Bi0322c Specializované metody analýzy pigmentů a antioxidantů v rostlinách - cvičení

Přírodovědecká fakulta
jaro 2011 - akreditace
Rozsah
0/2. 2 kr. Ukončení: z.
Vyučující
Mgr. Hana Cempírková, Ph.D. (cvičící)
Garance
prof. Ing. Miloš Barták, CSc.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: Věra Faronová
Omezení zápisu do předmětu
Předmět je otevřen studentům libovolného oboru.
Předmět si smí zapsat nejvýše 10 stud.
Momentální stav registrace a zápisu: zapsáno: 0/10, pouze zareg.: 0/10, pouze zareg. s předností (mateřské obory): 0/10
Cíle předmětu
Během praktických cvičení si studenti vyzkoušejí extrakci a kvantifikaci pigmentů, glutathionu a antioxidačních enzymů z různého rostlinného materiálu. Na jednoduchých experimentech bude demonstrován vliv stresových podmínek na stanovované látky v rostlinách. Studenti si také osvojí základní metody zpracování rostlinného materiálu a přípravy vzorků. V neposlední řadě budou studenti po absolvování cvičení schopni pokročilého ovládání spektrofotometru a HPLC chromatografu i vyhodnocování a zpracování dat z těchto přístrojů.
Osnova
  • 1. Úvodní cvičení. Seznámení s bezpečností práce v laboratoři, podmínkami zápočtu.
  • 2. Extrakce pigmentů z rostlinné vzorku. Různá extrakční činidla.
  • 3. Tenkovrstvá chromatografie pigmentů. Absorpční spektra pigmentů.
  • 4. Příprava standardů z komerčně vyrobených pigmentů. Analýza standardů pigmentů na HPLC.
  • 5. Vyhodnocení chromatogramů pigmentů. Založení experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin (vyklíčený hrách a slunečnice do dvou světelných režimů – vysoké a nízké světlo)
  • 6. Příprava vzorků. Mrazové vysoušení. Mletí. Zásady práce se vzorky.
  • 7. Studium vlivu nízké teploty na aktivitu antioxidačních enzymů – I. kataláza pomocí kyslíkové elektrody.
  • 8. Studium vlivu nízké teploty na aktivitu antioxidačních enzymů – II. askorbátperoxidáza spektrofotometricky. Stanovení celkového množství proteinů Bradfordovou metodou.
  • 9. Odběr vzorků z experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin. Kvantifikace pigmentů spektrofotometricky.
  • 10. Extrakce pigmentů ze vzorků z experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin. Analýza na HPLC. Kvantifikace pomocí standardů.
  • 11. Extrakce glutathionu ze vzorků z experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin a stanovení jeho množství a redoxního stavu pomocí HPLC.
  • 12. Extrakce askorbátu ze vzorků z experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin a stanovení jeho množství a redoxního stavu pomocí HPLC.
  • 13. Analýza chromatogramů ze cv. č. 10 až 12.
Metody hodnocení
skupinové projekty, domácí úkoly závěrečný skupinový projekt
Další komentáře
Předmět je vyučován každoročně.
Výuka probíhá každý týden.
na vyžádání možná výuka v angličtině.
Předmět je zařazen také v obdobích jaro 2008 - akreditace, jaro 2009, jaro 2010, jaro 2011, jaro 2012 - akreditace.