Notes for the experiment: Operator: Species: Date start: Date end: SAMPLE 1 Stock conc. SAMLE 1 Solvent Total exposition duration (h): Temperature (°C): Photoperiod (h): Light intensity (lux): Cultivation medium: Standard substance Stock solution of standrd substance (g/L): Stock solution prepared on: Stock solution prepared by: Culture flask started on: Culture flask started started by: Cells per mL in culture vessel Cells per mL at start Dillution factor SAMPLE 1 atrazine [ug/L] ZT Raphidocelis subcapitata 4/2/2015 4/5/2015 atr [ug/L] 800mg/L DMSO 72 24 24 4000 50% ZBB K2Cr2O7 2 1/12/2015 ZT 1/9/2015 ZT 1000000 6 concentrations ug/L 3.91 7.81 15.63 31.25 62.50 125.00 250.00 500.00 1000.00 Plate scheme+Raw data Blank subtractions atrazine [ug/L] 0 atrazine [ug/L] 0 Growth rate calculation - μ Growth rate inhibition % 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 atrazine [ug/L] 0 atrazine [ug/L] 0 Plate Title 3.91 7.81 15.63 31.25 62.50 0 125 250 500 1000 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 0h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0h atrazine [ug/L] 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 A 0.0370 0.0380 0.0370 0.0370 0.0380 0.0380 0.0370 0.0370 0.0370 0.0380 0.0370 0.0380 A 0-72h 1.03 1.04 1.03 1.10 1.00 1.06 0.86 0.75 0.41 0.15 0-72h -3.93 -4.89 -3.80 -10.69 -1.33 -9.71 13.56 24.60 59.00 84.55 B 0.0380 0.0440 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0440 0.0430 0.0420 B 0.0065 0.0055 0.0060 0.0050 0.0055 0.0055 0.0065 0.0060 0.0065 0.0060 3d 1.07 0.97 0.93 0.97 0.86 0.96 0.77 0.72 0.45 0.15 NC 3d -8.11 2.65 6.25 1.89 13.52 1.10 22.07 27.72 54.95 84.55 C 0.0380 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0430 0.0420 C 0.0055 0.0055 0.0060 0.0050 0.0055 0.0055 0.0065 0.0060 0.0055 0.0060 1.03 0.94 0.90 0.85 0.81 0.85 0.75 0.54 0.50 0.15 0.97 -4.21 5.46 9.51 13.97 18.55 11.77 24.47 45.47 49.85 84.55 D 0.0370 0.0430 0.0430 0.0430 0.0440 0.0430 0.0430 0.0420 0.0450 0.0420 0.0430 0.0380 D 0.0055 0.0055 0.0060 0.0060 0.0055 0.0055 0.0055 0.0080 0.0045 0.0060 1.15 1.00 1.07 0.95 0.90 0.90 0.99 0.98 0.88 1.00 0.09 -16.29 -0.88 -7.44 4.23 9.33 7.24 -0.06 0.82 11.63 -1.34 E 0.0370 0.0420 0.0430 0.0420 0.0430 0.0430 0.0420 0.0420 0.0440 0.0420 0.0430 0.0380 E 0.0039 0.0049 0.0039 0.0049 0.0049 0.0049 0.0039 0.0039 0.0059 0.0039 1.06 0.94 1.04 1.00 0.94 0.95 0.86 0.70 0.50 0.12 9.37 -6.86 5.04 -5.28 -0.89 5.65 1.82 13.52 29.73 49.85 88.29 F 0.0380 0.0430 0.0440 0.0420 0.0430 0.0430 0.0430 0.0420 0.0430 0.0420 0.0430 0.0380 F 0.0055 0.0065 0.0050 0.0050 0.0055 0.0055 0.0055 0.0060 0.0045 0.0060 1.22 1.09 1.07 1.07 0.83 1.09 0.90 0.71 0.46 0.15 SC -22.70 -10.13 -7.66 -7.55 16.75 -12.22 8.74 28.37 53.39 84.55 G 0.0370 0.0420 0.0430 0.0430 0.0430 0.0470 0.0420 0.0420 0.0430 0.0430 0.0430 0.0380 G 0.0045 0.0055 0.0060 0.0050 0.0095 0.0045 0.0055 0.0060 0.0055 0.0060 AVG 1.082 0.995 0.993 0.998 0.886 0.983 0.828 0.682 0.462 0.146 0.99 AVG -9.16 -0.37 -0.20 -0.65 10.63 -1.45 16.47 31.18 53.41 85.30 H 0.0380 0.0370 0.0380 0.0370 0.0380 0.0370 0.0380 0.0360 0.0370 0.0370 0.0370 0.0360 H SD 0.077 0.068 0.075 0.095 0.082 0.094 0.065 0.081 0.038 0.017 0.08 SD 7.77 6.86 7.59 9.60 8.31 9.70 6.56 8.21 3.84 1.67 AVG 0.0375 0.0375 0.0375 0.0370 0.0380 0.0375 0.0375 0.0365 0.0370 0.0375 0.0370 0.0381 0.005 AVG 0.0055 0.0057 0.0058 0.0052 0.0063 0.0053 0.0059 0.0064 0.0053 0.0060 CV % 7.119 6.833 7.576 9.540 9.302 9.558 7.853 11.924 8.249 11.375 8.46 0.001 SD 0.0007 0.0004 0.0004 0.0004 0.0018 0.0004 0.0005 0.0009 0.0008 0.0000 14.368 CV % 12.8565 7.8459 7.7106 8.6003 28.3945 8.4380 9.2834 13.9754 15.7860 0.0000 AVG control 1.19 0.1415 11.857 24h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 24h atrazine [ug/L] 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 0.-24 1.15 1.21 1.18 1.39 1.16 1.32 0.80 0.51 0.43 0.15 0-24h 3.72 -1.68 1.21 -16.20 2.98 -35.77 32.75 57.18 63.89 87.08 A 0.0370 0.0380 0.0370 0.0370 0.0380 0.0380 0.0370 0.0370 0.0380 0.0390 0.0370 0.0380 A 1d 1.27 1.21 1.13 1.22 1.16 1.27 0.80 0.51 0.24 0.15 NC 1d -6.09 -1.68 5.62 -2.58 2.98 -30.61 32.75 57.18 79.79 87.08 B 0.0390 0.0580 0.0560 0.0570 0.0580 0.0550 0.0580 0.0510 0.0480 0.0480 0.0440 0.0420 B 0.0205 0.0185 0.0195 0.0200 0.0175 0.0205 0.0145 0.0100 0.0100 0.0070 1.16 1.16 1.07 1.10 1.10 1.21 0.97 0.22 0.29 0.51 1.17 2.98 2.98 10.28 7.91 7.91 -25.18 18.74 81.30 75.89 57.18 C 0.0380 0.0570 0.0560 0.0560 0.0550 0.0550 0.0570 0.0510 0.0480 0.0450 0.0440 0.0430 C 0.0195 0.0185 0.0185 0.0170 0.0175 0.0195 0.0145 0.0100 0.0070 0.0070 1.38 1.15 1.31 1.01 1.01 1.01 1.38 1.31 1.03 1.31 0.12 -15.31 3.63 -9.76 15.12 15.12 -4.50 -15.31 -9.76 13.87 -9.76 D 0.0380 0.0550 0.0550 0.0550 0.0560 0.0540 0.0560 0.0510 0.0480 0.0440 0.0470 0.0380 D 0.0175 0.0175 0.0175 0.0180 0.0165 0.0185 0.0145 0.0100 0.0060 0.0100 1.16 0.99 1.13 0.96 0.90 1.04 0.90 0.51 0.29 0.15 10.47 2.98 16.98 5.17 19.91 24.73 -6.92 24.73 57.18 75.89 87.08 E 0.0400 0.0540 0.0540 0.0530 0.0520 0.0520 0.0540 0.0530 0.0550 0.0530 0.0440 0.0380 E 0.0156 0.0156 0.0146 0.0136 0.0136 0.0136 0.0156 0.0146 0.0166 0.0146 1.41 1.21 1.07 1.03 0.42 1.17 0.90 0.51 0.37 0.15 SC -18.50 -1.68 10.28 13.70 64.56 -20.74 24.73 57.18 68.59 87.08 F 0.0380 0.0550 0.0550 0.0530 0.0510 0.0510 0.0530 0.0500 0.0480 0.0440 0.0440 0.0380 F 0.0175 0.0175 0.0155 0.0130 0.0135 0.0155 0.0135 0.0100 0.0060 0.0070 AVG 1.229 1.157 1.115 1.139 0.947 1.200 0.874 0.453 0.324 0.225 1.21 AVG -2.98 2.99 6.51 4.55 20.63 -23.84 26.74 62.01 72.81 81.10 G 0.0370 0.0560 0.0560 0.0550 0.0520 0.0520 0.0520 0.0500 0.0480 0.0460 0.0440 0.0380 G 0.0185 0.0185 0.0175 0.0140 0.0145 0.0145 0.0135 0.0100 0.0080 0.0070 SD 0.114 0.096 0.046 0.170 0.312 0.107 0.072 0.129 0.077 0.160 0.14 SD 9.57 8.08 3.84 14.25 26.13 11.02 6.00 10.78 6.42 13.37 H 0.0380 0.0370 0.0380 0.0380 0.0380 0.0370 0.0380 0.0360 0.0380 0.0370 0.0370 0.0360 H CV % 9.294 8.329 4.112 14.929 32.922 8.899 8.194 28.383 23.614 70.741 11.70 AVG 0.0381 0.0375 0.0375 0.0375 0.0380 0.0375 0.0375 0.0365 0.0380 0.0380 0.0370 0.0384 0.016 AVG 0.0187 0.0181 0.0177 0.0164 0.0159 0.0177 0.0141 0.0100 0.0074 0.0076 AVG control 1.08 0.1406 13.041 0.002 SD 0.0013 0.0005 0.0015 0.0029 0.0018 0.0026 0.0005 0.0000 0.0017 0.0013 0-48 1.10 1.38 1.07 1.19 1.04 1.14 0.87 0.72 0.35 0.11 0-48h -2.29 -28.32 0.30 -10.78 3.56 -17.38 19.35 32.90 67.85 89.65 13.558 CV % 6.9724 3.0261 8.3799 17.5669 11.4251 14.6239 3.8846 0.0000 22.6124 17.6532 2d 1.19 1.37 0.98 1.06 0.83 1.06 0.75 0.68 0.39 0.11 NC 1d -10.82 -26.70 9.21 1.86 22.90 -9.02 30.64 36.68 63.82 89.65 48h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 48h atrazine [ug/L] 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 0.95 0.93 0.95 0.89 0.85 0.93 0.80 0.47 0.40 0.11 1.04 11.60 13.52 11.44 17.55 21.32 3.78 26.21 56.36 62.97 89.65 A 0.0390 0.0390 0.0390 0.0390 0.0400 0.0440 0.0390 0.0390 0.0390 0.0400 0.0410 0.0400 A 1.30 1.35 1.16 1.00 0.89 0.89 1.08 1.07 0.92 1.15 0.11 -20.87 -25.14 -7.95 7.36 17.25 7.94 -0.50 0.87 14.65 -6.79 B 0.0400 0.0970 0.1260 0.0900 0.0940 0.0850 0.0920 0.0750 0.0640 0.0520 0.0470 0.0430 B 0.0590 0.0875 0.0515 0.0545 0.0440 0.0535 0.0370 0.0255 0.0130 0.0075 1.08 1.24 1.14 1.08 0.94 1.03 0.80 0.61 0.45 0.11 10.99 -0.47 -14.94 -5.37 -0.33 12.87 -6.70 26.21 43.02 58.55 89.65 C 0.0390 0.0980 0.1230 0.0810 0.0810 0.0700 0.0840 0.0670 0.0620 0.0510 0.0470 0.0430 C 0.0600 0.0845 0.0425 0.0415 0.0290 0.0455 0.0290 0.0235 0.0120 0.0075 1.22 1.33 1.07 1.15 0.69 1.19 0.83 0.64 0.39 0.04 SC -13.49 -23.28 0.30 -6.32 35.71 -22.67 22.90 40.81 63.82 96.29 D 0.0390 0.0750 0.0740 0.0790 0.0750 0.0710 0.0740 0.0650 0.0590 0.0490 0.0470 0.0390 D 0.0370 0.0355 0.0405 0.0355 0.0300 0.0355 0.0270 0.0205 0.0100 0.0075 AVG 1.112 1.250 1.044 1.074 0.870 1.070 0.808 0.626 0.395 0.097 1.10 AVG -3.10 -15.95 3.17 0.40 19.27 -10.40 25.06 41.95 63.40 90.98 E 0.0410 0.0930 0.1130 0.0800 0.0760 0.0690 0.0740 0.0730 0.0770 0.0790 0.0460 0.0390 E 0.0534 0.0734 0.0404 0.0364 0.0294 0.0294 0.0344 0.0334 0.0374 0.0394 SD 0.107 0.186 0.075 0.117 0.129 0.099 0.045 0.096 0.036 0.032 0.14 SD 9.89 17.26 6.97 10.81 11.99 10.20 4.22 8.94 3.31 2.97 F 0.0400 0.0860 0.1160 0.0870 0.0830 0.0770 0.0820 0.0650 0.0590 0.0500 0.0470 0.0390 F 0.0480 0.0775 0.0485 0.0435 0.0360 0.0435 0.0270 0.0205 0.0110 0.0075 CV % 9.592 14.887 7.199 10.849 14.856 9.238 5.629 15.404 9.054 32.899 12.74 G 0.0390 0.0900 0.1170 0.0900 0.0890 0.0790 0.0870 0.0670 0.0600 0.0510 0.0460 0.0390 G 0.0520 0.0785 0.0515 0.0495 0.0380 0.0485 0.0290 0.0215 0.0120 0.0065 H 0.0390 0.0370 0.0380 0.0380 0.0390 0.0380 0.0380 0.0370 0.0380 0.0380 0.0380 0.0370 H GRI atrazine [ug/L] AVG 0.0395 0.0380 0.0385 0.0385 0.0395 0.0410 0.0385 0.0380 0.0385 0.0390 0.0395 0.0396 0.042 AVG 0.0512 0.0727 0.0469 0.0449 0.0354 0.0453 0.0298 0.0223 0.0116 0.0073 c 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 125 250 500 1000 0.012 SD 0.0094 0.0212 0.0051 0.0073 0.0061 0.0066 0.0041 0.0022 0.0011 0.0004 AVG control 0.96 0.2295 23.822 log c 0.59 0.89 1.19 1.49 1.80 2.10 2.40 2.70 3.00 27.391 CV % 18.2907 29.1694 10.9347 16.3360 17.3677 14.6762 13.9171 9.7217 9.8291 6.1262 24-48 1.06 1.55 0.97 1.00 0.92 0.96 0.94 0.94 0.26 0.07 0h AVG 72h 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 72h atrazine [ug/L] 3.91 7.81 15.63 31.25 62.5 0 125 250 500 1000 1d 1.12 1.52 0.83 0.89 0.51 0.85 0.69 0.85 0.54 0.07 NC SD A 0.0400 0.0390 0.0390 0.0410 0.0400 0.0460 0.0390 0.0430 0.0390 0.0400 0.0400 0.0400 A 0.75 0.71 0.84 0.68 0.60 0.65 0.62 0.72 0.51 -0.29 0.91 24h AVG -2.98 2.99 6.51 4.55 20.63 26.74 62.01 72.81 81.10 B 0.0400 0.1810 0.1630 0.1710 0.1740 0.1540 0.1720 0.1250 0.0950 0.0610 0.0490 0.0430 B 0.1430 0.1245 0.1315 0.1345 0.1120 0.1335 0.0850 0.0565 0.0220 0.0095 1.23 1.55 1.02 0.98 0.77 0.77 0.79 0.83 0.81 0.99 0.20 SD 9.57 8.08 3.84 14.25 26.13 6.00 10.78 6.42 13.37 C 0.0400 0.1750 0.1380 0.1370 0.1320 0.1140 0.1360 0.1060 0.0900 0.0600 0.0490 0.0430 C 0.1370 0.0995 0.0975 0.0925 0.0720 0.0975 0.0660 0.0515 0.0210 0.0095 1.01 1.49 1.14 1.21 0.98 1.03 0.69 0.72 0.61 0.07 21.69 48h AVG -3.10 -15.95 3.17 0.40 19.27 25.06 41.95 63.40 90.98 D 0.0390 0.1600 0.1300 0.1280 0.1170 0.1040 0.1100 0.0920 0.0790 0.0590 0.0490 0.0390 D 0.1220 0.0915 0.0885 0.0775 0.0620 0.0715 0.0520 0.0405 0.0200 0.0095 1.03 1.45 1.08 1.26 0.96 1.21 0.76 0.77 0.41 -0.07 SC SD 9.89 17.26 6.97 10.81 11.99 4.22 8.94 3.31 2.97 E 0.0410 0.1650 0.1390 0.1360 0.1250 0.1130 0.1170 0.1150 0.1220 0.1200 0.0490 0.0390 E 0.1253 0.0993 0.0963 0.0853 0.0733 0.0733 0.0773 0.0753 0.0823 0.0803 AVG 0.994 1.343 0.972 1.009 0.794 0.940 0.742 0.798 0.465 -0.031 1.00 72h AVG -9.16 -0.37 -0.20 -0.65 10.63 16.47 31.18 53.41 85.30 F 0.0400 0.1700 0.1480 0.1540 0.1400 0.1330 0.1340 0.1120 0.0870 0.0590 0.0480 0.0390 F 0.1320 0.1095 0.1145 0.1005 0.0910 0.0955 0.0720 0.0485 0.0200 0.0085 SD 0.144 0.357 0.139 0.238 0.225 0.207 0.120 0.095 0.134 0.156 0.23 SD 7.77 6.86 7.59 9.60 8.31 6.56 8.21 3.84 1.67 G 0.0380 0.2110 0.1840 0.1870 0.1620 0.1550 0.1560 0.1230 0.0890 0.0610 0.0490 0.0400 G 0.1730 0.1455 0.1475 0.1225 0.1130 0.1175 0.0830 0.0505 0.0220 0.0095 CV % 14.469 26.620 14.299 23.580 28.304 22.071 16.189 11.910 28.888 -504.862 23.00 H 0.0390 0.0370 0.0380 0.0380 0.0390 0.0380 0.0380 0.0370 0.0380 0.0380 0.0390 0.0370 H AVG control 0.79 0.1517 19.178 AVG 0.0396 0.0380 0.0385 0.0395 0.0395 0.0420 0.0385 0.0400 0.0385 0.0390 0.0395 0.0397 0.092 AVG 0.1414 0.1141 0.1159 0.1055 0.0900 0.1031 0.0716 0.0495 0.0210 0.0093 48-72 0.89 0.35 0.94 0.90 0.93 0.91 0.83 0.80 0.53 0.24 GraphPad Analysis 0.020 SD 0.0193 0.0214 0.0242 0.0230 0.0230 0.0236 0.0135 0.0058 0.0010 0.0004 1d 0.83 0.16 0.83 0.80 0.91 0.76 0.82 0.78 0.56 0.24 NC For GraphPad prism For GraphPad prism log(agonist) vs. normalized response -- Variable slope 21.346 CV % 13.6274 18.7931 20.8383 21.7597 25.5918 22.8460 18.8055 11.7797 4.7619 4.8087 1.19 0.95 0.78 0.78 0.73 0.70 0.66 0.68 0.69 0.24 0.83 72h % Growth rate inhibition c log c 1 2 3 4 5 c log c 1 2 3 4 5 Best-fit values 0.85 0.30 0.87 0.85 0.91 0.91 0.81 0.81 0.79 0.71 0.09 atrazine [ug/L] 3.91 0.591760035 -3.93 -8.11 -4.21 -6.86 -22.70 SC 0 #NUM! -9.71 1.10 11.77 1.82 -12.22 LogEC50 2.583 1.01 0.35 0.86 0.84 0.93 0.79 0.98 0.86 0.60 0.13 10.85 7.81 0.89279003 -4.89 2.65 5.46 5.04 -10.13 125 2.096910013 13.56 22.07 24.47 13.52 8.74 HillSlope 1.403 1.20 0.62 1.05 0.91 1.09 0.88 1.05 0.85 0.61 0.38 SC 15.63 1.193820026 -3.80 6.25 9.51 -5.28 -7.66 250 2.397940009 24.60 27.72 45.47 29.73 28.37 EC50 383.1 AVG SD CV% AVG 1.024 0.485 0.892 0.846 0.917 0.810 0.868 0.795 0.597 0.243 0.77 31.25 1.494850022 -10.69 1.89 13.97 -0.89 -7.55 500 2.698970004 59.00 54.95 49.85 49.85 53.39 95% CI (profile likelihood) OD 0 0.005 0.000699206 15.38594887 SD 0.173 0.305 0.106 0.057 0.129 0.089 0.154 0.072 0.063 0.090 0.15 62.50 1.795880017 -1.33 13.52 18.55 5.65 16.75 1000 3 84.55 84.55 84.55 88.29 84.55 LogEC50 "2,531 to 2,636" 1 0.015 0.001032796 6.973113301 CV % 16.854 62.783 11.862 6.796 14.090 10.948 17.748 9.107 10.519 37.213 19.77 HillSlope "1,183 to 1,676" 2 0.041 0.01337535 32.82742137 Atrazine - Growth Rate Inhibition 72h - Raphidocelis subcapitata EC50 "339,8 to 432,4" 3 0.087 0.016263456 18.72950783 EC50 383 ug/L Goodness of Fit EC20 143 ug/L Degrees of Freedom 43 R squared 0.9354 Sum of Squares 2465 Sy.x 7.571 Number of points # of X values 45 # Y values analyzed 45 H11 H12