BX940c Molekulární biologie a genetika - cvičení

Přírodovědecká fakulta
podzim 1999
Rozsah
0/0/5. 5 kr. Ukončení: z.
Vyučující
prof. RNDr. Roman Pantůček, Ph.D. (cvičící)
Garance
prof. RNDr. Roman Pantůček, Ph.D.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: prof. RNDr. Roman Pantůček, Ph.D.
Předpoklady
NOW( B7940p Molekulární biologie - předn. )
Omezení zápisu do předmětu
Předmět je určen pouze studentům mateřských oborů.

Předmět si smí zapsat nejvýše 24 stud.
Momentální stav registrace a zápisu: zapsáno: 0/24, pouze zareg.: 0/24
Mateřské obory/plány
Osnova
  • Izolace plazmidového vektoru (pUC18, pBR322) srovnání různých metod (izolace plazmidové DNA metodou alkalické lyze; izolace plazmidové DNA metodou lyze varem; "QIAGEN Plasmid Kit" nebo "ROCHE High Pure Isolation Kit"). Štěpení DNA restrikčními endonukleázami a gelová elektroforéza DNA (štěpení plazmidové DNA restrikčními endonukleázami EcoRI, PstI, a HaeIII; restrikční mapování; horizontální elektroforéza DNA v agarózovém gelu; stanovení velikosti restrikčních fragmentů a sestavení restrikční mapy). Izolace a příprava cizorodé genomové DNA pro klonování (izolace fragmentu DNA z agarózového gelu; stanovení koncentrace a čistoty DNA spektrofotometricky; štěpení cizorodé DNA a vektoru vhodnými restrikčními endonukleázami). Klonování ve vektorech řady pUC (defosforylace konců vektoru alkalickou fosfatázou; ligace vektorové a cizorodé DNA T4 DNA ligázou; příprava kompetentních buněk E. coli DH5a pro transformaci; transformace kompetentních buněk; identifikace rekombinantů na ampicilinových plotnách; analýza klonů). Ultracentrifugace v hustotním gradientu (příprava preformovaného sacharózového gradientu; purifikace fágových části ultracentrifugací v gradientu CsCl). Analýza bakteriálního genomu - identifikace specifických genů pomocí hybridizace a PCR, RFLP-fingerprinting. Izolace bakteriální DNA z různých kmenů Staphylococcus aureus. DNA hybridizace (neradioaktivní značení DNA digoxigeninem, příprava genově specifické sondy; příprava roztoků pro hybridizaci; Southernův přenos DNA na hybridizační membránu; hybridizace DNA se značenou sondou; imunologická detekce). PCR (polymerázová řetězová reakce) (optimalizace primerů; identifikace genů pro koagulázu, TSST-1 toxin a rezistence k meticilinu; RAPD-PCR). Pulzní gelová elektroforéza (příprava vzorků; štěpení vzorků restrikční endonukleázou SmaI; pulzní elektroforéza). Sekvencování DNA (teoretický výklad - různé metody, zpracování sekvencí DNA a proteinů na PC; příprava denaturačního polyakrylamidového gelu pro sekvencování).
Další komentáře
Předmět je vyučován každoročně.
Výuka probíhá každý týden.
  • Statistika zápisu (nejnovější)
  • Permalink: https://is.muni.cz/predmet/sci/podzim1999/BX940c