PřF:Bi6405 Metody molek. biologie - cvič. - Informace o předmětu
Bi6405 Metody molekulární biologie - cvičení
Přírodovědecká fakultajaro 2016
- Rozsah
- 0/3/0. 3 kr. Ukončení: z.
- Vyučující
- doc. Mgr. Petr Beneš, Ph.D. (cvičící)
doc. RNDr. Jakub Neradil, Ph.D. (cvičící)
Mgr. Lucia Knopfová, Ph.D. (cvičící)
prof. RNDr. Jan Šmarda, CSc. (cvičící) - Garance
- prof. RNDr. Jan Šmarda, CSc.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: prof. RNDr. Jan Šmarda, CSc.
Dodavatelské pracoviště: Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta - Rozvrh
- Čt 7:00–12:50 D36/216, Pá 9:00–14:50 D36/216
- Předpoklady
- ( Ex_3065 Molekulární biologie || Imp_9115 Molekulární biologie || B3120 Molekulární biologie || B4030 Molekulární biologie || B5740 Molekulární biologie || B6130 Molekulární biologie || B7940 Molekulární biologie || B4020 Molekulární biologie || Bi4020 Molekulární biologie || Bi4035 Molekulární biologie - lab.cv. ) && NOW( Bi6400 Metody molekulární biologie ) && ! B6405 Metody molek. biologie - cvič.
Kurz vyžaduje znalost základních praktických návyků z oblasti mikrobiologie, biochemie a molekulární biologie, jako např. přípravu roztoků a kultivačních půd, sterilní manipulace s tekutinami,inokulace, centrifugace, atd. - Omezení zápisu do předmětu
- Předmět je určen pouze studentům mateřských oborů.
- Mateřské obory/plány
- Lékařská genetika a molekulární diagnostika (program PřF, B-BI)
- Molekulární biologie a genetika (program PřF, B-EXB)
- Molekulární biologie a genetika (program PřF, B-EXB, směr Molekulární biologie a genetika)
- Speciální biologie (program PřF, B-EXB)
- Speciální biologie (program PřF, B-EXB, směr Antropobiologie a antropogenetika)
- Speciální biologie (program PřF, B-EXB, směr Mikrobiologie a molekulární biotechnologie)
- Cíle předmětu
- Studenti v rámci tohoto kurzu získávají zkušenosti s manipulacemi s molekulami DNA in vitro, které jsou nutné pro přípravu jejich rekombinantích variant. Smyslem kurzu je výuka izolace čisté a koncentrované plazmidové DNA z bakterií, jejich enzymatická fragmentace, úpravy konců a ligace s jinými molekulami. Navíc si studenti osvojují elektroforetické techniky (DNA, proteiny), způsoby eluce DNA z gelu, immunoblotting, metody přenosu plazmidové DNA do eukaryotických buněk. Po absolvování tohoto kurzu budou studenti schopni provádět výše zmíněné postupy samostatně a správně je aplikovat při studiu různých biologických procesů.
- Osnova
- 1. Inokulace a kultivace bakteriálních buněk, nesoucích příslušné plazmidy. 2. Izolace plazmidové DNA z bakteriálních buněk na kolonách Qiagen. 3. Restrikční štěpení plazmidové DNA a úprava 5 přečnívajících konců DNA polymerázou. 4. Agarózová elektroforéza molekul DNA. 5. Eluce požadovaných fragmentů DNA z gelu a jejich přečištění 6. Spojení příslušných fragmentů DNA ligací. 7. Transformace kompetentních bakteriálních buněk. 8. Selekce transformantů. 9. Kontrola přítomnosti rekombinantních molekul v tranformantech (minipreparace plazmidu, restrikční analýza, elektroforéza). 10. Transfekce rekombinantních plazmidů do savčích buněk. 11. Příprava buněčného lyzátu, elektroforéza proteinů a immunobloting.
- Literatura
- GREEN, Michael R. a Joseph SAMBROOK. Molecular cloning : a laboratory manual. 4th ed. New York [N.Y.]: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2012, xxxiii, s. ISBN 9781936113422. info
- Výukové metody
- Krátká teoretická příprava následovaná laboratorním cvičením, diskuse se studenty.
- Metody hodnocení
- zápočet se udílí za aktivní přístup, účast ve výuce a vypracování kvalitních protokolů z jednotlivých úloh.
- Navazující předměty
- Další komentáře
- Studijní materiály
Předmět je vyučován každoročně. - Nachází se v prerekvizitách jiných předmětů
- Statistika zápisu (jaro 2016, nejnovější)
- Permalink: https://is.muni.cz/predmet/sci/jaro2016/Bi6405