Botanická mikrotechnika 2024

Barvení preparátů – ruční a parafínové řezy


Barviva:

Toluidinová modř (1 % roztok v destilované vodě – 1 g/100 ml) , je možné i jiné koncentrace

Safranin O ve vodě (1% (w/v) – 1 g/100 ml)

Safranin/Fast Green – safranin (1 g/l ve vodě), Fast Green (0.1 g v 100 ml 96% ethanolu)

Safranin + alciánová modř

                Safranin: 0.35g safraninu v 35 ml 50% EtOH

Alcian Blue: 0.65g Alcian Blue (alciánová modř) v 65 ml destilované vody,

Oba roztoky nechat míchat magnetickou míchačkou cca. 1 hodinu, pak slít dohromady, promíchat a
zfiltrovat.


Safranin + astrablue

                Safranin: 0,8 g safraninu ve 100 ml destilované vody

                Astrablue: 0,5 g astrablue ve 100 ml destilované vody + 2 ml kyseliny octové

                Oba roztoky rozmíchat samostatně, pak slít dohromady. Označit. (díky kyselině je
barvička stabilní)


Materiál:

Šáchor, stonek (na ruční řezy)

Řapíkatý celer, řapík (ruční řezy)


Postupy barvení:

I.       Toluidinová modř

1.       Žiletkou vytvoříme tenké řezy a ihned je umístíme do kapky vody.

2.       Odsajeme pipetou nebo filtračním papírem vodu a ihned zakápneme několika kapkami barvičky.
Necháme působit max. 1 minutu.

3.       Odsajeme barvičku filtračním papírem a ihned zakápneme vodovodní vodou. Odsajeme vodu se
zbytkem barvičky a opakujeme zakápnutí a odsátí vody ještě jednou nebo do té doby, dokud se voda
barví modře.

4.       Nakonec zakápneme vodou/50% glycerolem, přikryjeme krycím sklem a pozorujeme.




II.     Safranin/Fast Green – sukcesivní


  Roztok

                                  Čas*

1

  50% ethanol

                                  5 min

2

  1 g/l safranin (vodný roztok)

                                  10 min

3

  50% ethanol

                                  2x5 min

4

  75% ethanol

                                  5 min

5

  Fast Green (0,1% v 96% ethanolu)

                                  4 min

6

  96% ethanol

                                  5 min**

7

  100% ethanol (E)

                                  5 min

8

  E:X 1:1

                                  5 min

9

  Xylén (X)

                                  5 min

10

  Montování do Eukittu


*časy barvení jsou orientační, záleží na druhu preparátu, vhodné vyzkoušet (preparační mikroskop
pro kontrolu)

**v tomto bodě stačí opláchnout 96% ethanolem a pak zakápnout 50% glycerolem, přikrýt krycím
sklíčkem a pozorovat

III.  Safranin + alciánová modř – simultánní

Pokud řezy v ethanolu, tak rehydratovat ve vodě po dobu 5 min. Ruční řezy rovnou barvit.


5 min………směs safranin+alciánová modř

2x………….opláchnout v destilované vodě

Pozorovat


(nebo trvalý preparát:

2 min……....50% EtOH

2 min……....75% EtOH

2 min……....96% EtOH

1x………….opláchnout v 100% EtOH

1x………….opláchnout v 100% xylenu

Namontovat na sklíčko do Eukittu.)



IV.  Safranin + astrablue – simultánní

1.      Žiletkou vytvoříme tenké řezy a ihned je umístíme do kapky vody.

2.      Odsajeme pipetou nebo filtračním papírem vodu a ihned zakápneme několika kapkami barvičky.
Necháme působit 3-5 minut.

3.      Odsajeme barvičku filtračním papírem a ihned zakápneme destilovanou vodou. Odsajeme vodu se
zbytkem barvičky a opakujeme zakápnutí a odsátí vody ještě jednou nebo do té doby, dokud než je
voda čirá.

4.      Nakonec zakápneme vodou/50% glycerolem, přikryjeme krycím sklem a pozorujeme.

V. Safranin (1%) – sejně jako I., ale barvit 5 minut, pak důkladně propláchnout destilovanou vodou.