PřF:Bi7312 Prakt. z mol. biol. eukaryot - Informace o předmětu
Bi7312 Praktikum z molekulární biologie eukaryot
Přírodovědecká fakultapodzim 2019
- Rozsah
- 0/2/0. 2 kr. Ukončení: z.
- Vyučující
- doc. Mgr. Petr Beneš, Ph.D. (cvičící)
Mgr. Lucia Knopfová, Ph.D. (cvičící)
Mgr. Jarmila Navrátilová, Ph.D. (cvičící)
RNDr. Martin Šrámek, Ph.D. (pomocník)
Mgr. Monika Dúcka, Ph.D. (pomocník)
Ing. Barbora Adamová, Ph.D. (pomocník)
Mgr. Kamila Říhová, Ph.D. (pomocník)
Mgr. Ivana Kupčíková, DiS. (pomocník) - Garance
- doc. Mgr. Petr Beneš, Ph.D.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: doc. Mgr. Petr Beneš, Ph.D.
Dodavatelské pracoviště: Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta - Rozvrh seminárních/paralelních skupin
- Bi7312/01: Rozvrh nebyl do ISu vložen.
Bi7312/02: Rozvrh nebyl do ISu vložen.
Bi7312/03: Rozvrh nebyl do ISu vložen.
Bi7312/04: Rozvrh nebyl do ISu vložen.
Bi7312/05: Rozvrh nebyl do ISu vložen.
Bi7312/06: Rozvrh nebyl do ISu vložen. - Předpoklady
- NOW( Bi7090 Molekulární biologie eukaryot )
Kurz vyžaduje znalost základních praktických návyků z oblasti mikrobiologie, biochemie a molekulární biologie, jako např. přípravu roztoků a kultivačních půd, sterilní manipulace s tekutinami, práce s automatickými pipetami, centrifugace, atd. - Omezení zápisu do předmětu
- Předmět je určen pouze studentům mateřských oborů.
Předmět si smí zapsat nejvýše 30 stud.
Momentální stav registrace a zápisu: zapsáno: 0/30, pouze zareg.: 0/30 - Mateřské obory/plány
- Bioanalytická laboratorní diagnostika ve zdravotnictví - Lékařská genetika a molekulární diagnostika (program PřF, N-LGM)
- Biologie člověka (program PřF, N-BCL)
- Lékařská genetika a molekulární diagnostika pro odborné pracovníky v laboratorních metodách (program PřF, N-BI)
- Molekulární biologie a genetika (program PřF, N-EXB)
- Molekulární biologie a genetika (program PřF, N-MBG)
- Cíle předmětu
- Cílem předmětu je seznámit studenty formou praktických cvičení se základními metodami analýzy buněčného růstu, diferenciace, migrace a buněčné smrti na modelových nádorových liniích.
- Výstupy z učení
- Po absolvování tohoto kurzu získají studenti praktické zkušenosti jak provádět základní manipulace s živočišnými a lidskými buňkami in vitro. Budou tak schopní nejen provádět pasážování adherentních a suspenzních buněčných liniía, ale také je geneticky upravovat, analyzovat jejich morfologii, diferenciaci, proliferaci, migraci a apoptózu.
- Osnova
- 1. Pasážováni savčích buněčných linií, 2D a 3D kultivace. 2. Přechodná transfekce savčích buněk plazmidem cmvGFP elektroporací a analýza účinnosti transfekce fluorescenční mikroskopií a průtokovou cytometrií. 3. Analýza aktivity transkripčních faktorů (přechodná transfekce, test na aktivitu luciferázy a beta-galaktosidázy) 4. Studium buněčné morfologie, exprese proteinů a jejich lokalizace v buňce během diferenciace savčích buněk (cytocentrifugace, fixace a barvení buněk, světelná a fluorescenční mikroskopie, frakcionace buněk, elektroforéza proteinů a imunobloting, imunocytofluorescence, fagocytóza). 5. Analýza buněčných markerů apoptózy (značení mrtvých buněk eosinem, analýza jaderné morfologie, štěpení proteinu PARP a aktivace kaspázy 3, externalizace fosfatidylserinu, stanovení mitochondriálního potenciálu, měření reaktivních kyslíkových radikálů pomocí průtokové cytometrie). 6. Určení buněčné proliferace, migrace a senescence (počítání buněk, značení buněk krystalovou violetí, analýza buněčného cyklu, analýza proliferace a migrace v reálném čase, detekce SA-beta-gal). 7. Stanovení viability 3D modelů (sféroidů) barvením calcein-AM/propidium jodid s hodnocením konfokální mikroskopií, testem MTT a ATP. Imunohistochemie.
- Literatura
- GREEN, Michael R. a Joseph SAMBROOK. Molecular cloning : a laboratory manual. 4th ed. New York [N.Y.]: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2012, xxxiii, s. ISBN 9781936113422. info
- FRESHNEY, R. Ian. Culture of animal cells : a manual of basic technique. 5th ed. Hoboken, N.J.: Wiley-Liss, 2005, xxvi, 642. ISBN 0471453293. info
- Apoptosis methods and protocols. Edited by Hugh J. M. Brady. Totowa, N.J.: Humana Press, 2004, xi, 304. ISBN 0896038734. info
- Výukové metody
- krátká teoretická příprava následovaná laboratorním cvičením a zakončená skupinovým projektem
- Metody hodnocení
- zápočet se udílí za aktivní přístup, účast ve výuce a zpracování závěrečné skupinové úlohy.
- Další komentáře
- Studijní materiály
Předmět je dovoleno ukončit i mimo zkouškové období.
Předmět je vyučován každoročně.
- Statistika zápisu (podzim 2019, nejnovější)
- Permalink: https://is.muni.cz/predmet/sci/podzim2019/Bi7312