02_PROJASŇOVÁNÍ ROSTLINNÉHO MATERIÁLU

Princip metody

Pomocí projasňovacího média se zprůhlední obsah buněk a je pak možné při zaostření na určitou
rovinu prohlédnout buňky tzv. optického řezu. Materiál tedy není nutno řezat. Metody se často
využívá v rostlinné embryologii nebo ve šlechtitelství při studiu vývoje embrya.

Pomůcky: Mikroskop, preparační souprava

Materiál:         plody kokošky pastuší tobolky (Capsella bursa-pastoris L.)

Fixační směsi:

Carnoyova fixáž (ethylalkohol : ledová kyselina octová 3 :1)                   nebo

FAA (35% formaldehyd + ledová kys. octová + 70% ethylalkohol            5 + 5 + 90 dílů)

Projasňovací média:

nasycený roztok chloralhydrátu (8 dílů chloralhydrátu a 3 díly destilované vody)      nebo

5% roztok KOH

Postup:

1)      Rostlinný materiál fixujeme ve fixační směsi 2 hodiny.

2)      Fixované objekty propereme v etanolu (jeho koncentrace odpovídá koncentraci etanolu ve
fixační směsi). V 70% etanolu je možné nafixovaný materiál i uchovávat po delší dobu. Pokud chceme
sledovat ukládání chlorofylu v buňkách embrya, fixaci vynecháme.

3)      Na podložním skle vypreparujeme z šešulek různé velikosti mladá semena, zakápneme několika
kapkami projasňovacího média a asi po hodině můžeme pozorovat obsah zárodečného vaku.

Výsledky:

Vyhledáme vhodnou optickou rovinu a schematicky zakreslíme tvar mladého embrya a jeho uložení
v semeni. Snažíme se najít různé vývojové fáze embrya.


Literatura:

1.             Braune W., Leman, A., Taubert H. Pflanzenanatomisches Praktikum II. 2. vyd. Jena:
VEB Gustav Fischer Verlag, 1982. 426 s. ISBN 261 700-36-82.

2.             Lux A., Erdelská O. et al. Praktikum z anatómie a embryológie rastlín, Univerzita
Komenského Bratislava, 1998. 136 s. ISBN 80-223-1229-0.

3.             Opravilová, V., Knoz, J. Základy mikroskopické techniky. Brno: Masarykova
univerzita, Vyd. 1. 1992.


Příklad obrazu projasněného semene kokošky s torpédovitým embryem

Fotografováno v diferenciálním interferenčním kontrastu podle Nomarského


funikulus   CS   chaláza

mikropyle

  bazální buňka                                            vlastní embryo
endosperm

  suspenzoru

   antipody       suspenzor                              osemení (testa)