Bi0322c Specializované metody analýzy pigmentů a antioxidantů v rostlinách - cvičení

Přírodovědecká fakulta
jaro 2012 - akreditace

Údaje z období jaro 2012 - akreditace se nezveřejňují

Rozsah
0/2. 2 kr. Ukončení: z.
Vyučující
Mgr. Hana Cempírková, Ph.D. (cvičící)
Garance
prof. Ing. Miloš Barták, CSc.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: Naděžda Bílá
Dodavatelské pracoviště: Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Předpoklady
Zájem o praktické laboratorní dovednosti v oblasti metod separace a determinace rostlinných pigmentů
Omezení zápisu do předmětu
Předmět je otevřen studentům libovolného oboru.
Předmět si smí zapsat nejvýše 10 stud.
Momentální stav registrace a zápisu: zapsáno: 0/10, pouze zareg.: 0/10, pouze zareg. s předností (mateřské obory): 0/10
Cíle předmětu
Během praktických cvičení si studenti vyzkoušejí extrakci a kvantifikaci pigmentů, glutathionu a antioxidačních enzymů z různého rostlinného materiálu. Na jednoduchých experimentech bude demonstrován vliv stresových podmínek na stanovované látky v rostlinách. Studenti si také osvojí základní metody zpracování rostlinného materiálu a přípravy vzorků. V neposlední řadě budou studenti po absolvování cvičení schopni pokročilého ovládání spektrofotometru a HPLC chromatografu i vyhodnocování a zpracování dat z těchto přístrojů.
Osnova
  • 1. Úvodní cvičení. Seznámení s bezpečností práce v laboratoři, podmínkami zápočtu.
  • 2. Extrakce pigmentů z rostlinné vzorku. Různá extrakční činidla.
  • 3. Tenkovrstvá chromatografie pigmentů. Absorpční spektra pigmentů.
  • 4. Příprava standardů z komerčně vyrobených pigmentů. Analýza standardů pigmentů na HPLC.
  • 5. Vyhodnocení chromatogramů pigmentů. Založení experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin (vyklíčený hrách a slunečnice do dvou světelných režimů – vysoké a nízké světlo)
  • 6. Příprava vzorků. Mrazové vysoušení. Mletí. Zásady práce se vzorky.
  • 7. Studium vlivu nízké teploty na aktivitu antioxidačních enzymů – I. kataláza pomocí kyslíkové elektrody.
  • 8. Studium vlivu nízké teploty na aktivitu antioxidačních enzymů – II. askorbátperoxidáza spektrofotometricky. Stanovení celkového množství proteinů Bradfordovou metodou.
  • 9. Odběr vzorků z experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin. Kvantifikace pigmentů spektrofotometricky.
  • 10. Extrakce pigmentů ze vzorků z experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin. Analýza na HPLC. Kvantifikace pomocí standardů.
  • 11. Extrakce glutathionu ze vzorků z experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin a stanovení jeho množství a redoxního stavu pomocí HPLC.
  • 12. Extrakce askorbátu ze vzorků z experimentu Světelné podmínky během růstu rostlin a stanovení jeho množství a redoxního stavu pomocí HPLC.
  • 13. Analýza chromatogramů ze cv. č. 10 až 12.
Literatura
    doporučená literatura
  • Plant Pigments And Their Manipulations (ISBN 0849323509 )
Výukové metody
laboratorní praktika separace a identifikace pigmentů (projekty)
Metody hodnocení
skupinové projekty, domácí úkoly závěrečný skupinový projekt
Další komentáře
Předmět je vyučován každoročně.
Výuka probíhá každý týden.
na vyžádání možná výuka v angličtině.
Předmět je zařazen také v obdobích jaro 2008 - akreditace, jaro 2011 - akreditace, jaro 2009, jaro 2010, jaro 2011.