Bi7035c Speciální virologické metody - cvičení
podzim 2024
Rozpis praktických cvičení:
1.  cvičení: Zásady práce s buněčnými kulturami. (3 hodiny)
práce v BSL-2 laboratoři, ukázka imortalizovaných a primárních linií (savčí, klíštěcí), pasážování buněk, počítání buněk,viabilita, nasazování buněk na kultivační 96-jamkové desky, měření cytotoxicity
2. cvičení: Základy práce s virem. (5-6 hodin)
část A: mikroskopování infikovaných kultur (LGTV, HSV-1), ukázka plakových titrací různých virů,plaková titrace, nasazeni'TCID50, nasazení experimentu na testování antivirotik
část B: Barvení a vyhodnocování plakové titrace. Odečet TCID50. (2 hodiny)
3. cvičení: Imunologicko-virologické testy. (5-6 hodin)
část A: provedení virus neutralizačního testu, hemaglutinačního testu a odečet hemaglutinačně inhibičního testu a komplement fixační reakce
část B: odečet VNT a metody fixace pro následnou imunofluorescenci (1-2 hodiny)
4. cvičení: Imunofluorescenční barvení, zpracování tkání a orgánů, izolace RNA (4-6 hodin) Imunofluorescenční barvení buněčné kultury a tkáňového řezu, homogenizace klíšťat a izolace virové RNA
5. cvičení: Fluorescenční mikroskopie, molekulární detekce a rekombinantní systémy
(proběhne v laboratoři Emergentních virových nákaz, VÚVeL; cca 6 hodin) Příprava RT-PCR, gelová elektroforéza, vyhodnocení gelu; mikroskopování na fluorescenčním mikroskopu preparátů z předešlého cvičení, ukázka zprůhledňování tkání pro další typy mikroskopie; transfekce virových fragmentů, propagace rekombinantního viru a možnosti live-cell imagingu
6. cvičení: Práce s laboratorními zvířaty ve virologickém výzkumu. (4 hodiny)
Myš jako častý model pro studium virových infekcí-základní anatomie myši, způsoby anestézie, různé způsoby administrace viru a testovaných látek, pitva myši; práce s kuřecími embryi - anatomie, metody administrace, sledování vývoje embrya
Na konci každého cvičení obdrží studenti protokol s otázkami k vypracování. K tomu bude nutné si přečíst odborný článek, který bude nahrán ve studijních materiálech v ISu. Vypracovaný protokol se odevzdává na začátku následujících cvičení.
Pro úspěšné ukončení předmětu je potřeba odevzdat a mít schválené všechny protokoly a úspěšně vypracovat závěrečný test.