Patogenní kvasinky
Kvasinkové patogeny
Candida Cryptococcus
Malassezia
Trichosporon
Rhodotorula
Hansenula Torulopsis
Geotrichum
Saccharomyces
> 70-90 % onemocnění kvasinkami jsou kandidózy
> počet druhů působících jako etiologické agens a účastnících se patologických procesů u člověka, se zvyšuje
> Většina kvasinkových druhů je nepatogenní, patogenními se stávají v podmínkách poruch imunitn odpovědi
Přehled onemocnění způsobených patogenními houbami
Aspergillosis (Aspergillus s
Blastomycosis (Blastomyces s
Candidiasis (Invasive) (Candida s
Coccidioidomycosis
Cryptococcosis (Cryptococcus s
Histoplasmosis (Histoplasma caps1
Mucormycosis (Mucor
Paracoccidioidomycosis
Sporotrichosis (Soorothrix schenckii
> My kozy:
• primární
• oportunní (u imunokompromitovaných pacientů
leukémie, diabetes, popáleniny, terapie steroidy, imunosupresivy)
• Systémové - plíce, játra, srdce, mozek, slezina okální - kůže, ústní dutina, vagina aj
> forma a závažnost infekce závisí na: -infekčním agens (druh, množství) - způsobu a bráně infekce
- stavu imunitního svstému hostitele
> endogenní infekce (autoinfekce) zdrojem jsou komenzálové člověka - při porušení homeostázy, vnímavosti a rezistence
> povrchové mykózy - nakažlivé
Některé mykózy mají charakteristickou geografickou distribuci:
Coccidioidomycosis: jihozápad USA a severní Mexiko
Histoplasmosis: jižní oblasti USA Blastomycosis: USA a Afrika Paracoccidioidomycosis: Jižní Amerika Sporotrichosis: Střední Amerika, Mexiko
Mechanizmus patogenicity
Sekretované houbové hydrolázy napomáhají invazi do tkání Tvorba biofilmu chrání kvasinky
Switching (změna expese genů, hyfální růst) napomáhá modulovat antigenicitu
Diagnostika:
> kombinace   klinického pozorování laboratorního vyšetření
> Laboratorní vyšetření
oskoDickv
mm
kultivační průkaz rologické metod
Mikroskopický průkaz
povrchové mykózy - šupinky kuže, části nehtů, seškrab kštice s vlasovými kořínky a kožními šupinami
kandidóza - stery sliznic
systémové infekce - vzorky tkání z více míst
ne
mikroskopie:
vlhkých preparátech po natrávení ' 10-20% hvdroxidem draseln'
yrn
- infekce sliznic - Gramovo barvení
- morfologie buněk
histologické vyšetření
kultivace
- většina kvasinek snadno kultivovatelná
- Sabouraudův agar
(glukóza, sladinový agar, hydrolyzát kaseinu + chloramfenikol nebo gentamycin)
- Czapek - Doksův agar a jiné
současně při 25 - 30°C a 37°C doba kultivace 1 - 5 dnů
Levné ale pracné a časově náročné
auxanogram - test na asimilaci cukrů a dusíkatých látek (zdroj C), provádí se na miskách (použití cukerných disků)
zymogram - test na zkvašování cukrů, provádí se v skúmavkách anebo v mikrotitračních destičce (barevná změna acidobazickéh átoru
El
Komerční testy
rychlé dostupné identifikační soupravy
jamky obsahují dehydratované substráty (cukry, organické kyseliny, aminokyseliny), test na stanovení citlivosti k cykloheximidu a jeden kolorimetrický test (eskulin)
Nárůst kvasinky v jednotlivých jamkách lze hodnotit buď vizuálně nebo pomocí automatického čtecího zařízení
OOOOOOOOOOOOOQQQ QOOQQQQQQQQQOQQ
Další testy: pH indikátor, chromogenní média
sérologie
Průkaz specifických protilátek: (protilátková odpověď slabá)
Protilátky proti kandidám jsou často přítomny i u zdravých osob, protože každý jedinec se během svého života setká s kvasinkami
Dojde-li však k rychlému vzestupu titru protilátek, svědčí to o přítomnosti kandidové infekce
Průkaz antigenu: detekci hlavního glykoproteinu buněčné stěny
kandid - mananu, systémové kandidózy ELISA: imunoenzymatická metoda ^^^^^^^^^^^^^^h
Antimykotika:
kvasinky - eukaryontní buňky - běžná antibakteriální antibiotika jsou neúčinná
Terčové struktury antimykotik:
buněčná stěna (glukan, manoproteiny, chitin)
plasmatická membrána (míst cholesterolu obsahuje ergosterol)
cytoskelet (kvasinky neobsahují interdmediální filamenta RNA (narušení syntézy bílkovin)
Antimykotika —► toxický účinek na hostitele
Příklady antimykotik
perorálně: ketokonazol, terbinafin
parenterálně:
amfotericin B, mikonazol... (malá vstřebatelnost z trávicího ústrojí) parenterálně i perorálně:
onazol, itrakonazol, flucytozin...
azolové deriváty
a) 2-nitroimidazoly :
klotrimazol mikonazol ketokonazol
b) triazoly :
itrakonazol (kandidózy, kryptokokózy) flukonazol (perorálně - kryptokoková
meningitida) - existuje primární i získaná rezistence
k azolovým sloučeninám
ab
va
(Whitfieldova mast) - povrchové mykózy
polyen
- toxické, ukládají se v nově tvořeném
keratinu nystatin (kandidózy)
fotericin B (kandidózy, kryptokokózy)
griseofulvin - proti dermatofytům imidazoly
kyselina nalidixová
fluoropyrimidiny
kandicidin
kombinace antimvkotik
Chemická skupina Antimykotikum
Mechanizmus účinku
Polyenová antibiotika Amfotericin B Nystatin_
fungicidní účinek in vitro; vazba na ergosterol
v cytoplazmatické membráně, vznik pórů, únik iontů a
bílkovin (enzymů) a přesun jiných molekul do buňky
Azolové deriváty Imidazoly
Mikonazol
Ketokonazol Triazoly 1. generace
Flukonazol
Itrakonazol Triazoly 2. generace
Vorikonazol
Posakonazol
Ravukonazol
převážně fungistatický účinek celé skupiny (cidní účinek vorikonazolu na aspergily), společný mechanizmus účinku, blokáda enzymatických systémů závislých na cytochromu P450 (inhibice 14-a-demetylázy); inhibice syntézy ergosterolu, poškození funkčnosti plazmatické membrány, zpomalení až zástava růstu
Antimetabolity Flucytosin (5FC)
vstup 5-FC do buněk pomocí membránové cytosin-permeázy; deaminace na 5-fluorouracil; zabudování jako falešný prekurzor do RNA houby na místo cytosinu; blokáda proteosyntézy a thymidylát syntetázy (inhibice syntézy DNA)
Echinokandiny Kaspofungin Anidulafungin Mikafungin	inhibitory buněčné stěny hub (specifické nekompetitivní inhibitory |3-{1,3)-glukan syntázy); deplece |3-(1,3)-glukanu a osmotická destabilizace buněčné stěny houby
Allylaminy Terbinafin Naňifin	specifická vazba na skvalen epoxidázu; inhibice biosyntézy ergosterolu
Thiokarbamáty Tolnaftát Tolciklát	specifická vazba na skvalen epoxidázu; inhibice biosyntézy ergosterolu
Morfoliny Amorolfin	specifickou vazba na A14 reduktázu/ A'-Atf izomerázu, inhibice biosyntézy ergosterolu
Benzofurany Griseofulvin	interference s mitotickým vřeténkem, inhibice mitózy a poškození syntézy nukleových kyselin
'ovrchové mykózy
Povrchová kandidóza:
- postižení kuže, nehtu, sliznic úst a pochvy (infekce sliznic - „moučnivka")
- 80 - 90% Candida albicans, zbývající případy další druhy (C. tropica lis, C. krusei, C. parapsilosis, C. glabrata...)
- 20% lidské populace - C. albicans součást komensální flóry pokožky a sliznic
- výskyt závisí na stavu organismu - bakteriální či virová infekce, těhotenství, a
25°C
Yeast Levures
37°C
Hypha Hyphe
		
		
1 1		
37°C
A
Pseudohyphae Pseudohyphes
Identifikace:
- Sabouraudův glukózový agar - kvasinková fáze (oválné buňky, 3-8 um), kolonie za 1-2 dny při 25°C
- in vivo - směs kvasinkových buněk, pseudomycelia a pravého mycelia
- po obarvení dle Grama: grampozitivní oválné učící buňky
Candida    albicans    - tvorba
charakteristických klíčků (po 90-120 minutách inkubace v séru při 37°C)
- další     identifikace:     soupravy, testy fermentace a utilizace cukrů a zdrojů dusíku
Léčení:
- lokální terapie nystatinem, mikonazolem
vaginální kandidóza -azolové   poševní čípky případů
amfotericinem B,
zolové deriváty, u recidivujících
infekce sliznic:
- nejčastější povrchové kandidózy
- na sliznici ohraničené bílé skvrny, mohou splývat a vytvářet pseudomembrány (tvarohový vzhled)
- infekce dutiny ústní:
- bukální sliznice, tvrdé patro, okolí bílých skvrn zarudlé
- kojenci, staré osoby, osoby se sníženou imunitou (AIDS)
- umělý chrup - infekce pod protézou
infekce kůže a nehtů:
v tříslech, mezi prsty, v podpažní jamce, pod prsy (v místech vlhké zapářky)
postižení nehtu a nehtového lůžka - při častém máčení rukou (ošetřovatelky, myčky nádobí)
Mykotické plaky na zubech
Původce: většinou Candida albicans, souvislost se stravovacími návyky
Pityriasis versicolor
- chronická infekce způsobená lipofilní Malassezia furfur
- odbarvené skvrny na kůži M. furfur
- běžný komenzál na kůži, většina infekcí je endogenní
- vyžaduje k růstu lipidy; monopolárně pučící (jediný rod)
- oválné lahvovité buňky, velikost 2-3 x 4-6 pm, při pityriasis versicolor kvasinko vité buňky s krátkými hyfami
- kultivace - speciální půdy s Tweenem nebo lipidy (37°C)
- podílí se na tvorbě lupů a seboroické dermatitidě
Systémové mykózy
Kry ptoko koza:
- způsobuje Cryptococcus neoformans
vytvářející hladké lesklé kolonie, kolem buněk silné pouzdro
- onemocnění CNS a plic
- sporadicky po celém světě, nejčastější pacientů s AIDS (u 10%)
rostř dusík
d
alkalické substráty boha
íá na
Průkaz:
mikroskopicky: v mozkomíšním moku a dalším
klinickém materiálu - kulovité buňky 2-10 um
s mukopolysacharidovým pouzdrem (až 60 % izolátů) - po smíšení mozkomíšního moku s tuší se pouzdro jeví jako jasný dvorec kolem buněk
kultivace: - na Sabouradově agaru při 25-30°C a 37°C za 2-3 dny
- smetanově bílé až žlutohnědé mukózní kolonie (neopouzdřené kmeny - suché)
- netvoří pseudomycelium ani mycelium
- nefermentuje cukry, silná produkce ureázy,
asimilace inozitolu
Blastoschizomyces capitatus
(dříve Trichosporon capitatum)
eminované infekce
- oslabení neutropeničtí pacienti se zhoubnými lymfomy
- asimilace dou     ' '
ukózy a galaktóz;
Geotrichum candidum
- infekce u diabetiků imunosuprimovaných
cerevisiae
- sepse a plicní infekce
původce vagináln mykóz (8,5 %)
v
o
Rhodotorula
- barevné kolonie (oranžové, červené)
- neasimiluje inositol
Dimorfní houby
vláknitá fáze
- většinou saprofytická (průnik přes kůži a sliznice)
kvasinková fáze
- infekční (hluboké infekce tkání a orgánů)
- kvasinkový rust podporují bohatější pudy
(krevní agar) a teplota 35-37°C
- tvorba hyf - teplota 25-30°C
Dimo
ge
Fungus
In vitro (25° C)
In vivo (37* C)
Blastomyces
Coccidioides
Histopiasma
Paracoccidioides
Sporothrix
Mold
Mold
Mold
Mold
VfAl
r     y Yeast
Spherule
Yeast
:0
Yeast
Yeast
Blastomykoza, kokcidiomykza, sporotrichoza etc.
Sporothrix schenckii
buňky ve fázovém kontrastu - hyfy a konídie
Sporothrix schenckii
studie buněk freeze fracture technikou
Sporothrix schenckii
. studie buněk freeze-fracture technikou
Candida albicans
Budding yeast
Pseudohypha
Parent
yeast
cell
A
f
Germ tube
Hypha
Candida albicans
studium vlivu antibiotika nystatinu na morf plasmatické membrány
Blastomvces dermatitis
LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA KANDIDOVÝCH INFEKCÍ. Marcela Vejsová 2009, Disertační práce