Notes for the experiment: Operator: Species: Date start: Date end: SAMPLE 1 Stock conc. SAMLE 1 Solvent Total exposition duration (h): Temperature (°C): Photoperiod (h): Light intensity (lux): Cultivation medium: Standard substance Stock solution of standrd substance (g/L): Stock solution prepared on: Stock solution prepared by: Culture flask started on: Culture flask started started by: Cells per mL in culture vessel Cells per mL at start Dillution factor SAMPLE 1 atrazine [ug/L] ZT Raphidocelis subcapitata 4/2/2015 4/5/2015 atr [ug/L] 800mg/L DMSO 72 24 24 4000 50% ZBB K2Cr2O7 2 1/12/2015 ZT 1/9/2015 ZT 1000000 6 concentrations ug/L 3.91 7.81 15.63 31.25 62.50 125.00 250.00 500.00 1000.00 Plate scheme+Raw data Blank subtractions atrazine [ug/L] 0 atrazine [ug/L] 0 Growth rate calculation - μ Growth rate inhibition % 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 atrazine [ug/L] 0 atrazine [ug/L] 0 Plate Title 3.91 7.81 15.63 31.25 62.50 0 125 250 500 1000 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 0h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0h atrazine [ug/L] 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 AVG control 1.02 0.0923 9.055 A 0.0370 0.0380 0.0370 0.0370 0.0380 0.0380 0.0370 0.0370 0.0370 0.0380 0.0370 0.0380 A 0-72h 1.03 1.04 1.03 1.10 1.00 1.06 0.86 0.75 0.41 0.15 0-72h -1.08 -2.02 -0.96 -7.66 1.44 -4.30 15.93 26.67 60.13 84.97 B 0.0380 0.0440 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0440 0.0430 0.0420 B 0.0065 0.0055 0.0060 0.0050 0.0055 0.0055 0.0065 0.0060 0.0065 0.0060 3d 1.07 0.97 0.93 0.97 0.86 0.96 0.77 0.72 0.45 0.15 3d -5.15 5.31 8.82 4.58 15.89 5.98 24.20 29.70 56.19 84.97 C 0.0380 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0420 C 0.0055 0.0055 0.0060 0.0050 0.0055 0.0055 0.0065 0.0060 0.0055 0.0060 1.03 0.94 0.90 0.85 0.81 0.85 0.75 0.54 0.50 0.15 -1.35 8.05 11.99 16.33 20.78 16.12 26.53 46.96 51.22 84.97 D 0.0370 0.0430 0.0430 0.0430 0.0440 0.0430 0.0430 0.0420 0.0450 0.0420 0.0430 0.0380 D 0.0055 0.0055 0.0060 0.0060 0.0055 0.0055 0.0055 0.0080 0.0045 0.0060 1.22 1.05 1.13 1.00 0.95 0.95 1.06 1.05 0.92 1.07 -19.35 -2.95 -10.72 2.03 7.01 7.01 -3.51 -2.65 10.12 -4.76 E 0.0370 0.0420 0.0430 0.0420 0.0430 0.0430 0.0420 0.0420 0.0440 0.0420 0.0430 0.0380 E 0.0033 0.0043 0.0033 0.0043 0.0043 0.0043 0.0033 0.0033 0.0053 0.0033 1.06 0.94 1.04 1.00 0.94 0.95 0.86 0.70 0.50 0.12 -3.93 7.64 -2.40 1.87 8.23 6.66 15.89 31.66 51.22 88.61 F 0.0380 0.0430 0.0440 0.0420 0.0430 0.0430 0.0430 0.0420 0.0430 0.0420 0.0430 0.0380 F 0.0055 0.0065 0.0050 0.0050 0.0055 0.0055 0.0055 0.0060 0.0045 0.0060 1.22 1.09 1.07 1.07 0.83 1.09 0.90 0.71 0.46 0.15 -19.34 -7.11 -4.71 -4.60 19.03 -6.69 11.24 30.34 54.67 84.97 G 0.0370 0.0420 0.0430 0.0430 0.0430 0.0470 0.0420 0.0420 0.0430 0.0430 0.0430 0.0380 G 0.0045 0.0055 0.0060 0.0050 0.0095 0.0045 0.0055 0.0060 0.0055 0.0060 AVG 1.082 0.995 0.993 0.998 0.886 0.983 0.828 0.682 0.462 0.146 AVG -6.17 2.38 2.55 2.10 13.08 3.55 18.76 33.06 54.68 85.70 H 0.0380 0.0370 0.0380 0.0370 0.0380 0.0370 0.0380 0.0360 0.0370 0.0370 0.0370 0.0360 H SD 0.077 0.068 0.075 0.095 0.082 0.094 0.065 0.081 0.038 0.017 SD 7.56 6.67 7.38 9.34 8.09 9.22 6.38 7.98 3.74 1.63 AVG 0.0375 0.0375 0.0375 0.0370 0.0380 0.0375 0.0375 0.0365 0.0370 0.0375 0.0370 0.0388 0.004 AVG 0.0055 0.0057 0.0058 0.0052 0.0063 0.0053 0.0059 0.0064 0.0053 0.0060 CV % 7.119 6.833 7.576 9.540 9.302 9.558 7.853 11.924 8.249 11.375 0.001 SD 0.0007 0.0004 0.0004 0.0004 0.0018 0.0004 0.0005 0.0009 0.0008 0.0000 20.825 CV % 12.8565 7.8459 7.7106 8.6003 28.3945 8.4380 9.2834 13.9754 15.7860 0.0000 AVG control 1.28 0.1716 13.367 24h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 24h atrazine [ug/L] 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 0.-24 1.15 1.21 1.18 1.39 1.16 1.32 0.80 0.51 0.43 0.15 0-24h 10.53 5.52 8.20 -7.98 9.85 -2.48 37.51 60.21 66.45 87.99 A 0.0370 0.0380 0.0370 0.0370 0.0380 0.0380 0.0370 0.0370 0.0380 0.0390 0.0370 0.0380 A 1d 1.27 1.21 1.13 1.22 1.16 1.27 0.80 0.51 0.24 0.15 1d 1.42 5.52 12.30 4.68 9.85 1.42 37.51 60.21 81.22 87.99 B 0.0390 0.0580 0.0560 0.0570 0.0580 0.0550 0.0580 0.0510 0.0480 0.0480 0.0440 0.0420 B 0.0205 0.0185 0.0195 0.0200 0.0175 0.0205 0.0145 0.0100 0.0100 0.0070 1.16 1.16 1.07 1.10 1.10 1.21 0.97 0.22 0.29 0.51 9.85 9.85 16.62 14.43 14.43 5.52 24.49 82.62 77.59 60.21 C 0.0380 0.0570 0.0560 0.0560 0.0550 0.0550 0.0570 0.0510 0.0480 0.0450 0.0440 0.0430 C 0.0195 0.0185 0.0185 0.0170 0.0175 0.0195 0.0145 0.0100 0.0070 0.0070 1.54 1.27 1.47 1.13 1.13 1.13 1.54 1.47 1.12 1.47 -19.77 1.13 -14.44 12.17 12.17 12.17 -19.77 -14.44 12.60 -14.44 D 0.0380 0.0550 0.0550 0.0550 0.0560 0.0540 0.0560 0.0510 0.0480 0.0440 0.0470 0.0380 D 0.0175 0.0175 0.0175 0.0180 0.0165 0.0185 0.0145 0.0100 0.0060 0.0100 1.16 0.99 1.13 0.96 0.90 1.04 0.90 0.51 0.29 0.15 9.85 22.86 11.88 25.58 30.06 19.30 30.06 60.21 77.59 87.99 E 0.0400 0.0540 0.0540 0.0530 0.0520 0.0520 0.0540 0.0530 0.0550 0.0530 0.0440 0.0380 E 0.0151 0.0151 0.0141 0.0131 0.0131 0.0131 0.0151 0.0141 0.0161 0.0141 1.41 1.21 1.07 1.03 0.42 1.17 0.90 0.51 0.37 0.15 -10.11 5.52 16.62 19.80 67.06 8.86 30.06 60.21 70.82 87.99 F 0.0380 0.0550 0.0550 0.0530 0.0510 0.0510 0.0530 0.0500 0.0480 0.0440 0.0440 0.0380 F 0.0175 0.0175 0.0155 0.0130 0.0135 0.0155 0.0135 0.0100 0.0060 0.0070 AVG 1.229 1.157 1.115 1.139 0.947 1.200 0.874 0.453 0.324 0.225 AVG 4.31 9.85 13.12 11.30 26.25 6.52 31.93 64.69 74.73 82.44 G 0.0370 0.0560 0.0560 0.0550 0.0520 0.0520 0.0520 0.0500 0.0480 0.0460 0.0440 0.0380 G 0.0185 0.0185 0.0175 0.0140 0.0145 0.0145 0.0135 0.0100 0.0080 0.0070 SD 0.114 0.096 0.046 0.170 0.312 0.107 0.072 0.129 0.077 0.160 SD 8.89 7.51 3.57 13.24 24.28 8.32 5.58 10.02 5.97 12.42 H 0.0380 0.0370 0.0380 0.0380 0.0380 0.0370 0.0380 0.0360 0.0380 0.0370 0.0370 0.0360 H CV % 9.294 8.329 4.112 14.929 32.922 8.899 8.194 28.383 23.614 70.741 AVG 0.0381 0.0375 0.0375 0.0375 0.0380 0.0375 0.0375 0.0365 0.0380 0.0380 0.0370 0.0389 0.015 AVG 0.0187 0.0181 0.0177 0.0164 0.0159 0.0177 0.0141 0.0100 0.0074 0.0076 AVG control 1.13 0.1533 13.544 0.002 SD 0.0013 0.0005 0.0015 0.0029 0.0018 0.0026 0.0005 0.0000 0.0017 0.0013 0-48 1.10 1.38 1.07 1.19 1.04 1.14 0.87 0.72 0.35 0.11 0-48h 2.57 -22.22 5.04 -5.52 8.14 -0.49 23.18 36.09 69.38 90.14 14.895 CV % 6.9724 3.0261 8.3799 17.5669 11.4251 14.6239 3.8846 0.0000 22.6124 17.6532 2d 1.19 1.37 0.98 1.06 0.83 1.06 0.75 0.68 0.39 0.11 1d -5.56 -20.68 13.52 6.52 26.56 6.66 33.94 39.69 65.54 90.14 48h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 48h atrazine [ug/L] 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 0.95 0.93 0.95 0.89 0.85 0.93 0.80 0.47 0.40 0.11 15.80 17.63 15.65 21.47 25.06 17.63 29.72 58.43 64.73 90.14 A 0.0390 0.0390 0.0390 0.0390 0.0400 0.0440 0.0390 0.0390 0.0390 0.0400 0.0410 0.0400 A 1.40 1.42 1.26 1.07 0.96 0.96 1.18 1.16 0.98 1.24 -23.42 -25.68 -11.02 5.47 14.98 14.98 -3.87 -2.55 13.59 -9.91 B 0.0400 0.0970 0.1260 0.0900 0.0940 0.0850 0.0920 0.0750 0.0640 0.0520 0.0470 0.0430 B 0.0590 0.0875 0.0515 0.0545 0.0440 0.0535 0.0370 0.0255 0.0130 0.0075 1.08 1.24 1.14 1.08 0.94 1.03 0.80 0.61 0.45 0.11 4.30 -9.48 -0.37 4.44 17.01 8.65 29.72 45.73 60.52 90.14 C 0.0390 0.0980 0.1230 0.0810 0.0810 0.0700 0.0840 0.0670 0.0620 0.0510 0.0470 0.0430 C 0.0600 0.0845 0.0425 0.0415 0.0290 0.0455 0.0290 0.0235 0.0120 0.0075 1.22 1.33 1.07 1.15 0.69 1.19 0.83 0.64 0.39 0.04 -8.10 -17.43 5.04 -1.27 38.76 -5.02 26.56 43.62 65.54 96.46 D 0.0390 0.0750 0.0740 0.0790 0.0750 0.0710 0.0740 0.0650 0.0590 0.0490 0.0470 0.0390 D 0.0370 0.0355 0.0405 0.0355 0.0300 0.0355 0.0270 0.0205 0.0100 0.0075 AVG 1.112 1.250 1.044 1.074 0.870 1.070 0.808 0.626 0.395 0.097 AVG 1.80 -10.44 7.78 5.13 23.11 5.49 28.62 44.71 65.14 91.41 E 0.0410 0.0930 0.1130 0.0800 0.0760 0.0690 0.0740 0.0730 0.0770 0.0790 0.0460 0.0390 E 0.0531 0.0731 0.0401 0.0361 0.0291 0.0291 0.0341 0.0331 0.0371 0.0391 SD 0.107 0.186 0.075 0.117 0.129 0.099 0.045 0.096 0.036 0.032 SD 9.42 16.44 6.64 10.29 11.42 8.73 4.02 8.52 3.16 2.83 F 0.0400 0.0860 0.1160 0.0870 0.0830 0.0770 0.0820 0.0650 0.0590 0.0500 0.0470 0.0390 F 0.0480 0.0775 0.0485 0.0435 0.0360 0.0435 0.0270 0.0205 0.0110 0.0075 CV % 9.592 14.887 7.199 10.849 14.856 9.238 5.629 15.404 9.054 32.899 G 0.0390 0.0900 0.1170 0.0900 0.0890 0.0790 0.0870 0.0670 0.0600 0.0510 0.0460 0.0390 G 0.0520 0.0785 0.0515 0.0495 0.0380 0.0485 0.0290 0.0215 0.0120 0.0065 H 0.0390 0.0370 0.0380 0.0380 0.0390 0.0380 0.0380 0.0370 0.0380 0.0380 0.0380 0.0370 H GRI atrazine [ug/L] AVG 0.0395 0.0380 0.0385 0.0385 0.0395 0.0410 0.0385 0.0380 0.0385 0.0390 0.0395 0.0399 0.042 AVG 0.0512 0.0727 0.0469 0.0449 0.0354 0.0453 0.0298 0.0223 0.0116 0.0073 c 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 125 250 500 1000 0.012 SD 0.0094 0.0212 0.0051 0.0073 0.0061 0.0066 0.0041 0.0022 0.0011 0.0004 AVG control 0.98 0.2315 23.626 log c 0.59 0.89 1.19 1.49 1.80 2.10 2.40 2.70 3.00 27.616 CV % 18.2907 29.1694 10.9347 16.3360 17.3677 14.6762 13.9171 9.7217 9.8291 6.1262 24-48 1.06 1.55 0.97 1.00 0.92 0.96 0.94 0.94 0.26 0.07 0h AVG 72h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 72h atrazine [ug/L] 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 1d 1.12 1.52 0.83 0.89 0.51 0.85 0.69 0.85 0.54 0.07 SD A 0.0400 0.0390 0.0390 0.0410 0.0400 0.0460 0.0390 0.0430 0.0390 0.0400 0.0400 0.0400 A 0.75 0.71 0.84 0.68 0.60 0.65 0.62 0.72 0.51 -0.29 24h AVG 4.31 9.85 13.12 11.30 26.25 31.93 64.69 74.73 82.44 B 0.0400 0.1810 0.1630 0.1710 0.1740 0.1540 0.1720 0.1250 0.0950 0.0610 0.0490 0.0430 B 0.1430 0.1245 0.1315 0.1345 0.1120 0.1335 0.0850 0.0565 0.0220 0.0095 1.26 1.58 1.04 1.01 0.80 0.80 0.81 0.85 0.83 1.02 SD 8.89 7.51 3.57 13.24 24.28 5.58 10.02 5.97 12.42 C 0.0400 0.1750 0.1380 0.1370 0.1320 0.1140 0.1360 0.1060 0.0900 0.0600 0.0490 0.0430 C 0.1370 0.0995 0.0975 0.0925 0.0720 0.0975 0.0660 0.0515 0.0210 0.0095 1.01 1.49 1.14 1.21 0.98 1.03 0.69 0.72 0.61 0.07 48h AVG 1.80 -10.44 7.78 5.13 23.11 28.62 44.71 65.14 91.41 D 0.0390 0.1600 0.1300 0.1280 0.1170 0.1040 0.1100 0.0920 0.0790 0.0590 0.0490 0.0390 D 0.1220 0.0915 0.0885 0.0775 0.0620 0.0715 0.0520 0.0405 0.0200 0.0095 1.03 1.45 1.08 1.26 0.96 1.21 0.76 0.77 0.41 -0.07 SD 9.42 16.44 6.64 10.29 11.42 4.02 8.52 3.16 2.83 E 0.0410 0.1650 0.1390 0.1360 0.1250 0.1130 0.1170 0.1150 0.1220 0.1200 0.0490 0.0390 E 0.1250 0.0990 0.0960 0.0850 0.0730 0.0730 0.0770 0.0750 0.0820 0.0800 AVG 0.994 1.343 0.972 1.009 0.794 0.940 0.742 0.798 0.465 -0.031 72h AVG -6.17 2.38 2.55 2.10 13.08 18.76 33.06 54.68 85.70 F 0.0400 0.1700 0.1480 0.1540 0.1400 0.1330 0.1340 0.1120 0.0870 0.0590 0.0480 0.0390 F 0.1320 0.1095 0.1145 0.1005 0.0910 0.0955 0.0720 0.0485 0.0200 0.0085 SD 0.144 0.357 0.139 0.238 0.225 0.207 0.120 0.095 0.134 0.156 SD 7.56 6.67 7.38 9.34 8.09 6.38 7.98 3.74 1.63 G 0.0380 0.2110 0.1840 0.1870 0.1620 0.1550 0.1560 0.1230 0.0890 0.0610 0.0490 0.0400 G 0.1730 0.1455 0.1475 0.1225 0.1130 0.1175 0.0830 0.0505 0.0220 0.0095 CV % 14.469 26.620 14.299 23.580 28.304 22.071 16.189 11.910 28.888 -504.862 H 0.0390 0.0370 0.0380 0.0380 0.0390 0.0380 0.0380 0.0370 0.0380 0.0380 0.0390 0.0370 H AVG control 0.79 0.1526 19.212 AVG 0.0396 0.0380 0.0385 0.0395 0.0395 0.0420 0.0385 0.0400 0.0385 0.0390 0.0395 0.0400 0.092 AVG 0.1414 0.1141 0.1159 0.1055 0.0900 0.1031 0.0716 0.0495 0.0210 0.0093 48-72 0.89 0.35 0.94 0.90 0.93 0.91 0.83 0.80 0.53 0.24 GraphPad Analysis 0.020 SD 0.0193 0.0214 0.0242 0.0230 0.0230 0.0236 0.0135 0.0058 0.0010 0.0004 1d 0.83 0.16 0.83 0.80 0.91 0.76 0.82 0.78 0.56 0.24 For GraphPad prism For GraphPad prism log(agonist) vs. normalized response -- Variable slope 21.472 CV % 13.6274 18.7931 20.8383 21.7597 25.5918 22.8460 18.8055 11.7797 4.7619 4.8087 1.19 0.95 0.78 0.78 0.73 0.70 0.66 0.68 0.69 0.24 72h % Growth rate inhibition c log c 1 2 3 4 5 c log c 1 2 3 4 5 Best-fit values 0.86 0.30 0.87 0.86 0.92 0.92 0.81 0.82 0.79 0.72 atrazine [ug/L] 3.91 0.591760035 -1.08 -5.15 -1.35 -3.93 -19.34 SC 0 #NUM! -4.30 5.98 16.12 6.66 -6.69 LogEC50 2.583 1.01 0.35 0.86 0.84 0.93 0.79 0.98 0.86 0.60 0.13 7.81 0.89279003 -2.02 5.31 8.05 7.64 -7.11 125 2.096910013 15.93 24.20 26.53 15.89 11.24 HillSlope 1.403 1.20 0.62 1.05 0.91 1.09 0.88 1.05 0.85 0.61 0.38 15.63 1.193820026 -0.96 8.82 11.99 -2.40 -4.71 250 2.397940009 26.67 29.70 46.96 31.66 30.34 EC50 383.1 AVG SD CV% AVG 1.024 0.485 0.892 0.846 0.917 0.810 0.868 0.795 0.597 0.243 31.25 1.494850022 -7.66 4.58 16.33 1.87 -4.60 500 2.698970004 60.13 56.19 51.22 51.22 54.67 95% CI (profile likelihood) OD 0 0.004 0.000699206 18.16119218 SD 0.173 0.305 0.106 0.057 0.129 0.089 0.154 0.072 0.063 0.090 62.50 1.795880017 1.44 15.89 20.78 8.23 19.03 1000 3 84.97 84.97 84.97 88.61 84.97 LogEC50 "2,531 to 2,636" 1 0.014 0.001032796 7.209742122 CV % 16.854 62.783 11.862 6.796 14.090 10.948 17.748 9.107 10.519 37.213 HillSlope "1,183 to 1,676" 2 0.040 0.01337535 33.0868286 Atrazine - Growth Rate Inhibition 72h - Raphidocelis subcapitata EC50 "339,8 to 432,4" 3 0.087 0.016263456 18.8016832 EC50 383 ug/L Goodness of Fit EC20 143 ug/L Degrees of Freedom 43 R squared 0.9354 Sum of Squares 2465 Sy.x 7.571 Number of points # of X values 45 # Y values analyzed 45 H11 H12