre-capillary stanovení aktivity
Volba seoa
ích podmínek
SO2"
CN"  + S032-
0.1 mM TTAB -15 mM borát pH 9.0
v 1        v      ■ — v ■ m M • I III* V~-« I
Glatz, Z. et al J. Chromatogr A, 1999, 838, 139.
rhodanasa - pre-capillary stanovení aktivity
Iba seoarační
odmínek
so2-
CIST  + SO32-
M ß-alanin - HCl, pH 3.5
rhodanasa - pre-capillary stanovení aktivity
Analýza standardů
Kapilára:   křemenná, vnitřní průměr 75 um, celková délka 64.5 cm, efektivní délka 56 cm Dávkování: 50 mbar/6s Separační napětí:   18 kV (negativní polarita) Teplota kapiláry:   25 + 0,1 °C Detekce:   X = 200 nm (šířka pásu 20 nm) Vzorek : 1 mM S2032", 1 mM SCISľ, 25 mM Cl\ľ v 25 mM HEPES pufru (pH 8.5)
rhodanasa - pre-capillary stanovení aktivity
S
oven í aktivity
45
40
10 15 20
TIME [min]
30
rhodanasa - pre-capillary stanovení aktivity
Dávkování
Short-end
Capillary i thefTTíOStatting
Diode-array detector
Capillary cartridge
Vial carousel {thermostatted) Butter replenishment
rhodanasa - pre-capillary stanoveni aktivity
CALIBRATION CURVES
140: 120:
40: 20:
0:
"LONG END INJECTION"
s2o32
' B - "lon& end" injection
SCNlmMl_
SCN-
s2o32
140: 120:
40: 20:
0:
"SHORTEND INJECTION"
SCN-
rhodanasa - pre-capillary stanovení aktivity hort end" versus „Long end injection"
Short-end injection Long-end injection
oba analýzy
Přesnost migračních časů (n=10)
Přesnost plochy píků (n=10)
Linearita
Korelační koeficient
50 - 5000 \jM
0.9993
mm
0.04 %
0.82 %
50 - 5000 nM
0.9998
Limit detekce
2.5 jiM
5 jiM
rhodanasa - pre-capillary stanovení aktivity
Stanovení aktivity
mAU-
200
150
100
50
15 min
12 min
9 min
6 min
3 min 0 min
s2o32
SCN
0.2 0.4 0.6 0.8
1.2
rhodanasa - EMMA stanovení kinet. parametrů
Volba separačních parametrů
tejný pufr použit jak pro enzymovou reakci, tak pro separaci produktů
um rhodanasy: 8.5
BGE pH 8.5 - (nepokryta kapilár
pokrytá kapilára)
Nováková, S. et al. Electrophoresis,, 2002, 23, 1063.
rhodanasa - EMMA stanovení kinet. parametrů
Volba separačních parametru
Separace anorganických aniontö (S2032~, SCN) robíhá nejlépe při nízkém pH základního elektrolytu
eliminace EOF
Kombinace metody EMMA s
rhodanasa - EMMA stanovení kinet. parametrů
Dávkovací a separační parametry
Parametr
Přesnost migračních časů (n = 10)
Přesnost ploch píku (n = 10)
25 mM HEPES	Substráty v 25 m M	Rhodanasa v 25 mM	25 mM HEPES
(pH 8,5)	HEPES (pH 8,5)	HEPES (pH 8,5)	(pH 8,5) |
nástřik vzorku
Separační napětí
18 kV (negativní polarita)
Detekce 200 n m
rhodanasa - EMMA stanovení kinet. parametrů
Sta
n
chaelisových konstant Km
mAU
:;o
200
i;o
100
50
0-*
15 mM ^Q;
JLO inM_S1Oř
5mM S,0,
2 mM SO;
tlmM S,0,:
0.5 mM S,On
mm
rhodanasa - EMMA stanovení kinet. parametrů
Stanovení Michaelisových konstant Km
3
"a
si o
o
a -1
-0,2S0,002 t) 0,25 -0,004 -
--0,006 -
1/ [Na2S203] (1/mmol)
♦ 1 mM KCN *2 mM KCN   5 mM KCN ♦ 10 mM KCN
1,25
CD
U,6 0,7 -0,6 -0,5 -0,4 -1/km(cn") °'3 v             0,2 -	y = 0,5839x + 0,0768 i/km(s2o£)^
i_____ 0 ,6 -0,4^^0,2   _0)1 i	i                 i                 i                i i )          0,2         0,4         0,6        0,8          1 1
KM (CN-)
= 7.60 mM K
O,2)
1/ [KCN] (1/mmol)
= 13.02 mM
rhodanasa - EMMA stanovení kinet. parametrů
Inhibice rhodanasy 2-oxoglutarátem
(inhibitor přidán do zóny substrátů)
Nováková, S. et al J. Chromatogr. A, 2003, 990, 189.
rhodanasa - EMMA stanovení kinet. parametrů
I
i
	2-OG   Kz (mM)	inhibice
S2032	1.40	akompetitivní
CIST	3.62 x 10"1	kompetitivní
andehalogenasa řEC
ROH   + X"
■
enovaných derivátů uhlovodíků
n o
Enantioselektivní organické syntézy
haloalkandehalogenasa - pre-capillary stanovení
Volba
r +   H20   ->   ROH  +  Br + H+
100 mM P-alanin - HC1, pH 3.5
UV 200 nm Separační napětí 18 kV (hegativní polarita)
Glatz, Z., et al. J. Chromatogr. A, 2000, 895, 219.
haloalkandehalogenasa - pre-capillary stanovení
haloalkandehalogenasa - pre-capillary stanovení
Nepřímá detekce
UV light source
O   &  —  g=j O O ^
o © ^ © e © e e ^r-i
s=p 7-, o © ^^řfe
3ř
5 mM chroman 0.5 mM TTAB pH 8.5
Nepřímá detekce - 315 nm / 375 nm Separační napětí 15 kV (negativní polarita)
haloalkandehalogenasa - pre-capillary stanovení
Stanovení aktivity
' strát 1-brombutan
Přímá detekce
Nepřímá detekce
haloalkandehalogenasa - EMMA Dávkovací a separační
7é*\ď\?kf\wy{ o\^\ď\-wď\\\Ě\
vKovaci a separacni parame
Základní elektrolyt
0 mM (3-alanin - HCI, pH 3.5 - přímá detekce
separační napětí 29,9 kV (negativní polarita)
nebo
10 mM chroman 0.1 mM CTAB pH 9.2 - nepřímá detekce
separační napětí 18 kV (negativní polarita)
Dávkování
Dávkovaní
20 mM glycinátový pufr (pH 8.6) : 50 mbar/4s
Enzym ve 20 mM glycinátovém pufru (pH 8.6) : 50 mbar/4s
Substrát ve 20 mM glycinátovém pufru pufru (pH 8.6) : 50 mbar/4s
20 mM glycinátový pufr (pH 8.6) : 50 mbar/4s
Telnarová, M. et al. Electrophoresis, 2004, 25, 290.
haloalkandehalogenasa - EMMA
ichaelisovy konstanty Km
bstrát 1-brombutan
Přímá detekce
Nepřímá detekce
haloalkandehalogenasa - EMMA
Stanovení Michaelisovy konstanty Km
substrát 1-brombutan
Přímá detekce
Nepřímá detekce
haloalkandehalogenasa - EMMA
Stanovení inhibiční konstanty Ki
substrát 1-brombutan; inhibitor 1,2-dichloethan
Přímá detekce
Nepřímá detekce
Telnarová, M. et al. Electrophoresis, 2004, 25, 1028.
haloalkandehalogenasa - EMMA
Stanovení inhibiční konstanty Ki
substrát 1-brombutan; inhibitor 1,2-dichloethan
Michaelís-Menten
AKt = 0,63 mM
0,0    0,2    0,4    0,6    0,8    1,0    1,2    1,4    1,6    1,8    2,0 1.2 |l-bromobutane| (mM)
Lineweaver-Burkc
0 2 4
1/(1-brom o butane] (mM)
Přímá detekce
Michaelis-Menlen
= 0,44 m
• P = 0mM
o 1=1 mM
v l=5mM
* í = 20 mM
0,0    0,2    0,4    0,6    0,8    1,0    1,2    1,4    1,6    1,8    2,0 2,2 [1-bromobutaneJ (mM)
Uiieweaver-Burke
-1.0
0,0 0,5 1,0 1,5
l/(l-bromo butane) (mM)
Nepřímá detekce
„Pre-capillary" enzymové stanovení
stanovení aktivity
♦ Vysoká ucin
♦ Vysoké rozli
Rychlost analýzy
„On-capillary" enzymové stanovení
studium kinetiky
♦ Vysoká ucin
♦ Vysoké rozli
Rychlost analýzy
Ai iťnm3H7^rp
♦ Automatizace
♦ Malá množství vzorku
Studium kinetiky dvousubstrátové enzymové reakce
(60 experimentů)
* spotřeba vzorku enzymu — 20 |jl !! * doba studie - 3 hodiny SE !! (10 hodin LE)
současnéjaKo
m
etoda
>cytosolická
- biotransformace/detoxikace xenobiotik (II fáze)
>membránově vázaná
- sulfatace glykoprotein
sulfotransferasa - EMMA stanovení aktivity a kinetických parametrů
Reako
PAPS
Velmi nestabilní 80 % (20 % PAP)
NHn
HO
v
o^\
o-
sult1a1
O—CH2 N-
LAJ
274 nm
o-
0= s=o ô
+
4-Nitrophenol
HO
\    .O OH
K
-o' %
PAP
NO,
4-Nitrophenyl suita tel
Velmi silný inhibitor reakce Kx = 0-4 jLiM
Vytisková, S. et al. J. Chromatogr. A, 2004, 1032, 319.
aktivity a
Separační odmínky:
BGE: 150 mM HEPES, pH 6.5 +
20 mM kyselina cholová Kapilára: LT=31.2 cm (LE = 21cm),
75jim I.D. Napětí: + 10 kV Teplota kapiláry: 37 °C Detekce: 260 nm Dávkování: 0.3 psi/ 5 s lmM PAP nebo 115 mM PAPS
N"
Standa
<rd
Migrační čas (s)
PAP PAPS
MEKC (cholát)
EOF
PAP
Mobilita (cm^s-1)
-3.90 x 10"4 -4.03 x 10"4
Rychlost (cm s'1)
PAPS
0.0        0j5 1.0 1.5        2.0        2.5        3.0        3j5 4D        4.5        5.0        5.5        6D        6.5        70 75 3D
Minutes
sulfotransferasa - EMMA stanovení aktivity a kinetických parametrů
H i
ace
Krok
Tlak Pj Cas Napětí (psi)      (s) (kV)
11. Dávkování PAPS	PAPS	0.5	5	/
1 2. Předseparace od PAPS	/	/	60	15
3. Dávkování S	4-NP	0.3	5	/
14. Dávkování E	SULT1A1	0.3	5	/
5. Smísení a enzymová reakce	/	/	60	5
16.Inkubace	/	/	120	0
7. Separace	/	/	300	10 1
stanovení kyanidu metodou EMMA
po enzymatické konverzi na thiokyanatan
Papežova, K. et al. J. Chromatogr. A, 2006, 1120, 268.
stanovení kyanidu metodou EMMA
po enzymatické konverzi na thiokyanatan
Dávkování a i n ku bace
1. Dávkování HEPES pufru
2. Dávkování rhod
3. Dávkování vzorku
4. Dávkování HEPES pufru
B^Bl     B^H     B^Bl     B^Bl     B^Bl     B^Bl     B^Bl     B^Bl     B^Bl     B^Bl     B^BI     B^Bl     B^Bl B^Bl
5. Smíchání vzorku a rhodanasy
6. Inkubace
7. "Separace '
	3	
		
bW \ -	21	1
stanovení kyanidu metodou EMMA
po enzymatické konverzi na thiokyanatan
ID, 2D HPLC, CBPrfflBE-CE, CE-HPLC
■ bip :u ix ■■ j i li i.-        li' if
Ih NIL- Ik IX H 4I.U.L7 Uŕľ.SĽ.ir.
i|ii:iiii^ii nu ■■
.111 Ji LI nJI.U kl^l
6   6   4    &   2    1    D *..Va.I»
Q K
5 R
n f za
I* 3 *J g
TS.11 J *■
K 5
iDt 3ô 55i 35 5
■■'i
Zeisbergerová, M. et al. Electrophoresis, 2009, 30, 2378.
integrace „on-line" tryptického štěpení do CE Dávkovací a separační parametr
7
Sandwich mode:
(1 ) Injection of en7yme
(2) Injection of substrate
(3) Injection of enzvme
25 mM Tris-HCI ,	Trypsin ve 25 mM	Protein ve 25 mM	Trypsin ve 25 m M i	25 mM Tris-HCI H
j       (pH 8,5) ,	Tris HCI (pH 8,5)	Tris HCI (pH 8,5)	Tris HCI (pH 8,5) ,	(pH 8,5) Q
nástřik vzorku
_____________________j
Základní elektrolyt
0,1 M fosfátový pufr pH 2,5
nebo
0,1 M mravenčanový pufr pH 2,5
Separační napětí
18 kV (negativní polarita)
integrace „on-line" tryptického štěpení do CE
Optimalizace (3-kasein, cytochrom c
Teplota kapiláry
Zero potential amplification
i
Os
integrace „on-line" tryptického štěpení do CE
mAl:
14
10 A
6
2
off-line štěpení -analýzy
i hřri ■■' r li'n
12 hodin + 1 hodina
10
~~r~ 20
—i—t—i—i—i—r—i—<—i—f—
30_ 40 mfn
MA - využití
> Enzymové systémy
Aktivita enzymů
Koncentrace substrátů a inhibitorů ichaelisovy a inhibiční konstanty
i
> Neenzvmové svstémv
• GSH, HCys, Cys, DTT •Ca(ll)
• Gentamycin a kanamycm
• Kreatin Cr(VI) a Co(ll)
metabolism
ICytochrome P450J
i
•.en ih*t
Years
Discovery
(2-10 Years)
■
2 4
PhaseI
20-90 Healthy Volunteers Used to Determine Safety and Dosage
Phase III
1.0DD-5.ÜQ0 Patient Vblunleera Used to hlflnltcir Adverse Reacllüna 1ü Lung-Term Use
Additional Post' Marketing Testing
G 8
10 12 14
1
Preclinical Testing
Laboratory and Animal Testing
Phase II
100 300 Patient Volunteers Used Id Look Cor Efficacy and Side Effects
FDA Review Approval
Approved by the FDA
50 různých CYF
podíl na metabolismu 80 % známých léčiv
i
Jaterni plátky, hepatocyty, mikrosomy rekombinantm enzymy
i
A
CYP3A4 + dextrometorfan
x
Roztok enzymu Roztok substrátu Reakční směs Produkt reakce
Detektor
E
6 s
Time [min
HLM
CYP3A4
Zeisbergerová, M. et al. Electrophoresis, 2009, 30, 2378.
WM
Míchání difúzí
TDLFP = Transverse diffusion of laminar flow
Deleklor
V. Okhonin, X. Liu, S.N. Krylov, Anal. Chem. 77 (2005) 5925
WM
Míchání difúzí
TDLFP = Transverse diffusion of laminar flow
Detektor
R. Řemínek, M. Zeisbergerová, M. Langmajerová, Z. Glatz, Electrophoresis, 34 (2013) 2705.
difúzí - CYP2C9 + diclofenac
Roztok enzymu Roztok substrátu Reakční směs Produkt reakce
Detektor
difúzí - CYP2C9 + diclofenac
R. Řemínek, M. Zeisbergerová, M. Langmajerová, Z. Glatz, Electrophoresis, 34 (2013) 2705.
difúzí - CYP2C9 + diclofenac
Kombinace TDLFP s MS
detekci
*10
4
Intent.
x-io'1
2L5 1	.ij-qa k   — ci-   - J		a DC	
2M. MS 1				OH DC ■ I           ■ ™---1". ■
134
1J04
o^4
200
£20
£40
£60
230
300
320 rrV'2
Figure 10. Mass spectrum of DC and OHDC obtained after in-capillary incubation.
Langmajerova, et al. Electrophoresis, v tisku.
Chirální seoarace
r
Ketamin
anestetikum a analgetikum v humánní a
veterinární medicíně
50 mM TRIS-fosfátový pufr (pH 2.5) obsahující 3 % (w/v) vysoce sulfatovaný Y-cyclodextrin
Km ^max
,  "a (nmol/min/n
("M) mol)
74.22 ± 15.66 ±
5.75 0.52
Kinetická studi
Michaelis-Menten
S-Ketamine
79.54 ± 8.49
62.91 ± 8.02
66.45 ± 6.62
10.13 ± 0.48
8.18 ± 0.40
7.47 ± 0.31
Řemínek, R. et al. Electrophoresis, v tisku.
I      \/ ^
♦ EMMA + homogenní reakční smě
nutné optimalizovat
♦ TDLF
V -r
rsálno
- homogenita ???
dium enzymových reakci
dium enzymových reakci
ELSEVIER
Available online at www.sciencedirect.com
%* SdenceDirect
Journal of Chromatography B, 841 (2006) 23-37
Review
JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY ß
www, cl scvicr.com /1 ocatc / chromb
Determination of enzymatic activity by capillary electrophoresis
Zdenek Glatz *
Department of Biochemistry, Faculty of Science, Masaryk University Kamenice 5, 625 00 Smo, Czech Republic
Received 10 January 2006; accepted 21 February 2006 Available online 30 March 2006
ELSEVIER
Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 53 (2010) 1076-1090
ContGnts lists available at SciencoDirect
Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis
journal horriGpagG: www.GlsGviGr.com/locatG/jpba
Review
Advances in-capillary electrophoretic enzyme assays
Yi Fan, Gerhard K.E. Scriba *
Department of Pharmaceutical Chemistry, School of Pharmacy, University ofJena, Philosophenweg 14, D-07743 Jena, Germany
Che m. Listy 107, xxx-yyy (2013)
Rjeferát
STUDIUM ENZYMOVÝCH REAKCÍ KAPILÁRNI ELEKTROFORÉZOU V ONLINE USPOŘÁDÁNÍ
ROMAN ŘEMÍNEK, MARTA ZEISBERGEROVÁ a ZDENĚK GLATZ
Ústav biochemie, Prírodovedecká fakulta a středoevropský technologický institut, Masarykova univerzita, Kotlářská 2, 611 37 Brno romikí^nail. muni. c z
Došlo 19.3.13, přijato 29.5.13.
ELSEVIER
Available online at www.sciencedirect.com
SCIENCE /YT1 DIRECT*
Journal of Chromatography A, 1032 (2004) 173-184
JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A
www.clscvicr.com/locatc/cliroma
Review
Electrophoretically mediated microanalysis
Soňa Nováková a'b, Sigrid Van Dycka, Arm Van Schepdaela, Jos Hoogmartensa, Zdeněk Glatz^'*
a Laboratory for Pharmaceutical Chemistry and Drug Analysis, Faculty of Pharmaceutical Sciences, K.U. Leuven, Van Evenstraat 4, B-3000 Leuven, Belgium b Department of Biochemistry, Faculty of Science, Masaryk University Brno, Kotlářská 2, 611 37 Brno, Czech Republic
Record 1 of4
Title: Advances in capillary electrophoretically mediated microanalysis
Authors): V anDyck, 3 (V an Dyck, S); Kaale, E (Kaale, E); Novakova, 3 (Novakova, 3); Glatz, Z (Glata, Z); H oogm artens, J (Hoogmartens, J); V an Schepdael, A (V an Schepdael, A)
Source: ELECTROPHORESIS Volume: 24 Issue: 22-23 Pages: 38(58-3878 DOI: 10.10 02/alps. 20030563 d" Published: DEC 2003
Record 2 of 4
Title: Advances in capillary electrophoretic ally mediated microanalysis: An update
Authors): Zhang, J (Zhang J); Hoogmartens, J (H oogm artens, J); V an Schepdael, A (V an Schepdael, A)
Source: ELECTROPHORESIS Volume: 27 Issue: 1 Pages: 35-43 DOI: 10.1002/elps.200500492 Published: JAN
2006
Record 3 of 4
Title: Advances in CE-mediated micro analysis: An update
Author(s): Zhang, J (Zhang Jie); H oogm artens, J (Hoogmartens, Jos); V anS chepdael, A (V an Schepdael, Ann)
Source: ELECTROPHORESIS Volume: 29 Issue: 1 Pages: 56-65 DOI: 10.1002/elps.200700475 Published: JAN
2008
Record 4 of4
Title: Recent developments and applications of EMMA in enzym atic and derivatization reactions
Authors): Zhang, J (Zhang Jie); H oogm artens, J (Hoogmartens, Jos); V anS chepdael, A (V an Schepdael, Ann)
Source: ELECTROPHORESIS Volume: 31 Issue: 1 Special Issue: SI Pages: 65-73 DOI: 10.1002/elps.200900373 Published: JAN 2010
742
J. Sep.-Sei. 2009, 32.742 -75g
Svetlana M. Krylova Victor Okhonln Sergey N. Kuylov
Department of Chemistry, York University, Toronto, Ontario, Canada
Review
Transverse diffusion of laminar flow profiles -a generic method for mixing reactants in capillary micr ore actor
706
J. Sep.Sei. 3009, 35.70H-71B
Jana Krenkova FrantlsekSvec
The Mole-cul sr Foundry, E. 0. Lawrence Berkeley National Laboratory, Berkeley, CA, USA
Review
Less common applications of monoliths:
IV. Recent developments in immobilized enzyme
reactors for proteomics and biotechnology
3550
Review
Efecfrophorests 3004, 25, 3550-3563
J ana Krenkovä* Frantisek Foret
Immobilized microfluidic enzymatic reactors
Institute of AnalyticaI Chemistry, Brno, Czech Republic
ěvek Čechů k
aračním metodám
ěvek Čechů k
Vám děkuji
pozornost!