Bi7722c Metody analýzy mikroorganizmů II. - cvičení

Přírodovědecká fakulta
podzim 2002
Rozsah
0/4/0. 4 kr. Ukončení: z.
Vyučující
doc. Ing. Bohuslav Rittich, CSc. (cvičící)
doc. RNDr. Alena Španová, CSc. (cvičící)
Garance
doc. RNDr. Alena Španová, CSc.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: doc. RNDr. Alena Španová, CSc.
Předpoklady
Bi6721 Spec. met. an. mikroorg. I.
Omezení zápisu do předmětu
Předmět je nabízen i studentům mimo mateřské obory.
Předmět si smí zapsat nejvýše 12 stud.
Momentální stav registrace a zápisu: zapsáno: 0/12, pouze zareg.: 0/12, pouze zareg. s předností (mateřské obory): 0/12
Mateřské obory/plány
Cíle předmětu
I. Práce s rekombinantní DNA. Naočkování kultury E.coli JM109(pUC19::dim1), příprava roztoků pro izolaci plasmidové DNA. Izolace rekombinantního plasmidu pUC19::dim1. Stanovení množství DNA pomocí gelové elektroforézy s vhodnými standardy. Změna rozpouštěcího pufru. Přenos nerekombinantní plasmidové DNA pUC19 a rekombinantní plasmidové DNA pUC19::dim1 do bakteriálních buněk E. coli JM109 metodou elektrotransformace. Výsev a selekce transformantů nesoucích rekombinantní a nerekombinantní plasmid.Vyhodnocení elektrotransformace. II. DNA/DNA hybridisace. Příprava DNA sondy z plasmidu pUC19::dim1 - neradioaktivní značení digoxigeninem. Příprava a provedení dot blotu a Southern blotu. DNA/DNA hybridizace za stringentních podmínek. Imunologická detekce hybridizačního produktu. Vyhodnocení hybridizace.
Osnova
  • 1. Bezpečnost práce v mikrobiologické a molekulárně biotechnologické laboratoři. 2. Příprava materiálu pro izolaci rekombinantní DNA. Naočkování kultury, příprava roztoků. 3. Izolace rekombinantní DNA pUC19::dim1 z E. coli JM109 (pUC19::dim1). 4. Změna pufru, v němž je DNA rozpuštěna. Gelová elektroforéza izolované DNA. 5. Přenos rekombinantní plasmidové DNA do bakteriálních buněk E. coli JM109 metodou elektrotransformace. 6. Výsev a selekce transformantů. 7. Vyhodnocení elektrotransformace.Příprava materiálu pro Southern blot. 8. Příprava plasmidové DNA sondy - neradioaktivní značení digoxigeninem. 9. Příprava dot blotu. Příprava 1% agarosového gelu. 10. Gelová elektroforéza rekombinantní plasmidové DNA s polu se značenými a neznačenými kontrolami. 11. Southern blot. 12. Provedení DNA/DNA hybridizace při vysoké stringenci. 13. Imunologická detekce hybridisačního produktu. 14. Vyhodnocení hybridizace. 15. Zápočtový test. Závěrečné vyhodnocení protokolů.
Literatura
  • F. Sambrook, R.W. Russell Molecular Cloning. A Laboratory Manual. 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2001.
Další komentáře
Předmět je vyučován každoročně.
Výuka probíhá každý týden.
  • Statistika zápisu (nejnovější)
  • Permalink: https://is.muni.cz/predmet/sci/podzim2002/Bi7722c