Měření velikosti objektů v mikroskopu
Potřebujeme speciální pomůcky: okulárový mikrometr a objektivový mikrometr.
Okulárový mikrometr je skleněná destička, která se vkládá do okuláru. Je na ní vyryta 1 cm dlouhá úsečka
rozdělená na 100 dílků po 0,1 mm. Okulárový mikrometr se vkládá do okuláru, aby bylo úsečku vidět, je nutno
správně seřídit světlo (clonit).
Objektivový mikrometr je podložní sklo s přilepeným krycím sklem, přičemž na krycím skle je opět vyryta
úsečka, ale tentokrát o délce 1 mm rozdělena na 100 dílků po 10 µm. Pokládá se na stoleček jako preparát.
Princip práce je takový, že si nejprve určíme, kolika dílkům na objektivovém mikrometru odpovídá jeden dílek
okulárového mikrometru. Vypočteme mikrometrický koeficient:
Počet dílků objektiv. mikrometru x 10
Mikrometrický koeficient =
Počet dílků okulár. mikrometru
Hodnota mikrometrického koeficientu vychází v mikrometrech a je nutné ji stanovit pro každý objektiv zvlášť.
Tato hodnota udává, kolik mikrometrů měří jeden dílek objektivového měřítka pro dané zvětšení.
Dále musíme tuto pracně určenou hodnotu použít pro vlastní měření velikosti pozorovaných objektů.
Objektivový mikrometr vyndáme z mikroskopu a umístíme na jeho místo na stoleček normální preparát.
Okulárový mikrometr ponecháme v okuláru. Nyní si vybereme v preparátu konkrétní objekt (např. izolovanou
buňku) a spočítáme, kolika dílkům na okulárovém mikrometru tento objekt odpovídá. Následně tento počet díků
jednoduše vynásobíme mikrometrickým koeficientem pro daný objektiv a vyjde nám velikost sledované buňky
v mikrometrech.
Měření výšky mikroskopovaného objektu: tuto veličinu má smysl měřit zejména na preparátech celých
biologických objektů (pylových zrn, izolovaných buněk, částí těl hmyzu apod.) U histologických řezů je tato
metoda omezena, protože řezy samy o sobě mají standardní tloušťku (cca 1 – 10µm) na kterou připadá několik
málo vrstev buněk. Rozlišit přesně na výšku jednotlivé buňky většinou není v praxi možné. Pro měření výšky
objektu se používá měřítko na mikrošroubu, jeden dílek zde odpovídá 2,5 µm. Při určování výšky objektů
zaostříme mikrošroubem na vrchní rovinu ostrosti a poznačíme si hodnotu dílku na měřítku. Potom zaostříme ne
spodní rovinu ostrosti a počet dílků, o které se mikrošroub pootočil, vynásobíme 2,5. Výsledek je přibližná výška
objektu v mikrometrech.
Úkol:
1. pokuste se stanovit mikrometrický koeficient pro objektiv 40 nebo 100 (imerzní) a následně změřte
okulárovým měřítkem amébu, prvoka nebo krvinku z krevního nátěru (stačí jeden objekt a jeden objektiv).
2. na preparátu schránek dírkonožců zkuste stanovit výšku objektu. Zaostřete nejprve na horní rovinu, poté
pootočte mikrošroubem a zaostřete na spodní rovinu schránky. Počet dílků, o které bylo nutné pootočit
mikrošroub, se vynásobí 2,5.